子宫内膜癌分子标志物与临床病理的关系研究

徐小仙，苏　影，朱小平，闫鼎鼎，楼寒梅

(1.浙江省肿瘤医院妇科，浙江 杭州 310022；2.浙江省肿瘤医院病理科，浙江 杭州 310022；3.衢州市人民医院放疗科，浙江 衢州 324000)



子宫内膜癌分子标志物与临床病理的关系研究

徐小仙1，苏影2，朱小平3，闫鼎鼎1，楼寒梅1

(1.浙江省肿瘤医院妇科，浙江 杭州 310022；2.浙江省肿瘤医院病理科，浙江 杭州 310022；3.衢州市人民医院放疗科，浙江 衢州 324000)

目的探索子宫内膜癌患者雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、表皮生长因子受体2(CerbB-2)、增殖细胞核抗原(Ki-67)的表达以及其与临床和病理的关系。方法选择2013年8月至2014年8月于浙江省肿瘤医院行手术治疗的72例子宫内膜癌患者为研究对象，应用免疫组化法测定不同病理分期、分化程度以及浸润转移等ER、PR、CerbB-2、Ki-67各项表达情况。结果手术-病理分期Ⅲ期～Ⅳ期者ER、PR阳性率均明显低于Ⅰ期和Ⅱ期，而Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期者CerbB-2、Ki-67阳性率均明显高于I期，上述差异均有统计学意义(χ2值分别为6.73、5.35、6.92、6.02、7.23、7.83、6.85、7.03，均P<0.05)。组织学分化G3级者ER、PR阳性率均明显低于G1级和G2级者，而G2、G3级者CerbB-2、Ki-67阳性率均明显高于G1级者，且G3级者CerbB-2、Ki-67阳性率均明显高于G2级者，上述差异均有统计学意义(χ2值分别为7.53、6.68、7.90、7.24、9.22、12.64、6.82、7.53，均P<0.05)。肌层浸润深度>1/2者ER、PR阳性表达率均显著低于肌层浸润深度≤1/2者和无肌层浸润者，而肌层浸润深度>1/2者CerbB-2、Ki-67阳性率显著高于肌层浸润深度≤1/2者和无肌层浸润者，且肌层浸润≤1/2者CerbB-2、Ki-67阳性率显著高于无肌层浸润者，差异均有统计学意义(χ2值分别为7.74、7.63、7.54、7.16、5.86、7.02、6.06、7.44，均P<0.05)。有淋巴结转移者ER、PR阳性率均明显低于无淋巴结转移者，差异均有统计学意义(χ2值分别为7.74、7.63，均P<0.05)，而有淋巴结转移者和无淋巴结转移者CerbB-2、Ki-67阳性率比较无显著差异(χ2值分别为1.22、2.05，均P>0.05)。结论ER、PR、CerbB-2、Ki-67表达与子宫内膜癌临床和病理有密切相关性，联合应用可作为判断疾病预后和指导临床治疗的依据。

子宫内膜癌；雌激素受体；孕激素受体；表皮生长因子受体2；增殖细胞核抗原；免疫组织化学

(1.DepartmentofGynecology,ZhejiangCancerHospital,ZhejiangHangzhou310022,China;2.DepartmentofPathology,ZhejiangCancerHospital,ZhejiangHangzhou310022,China;3.DepartmentofRadiotherapy,QuzhouPeople’sHospital,ZhejiangQuzhou324000,China)

[Keywords]endometrialcarcinoma;estrogenreceptor(ER);progesteronereceptor(PR);epidermalgrowthfactorreceptor2 (CerbB-2);proliferatingcellnuclearantigen(Ki-67);immunohistochemistry

子宫内膜癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，对女性健康威胁极大，随着近些年生活水平的提高和生活压力的增大，女性子宫内膜癌的患病率在世界范围内均呈上升趋势，且患者多趋向于年轻化[1-2]。临床研究证实，子宫内膜癌是一种激素依赖性肿瘤，其发病与雌、孕激素的表达有密切相关性[3]。本研究采用免疫组化法检测雌激素受体(estrogenreceptor，ER)、孕激素受体(progesteronereceptor，PR)、表皮生长因子受体2(epidermalgrowthfactorreceptor2，CerbB-2)、增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，Ki-67)的表达，并分析其与临床和病理的关系，以为临床治疗和预后评估提供参考。

1资料与方法

1.1研究对象

选择2013年8月至2014年8月于浙江省肿瘤医院行手术治疗的72例子宫内膜癌患者为研究对象，采用诊断性刮宫或手术病理证实为内膜样腺癌，且术前均未进行放化疗或内分泌治疗。患者年龄为40～76岁，平均(63.04±3.93)岁，其中包括绝经者28例，绝经年限均在1～23年，平均(10.23±1.19)年。孕次0～4次，平均(2.50±0.20)次，产次0～4次，平均(1.88±0.19)次。参照2009年国际妇产科联盟(InternationalUnionofObstetricsandGynecology，FIGO)推荐使用的子宫内膜癌患者手术-病理分期标准，即I期48例，Ⅱ期15例，Ⅲ期7例和Ⅳ期2例。组织学分级：G1(高分化)55例，G2(中分化)10例和G3(低分化)7例。肌层浸润程度：无肌层浸润13例，肌层浸润深度≤1/2肌壁者36例，肌层浸润深度>1/2肌壁者23例。有淋巴结转移8例，无淋巴结转移64例。

1.2研究方法

标本均经4%甲醛常规固定24h以上，石蜡包埋。取标本4μm连续切片，并用处理过的载玻片捞起，后置于60℃的恒温烤箱中烤片，30～40min后取出；经病理确认后将其常规脱蜡至水，使用3%双氧水室温孵育10min后蒸馏水冲洗。以0.01mol/L、pH7.4的乙二胺四乙酸进行热修复，后降至室温并PBS缓冲液冲洗。免疫组化采用S-P法，滴加一抗于4℃冰箱中保存过夜，恢复至室温后使用PBS液冲洗3次后滴加二抗，于37℃下孵育30min后取出，使用PBS液冲洗3次；使用二氨基联苯胺显色，5min后用自来水冲洗，苏木素复染，5min后水洗返蓝，脱水后封片。试剂盒为美国Zymed公司生产，且严格按照说明书进行操作。

1.3观察指标

ER、PR、Ki-67阳性表达均位于细胞核，呈棕黄色，CerbB-2阳性表达位于细胞膜呈棕黄色。将组织切片置于高倍镜下计数阳性细胞占同类细胞数目的百分比，结果阳性细胞数<10%即为阴性(-)；而阳性细胞数≥10%即为阳性(+)。结果均有2名与试验无关的专业人员进行判定。

1.4统计学方法

应用SPSS17.0统计学软件进行数据分析，计数资料均表示为例数(率)，且采用χ2检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

手术-病理分期Ⅲ～Ⅳ期者ER、PR阳性率均明显低于Ⅰ期和Ⅱ期，而Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期者CerbB-2、Ki-67阳性率均明显高于I期，上述差异均有统计学意义(χ2值分别为6.73、5.35、6.92、6.02、7.23、7.83、6.85、7.03，均P<0.05)。组织学分化G3级者ER、PR阳性率均明显低于G1级和G2级者，而G2、G3级者CerbB-2、Ki-67阳性率均明显高于G1级者，且G3级者CerbB-2、Ki-67阳性率均明显高于G2级者，上述差异均有统计学意义(χ2值分别为7.53、6.68、7.90、7.24、9.22、12.64、6.82、7.53，均P<0.05)。肌层浸润深度>1/2者ER、PR阳性表达率均显著低于肌层浸润深度≤1/2者和无肌层浸润者，而肌层浸润深度>1/2者CerbB-2、Ki-67阳性率显著高于肌层浸润深度≤1/2者和无肌层浸润者，且肌层浸润≤1/2者CerbB-2、Ki-67阳性率显著高于无肌层浸润者，差异均有统计学意义(χ2值分别为7.74、7.63、7.54、7.16、5.86、7.02、6.06、7.44，均P<0.05)。有淋巴结转移者ER、PR阳性率均明显低于无淋巴结转移者，差异均有统计学意义(χ2值分别为7.54、7.28，均P<0.05)，而有淋巴结转移者和无淋巴结转移者CerbB-2、Ki-67阳性率比较无显著差异(χ2值分别为1.22、2.05，均P>0.05)，见附表。

附表子宫内膜癌患者ER、PR、CerbB-2、Ki-67表达阳性及其与临床、病理的关系[n(%)]

Table　Expressions of ER, PR, CerbB-2 and Ki-67 in endometrial carcinoma patient and their relationship with clinicsand pathology [n(%)]

3讨论

3.1子宫内膜癌的发病特点及疾病诊断

子宫内膜癌是妇科最为常见的恶性肿瘤之一，也是女性最为常见的生殖道恶性肿瘤，其发病率在世界范围内均呈持续上升的趋势，虽然患者5年生存率较高，但仍有部分患者预后差，分析其组织类型、病理分期、组织学分化及肌层浸润程度、有无淋巴结转移等可能影响患者预后[4-5]。近些年的临床研究发现，子宫内膜癌的发生、发展以及患者治疗预后与其体内激素类受体表达有密切相关性，因此，针对这方面的研究也逐渐开展，以为准确判定患者预后以及选择合理治疗方案提供依据[6]。近些年，免疫组化技术有了不断提高，为疾病的诊断和临床治疗提供了可为可靠的依据。但至今还未发现一种具有高敏感性和特异性的指标[7]。

3.2雌孕激素受体与临床和病理的关系

ER和PR主要存在于女性的生殖系统和组织细胞中，但细胞癌变会导致受体产生和作用受损，且癌变发展到一定程度会明显减少甚至消失[8]。本研究结果显示，手术-病理分期Ⅲ～Ⅳ期者ER、PR阳性率均明显低于Ⅰ期和Ⅱ期，组织学分化G3级者ER、PR阳性率均明显低于G1级和G2级者，肌层浸润深度>1/2者ER、PR阳性表达率均显著低于肌层浸润深度≤1/2者和无肌层浸润者，有淋巴结转移者ER、PR阳性率均明显低于无淋巴结转移者(均P<0.05)。分析ER、PR的缺乏可能是子宫内膜癌患者病变恶性程度增高的主要表现，同时支持了子宫内膜癌为激素依赖性疾病的观点，临床检测其水平能够指导治疗、判定疗效和预后。

3.3表皮生长因子受体2、增殖细胞核抗原与临床和病理的关系

CerbB-2是一种细胞膜受体，在癌症的发病机制中均发挥一定作用，其正常情况为非激活状态，但与特异性配体结合后可调节细胞分裂、分化、增殖等，其正常组织中是无表达或低表达[8]。Ki-67是存在于增殖细胞和基质内的一种核蛋白，是临床用于检测恶性肿瘤细胞增殖的活性的最可靠指标，其阳性产物定位于细胞核，对判定肿瘤侵袭力及疾病预测和治疗方案选择上有较高的应用价值[9-10]。但本研究结果显示，手术-病理分期Ⅱ期和Ⅲ期-Ⅳ期者CerbB-2、Ki-67阳性率均明显高于I期，组织学分化G2、G3级者CerbB-2、Ki-67阳性率均明显高于G1级者，且G3级者CerbB-2、Ki-67阳性率均明显高于G2级者，肌层浸润深度>1/2者CerbB-2、Ki-67阳性率显著高于肌层浸润深度≤1/2者和无肌层浸润者，且肌层浸润≤1/2者CerbB-2、Ki-67阳性率显著高于无肌层浸润者(均P<0.05)。而有淋巴结转移者和无淋巴结转移者CerbB-2、Ki-67阳性率比较无显著差异(均P>0.05)。说明CerbB-2、Ki-67阳性表达随手术病理分期的增加、组织分化程度的增加及组织浸润程度的加深而呈增强趋势，高表达显示恶性肿瘤的侵袭性更强，可能患者预后不良。

综合上述研究，ER、PR、CerbB-2、Ki-67表达与子宫内膜癌临床和病理有密切相关性，联合应用可作为判断疾病预后和指导临床治疗的依据，值得进行推广和借鉴应用。

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[专业责任编辑：安瑞芳]

Relationship between endometrial cancer molecular markers and clinical pathology

XU Xiao-xian1, SU Ying2, ZHU Xiao-ping3, YAN Ding-ding1, LOU Han-mei1

ObjectiveToexploretheexpressionsofestrogenreceptor(ER),progesteronereceptor(PR),epidermalgrowthfactorreceptor2 (CerbB-2)andproliferatingcellnuclearantigen(Ki-67)inendometrialcarcinomaandtheirrelationshipwithclinicsandpathology.MethodsTherewere72caseswithendometrialcancerundergoingsurgicaltreatmentinZhejiangCancerHospitalduringtheperiodofAugust2013toAugust2014,andtheywereselectedasresearchobjects.TheexpressionsofER,PR,CerbB-2andKi-67weredeterminedbyimmunohistochemicalmethod.ResultsThepositiveratesofERandPRinthestageofⅢ-ⅣoftheoperationandpathologyweresignificantlylowerthanthoseinstageⅠandstageⅡ,whilethepositiveratesofCerbB-2andKi-67inthestageofⅡandⅢ-ⅣwerehigherthanthoseofstageⅠ,andthedifferenceswerestatisticallysignificant(χ2valuewas6.73, 5.35, 6.92, 6.02, 7.23, 7.83, 6.85and7.03,respectively,allP<0.05).ThepositiveratesofPRandERofG3werelowerthanthoseofG1andG2,thepositiveratesofCerbB-2andKi-67ofG2andG3werehigherthanthoseofG1,andthoseofG3wereobviouslyhigherthanthoseofG2withsignificantdifferences(χ2valuewas7.53, 6.68, 7.90, 7.24, 9.22, 12.64, 6.82and7.53,respectively,allP<0.05).ThepositiveratesofERandPRweresignificantlylowerandthoseofCerbB-2andKi-67werehigherinpatientswithmyometrialinvasiondepth>1/2thaninthosewithmyometrialinvasiondepth≤1/2orwithoutmuscularlayerinfiltration,andthoseofCerbB-2andKi-67inpatientswithmyometrialinvasiondepth≤1/2wereobviouslyhigherthanthosewithoutmuscularlayerinfiltration(χ2valuewas7.74, 7.63, 7.54, 7.16, 5.86, 7.02, 6.06and7.44,respectively,allP<0.05).ThepositiveratesofERandPRofpatientswithlymphnodemetastasisweresignificantlylowerthanthosewithoutlymphnodemetastasis(χ2valuewas7.74and7.63,respectively,bothP<0.05),butthepositiveratesofCerbB-2andKi-67werenotsignificantlydifferentbetweenpatientswithandthosewithoutlymphnodemetastasis(χ2valuewas1.22and2.05,respectively,bothP>0.05).ConclusionTheexpressionsofER,PR,CerbB-2andKi-67arecloselyrelatedtotheclinicalandpathologicalchangesofendometrialcarcinoma.Thecombinedapplicationcanbeusedasbasisforjudgingtheprognosisandguidingclinicaltreatment.

2015-09-29

2015年浙江省医药卫生科技计划一般研究计划资助项目(编号：2015KYA037)

徐小仙(1982-)，女，主治医师，硕士，主要从事宫颈癌，子宫内膜癌的放化疗方面的研究。

楼寒梅，主任医师。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.01.039

R737.33

A

1673-5293(2016)01-0114-03