脐血中Caspase7蛋白在羊水量异常产妇中的表达

李小琴，白彩云

(延安大学附属医院妇产科，陕西 延安 716000)



脐血中Caspase7蛋白在羊水量异常产妇中的表达

李小琴，白彩云

(延安大学附属医院妇产科，陕西 延安 716000)

目的探讨Caspase7蛋白在羊水量异常和正常的产妇血清中的表达差异。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测30例羊水过少、30例羊水过多和30例羊水量正常产妇脐带血中Caspase7蛋白表达水平的情况，并加以分析。结果Caspase7蛋白在3组产妇血清中均有阳性表达。羊水过少组血清中Caspase7蛋白平均浓度(160.2±25.8ng/mL)比对照组高(142.9±18.4ng/mL)，差异有统计学意义(t=2.99，P<0.05)。羊水过多组血清中Caspase7蛋白平均浓度(119.2±21.5ng/mL)比对照组低(142.9±18.4ng/mL)，差异也有统计学意义(t=4.59，P<0.05)。结论羊水过少或过多产妇血清中Caspase7蛋白表达异常，提示其可能与羊水量异常的发生有关。

羊水过少；羊水过多；脐血；Caspase7蛋白

[Abstract]ObjectiveToexplorethedifferenceinexpressionofCaspase7inumbilicalserumbetweenpregnantwomenwithabnormalamnioticfluidandnormalpregnantwomen.MethodsELISAwasperformedtodeterminetheconcentrationofCaspase7proteininumbilicalserumof30casesofoligohydramnios, 30casesofpolyhydramniosand30normalcases.ResultsCaspase7waspositivelyexpressedinumbilicalserumofthreegroups.TheexpressionofCaspase7washigherintheoligohydramniosgroup(160.2±25.8ng/mL)thaninthenormalgroup(142.9±18.4ng/mL),andtherewassignificantdifference(t=2.99,P<0.05).TheexpressionofCaspase7waslowerinthepolyhydramniosgroup(119.2±21.5ng/mL)thaninthenormalgroup(142.9±18.4ng/mL)withsignificantdifference(t=4.59,P<0.05).ConclusionTheexpressionofCaspase7inumbilicalserumofpregnantwomenofoligohydramniosandpolyhydramniosisabnormal,whichindicatesthatitmightbecorrelatedwithabnormalamnioticfluid.

[Keywords]oligohydramnios;polyhydramnios;umbilicalserum;caspase7protein

羊水量异常是妊娠期常见的妊娠合并症，包括羊水过少和羊水过多。羊水过少是指妊娠晚期羊水量少于300mL。羊水量减少时，子宫与胎儿之间的缓冲减少，脐带更容易受压，同时胎肺发育受到影响，会使胎儿更容易发生胎心率异常及宫内缺氧等危及胎儿的情况。当妊娠期间羊水量超过2 000mL时，诊断为羊水过多[1]。目前大部分羊水量异常的病因不清，羊水多少不是静止不动的，而是处于循环状态，因此研究羊水平衡的调控有着十分重要的意义。

近年来，国内外学者开始将目光集中于参与细胞凋亡的因子在孕妇胎盘胎膜以及血清上的分布及其与羊水调节的关系。目前在妇产科领域，有关Caspase的研究多集中在妊娠期高血压疾病及妇科肿瘤等方面，而有关与羊水过少的相关研究较少。Caspase7蛋白作为半胱天冬蛋白酶家族中的一员，参与机体内细胞凋亡的过程，是执行人体中细胞凋亡程序的关键酶之一；其在妊娠妇女胎盘胎膜细胞中的正常表达，确保胎盘胎膜细胞的正常凋亡，从而维持着母胎间的物质交换，并保证胎儿的正常发育。因此，本研究通过运用酶联免疫吸附法(ELISA)进一步研究Caspase7蛋白在羊水量正常和异常产妇脐带血清中的表达水平，探讨其与羊水量异常的关系，为寻找羊水量异常的病因与发病机制提供新的思路。

1对象和方法

1.1研究对象

选择2014年6至12月在延安大学附属医院产科住院剖宫产分娩足月孕妇，分为羊水过少组、羊水过多组及正常组产妇，每组各30例。研究对象既往无内外科合并症及其他妊娠合并症(妊娠期高血压疾病、胎膜早破、胎儿宫内生长受限、胎儿畸形及其他并发症)，近期无药物服用史、感染及母体脱水等因素。所有研究对象剖宫产的指征为：前次剖宫产和头盆不称。产前B超检测羊水指数(amnioticfluidindex，AFI)≤5.0cm和/或羊水最大暗区垂直深度(AFV)≤2.0cm，为羊水过少；AFI≥25.0cm和/或AFV≥8.0cm，为羊水过多。剖宫产术中进一步核实羊水量，羊水总量<300mL确诊为羊水过少，羊水总量>2 000mL确诊为羊水过多。如果术中羊水量和术前羊水指数不相符，该病例予以剔除。

1.2血清标本采集及检测

所有研究对象于胎儿娩出后及胎盘娩出前，抽取脐带血2.5mL，立即将其注入已编号的未添加任何抗凝剂的洁净试管内，随后在室温下静置50min，待其自然凝固，然后将其置入离心机中分离15min，转速为2 000r/min，依次用合适的移液器将上层透亮的血清移至己标号的洁净聚丙烯管中，盖紧后置于-70℃冰箱保存备用。ELISA试剂盒购自北京博奥森生物工程有限公司，批内和批间变异系数均<9%。血清中Caspase7蛋白测定采用ELISA法，具体方法严格按照说明书操作。

1.3结果判定

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

1.4统计学方法

2结果

2.1各组孕产妇年龄、妊娠周数及妊娠次数的情况

羊水过少组孕产妇年龄、妊娠周数及妊娠次数与对照组相比，其表达差异均无统计学意义(t值分别为1.82、1.81、0.62，均P>0.05)；羊水过多组孕产妇年龄、妊娠周数及妊娠次数与对照组相比，其表达差异也均无统计学意义(t值分别为0.47、1.04、0.90，均P>0.05，见表1。

Table 1　Comparison of age, gestational weeks and thenumber of pregnancy between three groups ±S)

2.2各组孕产妇血清中Caspase7蛋白的比较

羊水过少组血清中的Caspase7蛋白平均浓度高于对照组，其表达差异有统计学意义(t=2.99，P<0.05)；羊水过多组血清中的Caspase7蛋白平均浓度低于对照组，其表达差异也有统计学意义(t=4.59，P<0.05)，见表2。

组别例数(n)Caspase7(ng/mL)羊水过少组30160.2±25.8羊水过多组30119.2±21.5对照组30142.9±18.4

3讨论

3.1Caspase7蛋白在羊水量异常产妇中表达的分析

Caspase-7即为半胱氨酸蛋白酶-7，是由303个氨基酸组成的蛋白质，分子量约为35kD。Caspase-7与Caspase-3具有高度同源性，在细胞凋亡途径中作用类似。Caspase-7在N端有一氨基酸残基片段，它一旦被激活就启动凋亡程序，并以级联放大方式传导和放大凋亡信号，向下游凋亡执行因子传递，最终导致细胞凋亡[1]。胰岛素样生长因子可调控Cyt-C释放入胞质，从而抑制Caspase-7引发的细胞凋亡[2-5]。一旦体内的凋亡机制发生异常将引起多种疾病的发生。

本研究通过运用ELISA方法发现：Caspase7蛋白在羊水过少组产妇脐带血清中的浓度明显比羊水正常组高，在羊水过多组产妇脐带血清中的浓度明显比羊水正常组低。本课题组还同时采用免疫组化方法(SP法)检测了这些研究对象胎膜中Caspase7蛋白的表达，结果发现：Caspase7蛋白在羊水过少组与羊水正常组产妇的胎膜中均有阳性表达，同时羊水过少组胎膜中Caspase7蛋白的表达比羊水正常组明显升高[6]。由此推测：Caspase7蛋白在正常妊娠胎膜绒毛滋养细胞的正常表达，确保正常胎膜细胞的凋亡，维持着母胎之间的物质交换及胎儿的正常发育。在羊水过少组的孕妇胎膜及血清中，Caspase7蛋白的表达异常可影响胎盘胎膜细胞的自身凋亡，干扰胎盘胎膜细胞的结构及其功能，从而使得胎盘的血管网减少，使得物质交换发生障碍，严重地影响体内的水分子及其它小分子物质代谢及其循环，影响母体、胎儿及胎膜之间的水分子及其它小分子物质交换，导致羊水量异常。另外，胎盘胎膜细胞凋亡增加，影响胎盘胎膜细胞上水通道蛋白(AQP)的结构及其功能。目前在孕妇胎盘或胎膜上仅发现有AQP1、AQP3、AQP8和AQP9的表达，暂时未发现其他水通道蛋白；且发现上述因子在羊水量异常的产妇中表达异常[7-10]。水通道蛋白表达水平一旦下降，一方面使得母胎液体交换、胎儿血容量及胎儿皮肤肾脏水分的排泄减少，从而减少了胎儿尿液的生成，影响羊水的生成途径；另一方面会改变细胞膜对羊水的通透性，阻止过多的液体重吸收进入胎儿血循环，在一定程度上减少了羊水膜内途径的重吸收，从而达到平衡羊水生成与吸收的目的。最后，AQP在胎盘胎膜组织中的表达减少可能参与胎盘老化及胎膜早破的病理分子机制。

3.2展望

羊水过少的病因及发病机制至今尚未明确，Caspase7蛋白在羊水量异常孕妇的血清中异常表达，为羊水过少的诊断及治疗提供了新思路及重要参考价值，从而可改善临床结局，降低剖宫产率、围生儿病率和死亡率，提高围产医学质量。但是，它在羊水量调节平衡中的确切作用机制有待于进一步研究，如Caspase的表达异常是引起羊水量异常的发病机制，那Caspase可作为一种新的治疗羊水过少的手段。因此下一步期望通过制作动物模型及扩大样本量对羊水量异常进行多因素分析和研究，进一步寻找羊水量异常发生的生物学特性，揭示其发生、发展的规律，最终为早预防、早诊断和早治疗羊水量异常提供新的方向。

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[专业责任编辑：于学文]

Expression of Caspase7 in umbilical serum of pregnant women with abnormal amniotic fluid

LI Xiao-qin, BAI Cai-yun

(Department of Gynecology and Obstetrics, Yan’an University Affiliated Hospital, Shaanxi Yan’an 716000, China)

2015-06-30

李小琴(1973-),女，副主任医师，主要从事产科疾病的诊治与研究。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.01.011

R714.2

A

1673-5293(2016)01-0031-03