CD44v6在子宫内膜癌的表达及其临床意义

张文渊　丁盛娣　黄筱纮

CD44v6在子宫内膜癌的表达及其临床意义

张文渊丁盛娣黄筱纮

目的 探讨CD44v6因子在子宫内膜癌中的阳性率及子宫内膜癌中CD44v6的表达与临床各病理特征之间的相关性。方法 采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法（免疫组织化学S-P法）三步法操作染色检测子宫内膜癌标本36例、不典型增生子宫内膜标本20例、正常增生期子宫内膜标本20例中CD44v6的表达，将子宫内膜癌组中CD44v6的阳性表达与患者的各临床病理特征间进行统计学分析并分析其相关性。结果 CD44v6在子宫内膜癌组织中阳性率明显高于对照组，CD44v6蛋白在子宫内膜癌中的阳性表达与手术病理分期、病理类型、组织学分级、子宫肌层侵袭深度之间无相关性（P＞0.05），但与有无淋巴结转移间差异有统计学意义（P=0.042）。结论 CD44v6蛋白的高表达促进子宫内膜癌的发生发展，降低CD44v6表达可望成为子宫内膜癌治疗新的靶位点。

子宫内膜癌 CD44v6 免疫组化

研究证实，肿瘤细胞外基质及基底膜降解是恶性肿瘤侵袭及转移的关键环节。CD44v6因子参与细胞与细胞之间粘附以及细胞与胞外基质之间的特异性粘附过程，在恶性肿瘤的近距离侵袭、远处转移及种植等过程中有一定功能［1］。本研究采用免疫组化S-P法（链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法）三步法检测子宫内膜癌组织、癌前期病变组织（不典型增生子宫内膜组织）、正常增生期子宫内膜组织中CD44v6蛋白的表达，探讨其在子宫内膜癌发生发展过程中的临床意义。

1　临床资料

1.1标本来源及分组 选取2011年1月至2013年12月本院病理科存档的子宫内膜癌组织标本36例，子宫内膜癌的临床分期按 FIGO（2009）分期。以上病例临床资料及病理资料均完整，术前未行放化疗。另有20例非子宫内膜异位症、非肿瘤患者子宫全切除或诊断性刮宫的不典型增生子宫内膜标本和20例正常增生期子宫内膜标本。

2　结果

2.1CD44v6蛋白在不同类型子宫内膜组织中的表达分析 CD44v6蛋白在子宫内膜癌组织中阳性率80.55%，子宫内膜不典型增生组织中阳性率55.00%，正常增生期子宫内膜组织中阳性率30.00%。CD44v6蛋白在子宫内膜癌组织及子宫内膜不典型增生组织中阳性率明显高于正常组织。三组中两两比较结果显示：子宫内膜癌组与子宫内膜不典型增生组比较，差异有统计学意义（χ2=4.114，P=0.043）；子宫内膜癌组与正常子宫内膜组比较，差异有显著性（χ2=14.021，P＜0.01）。子宫内膜不典型增生组与正常子宫内膜组比较，差异无统计学意义（χ2=2.558，P=0.11）。见表1。

表1　组织中阳性表达率的比较（n）

2.2子内膜宫癌中CD44v6因子的阳性表达与各临床病理特征之间的关系 见表2。

表2　子宫内膜癌中CD44v6的表达与各临床病理特征之间的关系（n）

3　讨论

人类CD44基因位于11号染色体短臂上，含有≥20个外显子，根据外显子的表达方式不同，将其命名为变异型CD44（CD44v）和标准型CD44（CD44s）［1］。目前对该因子研究相对较多较深入是CD44v6。CD44v6是一种与淋巴细胞活化和介导有关的粘附分子，直接参与淋巴细胞的激活过程，还是一种细胞表面跨膜糖蛋白，因此，在恶性肿瘤的近距离侵袭及远距离转移中有至关重要的作用［2］。

研究证实，肿瘤的转移是由于恶性肿瘤细胞与细胞外基质之间的正常连接容易被破坏以及恶性肿瘤细胞之间同质粘附的降低，导致肿瘤细胞由原发部位向周围组织、淋巴管、血管等部位释放。其中一些肿瘤细胞上的粘附分子表达降低，使细胞与细胞之间的粘附减弱，肿瘤细胞从附着处脱离，通过多种细胞粘附的分子介导作用使肿瘤组织内皮细胞发生粘附及跨内皮细胞迁移，从而出现近距离浸润甚至远处转移。另一些肿瘤细胞表达的粘附分子可促使肿瘤细胞与血管内皮上的胶原蛋白、纤连蛋白等结合，从而使肿瘤细胞与血管内皮细胞粘附，继而形成血行转移。CD44v6是含v6变异体的CD44拼接变异体，其配体为细胞外基质。CD44v6分子通过与肿瘤细胞外基质成分中的透明质酸、纤维蛋白、粘蛋白结合及胶原蛋白结合后可以改变肿瘤细胞外基质成分，导致细胞形态游走性改变，从而影响肿瘤细胞之间结合能力，减低肿瘤细胞与细胞外基质之间的结合粘附作用，间接增强了肿瘤细胞的运动能力，有助于肿瘤细胞获得转移潜能，从而促进肿瘤细胞的浸润和转移。另一方面，CD44v6可以和Ezrin蛋白相互作用。Ezrin蛋白是细胞骨架与细胞膜之间的连接蛋白，与细胞形态的维持、细胞运动、细胞粘附、生存及微绒毛的形成均有关。CD44v6与Ezrin蛋白的细胞浆（或膜）结合后，CD44v6通过与肌动蛋白细胞骨架连接，可以调整细胞形状，促进细胞迁移，增加细胞的运动能力，进一步甚至可以影响微丝骨架的结构，从而诱导肿瘤细胞侵袭表型的发生，增加肿瘤细胞的近距离侵袭和远距离转移的能力［2］。CD44v6过度表达也可以激活Ezrin蛋白的功能，通过Ezrin蛋白的作用间接导致肿瘤细胞转移能力增强［3］。有学者认为，CD44v6可以促进T细胞的活化及淋巴细胞归巢功能，使表达CD44v6的肿瘤细胞与远处的血管及淋巴结（或管）内相对应的配体结合，使远处转移肿瘤细胞更加稳定长久地寄生与生长［1］。

相关文献表明，人类CD44v6的高表达与多种恶性肿瘤（如胃癌、胰腺癌、肠癌等胃肠道恶性肿瘤［4］、肺癌喉癌等呼吸系统恶性肿瘤［5］、乳腺癌［6］、卵巢癌［7］、子宫内膜癌［8］、宫颈癌［9］等）的发生、发展、侵袭和转移密切相关。Basakran NS 等［10］均已研究证实了上述观点，即CD44v6在多种恶性肿瘤的发生、发展，尤其是转移过程中起促进作用。因此，CD44v6因此是目前比较公认的肿瘤转移促进基因。本实验研究了CD44v6在子宫内膜癌发生发展过程中的表达情况，结果显示，CD44v6因子在正常子宫内膜组织中阳性率为30.00%，在不典型增生子宫内膜组织中阳性率为55.00%，在子宫内膜癌组织中阳性率为80.55%，随着子宫内膜癌前病变细胞（子宫内膜不典型增生细胞）向子宫内膜癌细胞的转化，CD44v6因子的阳性表达逐渐升高，由此提示：组织学尚正常的子宫内膜组织若CD44v6阳性存在癌变的可能，因而具有早期诊断价值，而且也是诊断预后的重要参考指标。因此，减少CD44v6的阳性表达，有可能成为在子宫内膜癌治疗上新的靶位点。Samija等［11］将CD44v6基因转入从小鼠身上提取的树突状细胞，进行肿瘤的预防及免疫治疗，结果为可诱发抗肿瘤作用。

目前，关于CD44v6阳性率高低与子宫内膜癌的关系尚存在争议，Sato S等［8］研究发现，CD44v6因子在子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著高于在正常子宫内膜组织中，但是CD44v6的阳性率与子宫内膜癌的其他临床病理特征间无相关性。其他研究者如Soon Cheol Hong等［9］通过免疫组化对65例早期宫颈癌，76例子宫内膜组织，57例卵巢癌标本中CD44v6的阳性表达发现：CD44v6的阳性表达在宫颈癌中为92.3%，在不典型增生期子宫内膜中为6.7%，在增殖期子宫内膜中未检测到，而在子宫内膜癌中为100%。而Ayhan等［12］则认为CD44v6表达与肌层浸润深度、淋巴结转移等不良预后因素呈负相关，无CD44v6表达或CD44v6阳性率较低患者反而有较高的复发率及较短的无瘤生存期，这一结论与前述观点不同。但近年来的国内外研究大多支持以下观点：CD44v6因子与子宫内膜癌的浸润、转移和预后相关，与子宫内膜癌组织学分级无相关性。甚至有学者认为可以通过检测CD44v6作为一个更好的肿瘤转移标志物，以预测肿瘤临床预后及转归。

本研究结果显示，CD44v6因子在子宫内膜癌组织中的阳性率明显高于对照组，CD44v6因子的阳性表达与手术病理分期、侵袭子宫肌层深度、病理类型、组织学分级之间无相关性（P＞0.05）；CD44v6因子的阳性表达与子宫内膜癌有无淋巴结转移间，差异有统计学意义（P＜0.05）。这一结论与大多数文献报道的结果一致。但恶性肿瘤的侵袭和转移受多种相关基因及相关因素的调控。至于CD44v6能否作为子宫内膜癌生物学特征及判断预后的指标及治疗的新靶位点，还有待于今后大样本多中心的对照研究加以证实。

1 Yanamoto S，Yamada S， Takahashi H，et al.Expressi on of the cancer stem cell markers CD44v6 and ABCG2 in tongue cance：effect of neoadjuvant chemotherapy on local recurrence.Int J Oncol，2014，44（4）：1153～1162.

2 Boldrini E，Peres S V，Morini S，et al.Immunoexpression of Ezrin and CD44 in patients with osteosarcoma.J Pediatr Hematol Oncol，2010，32（6）：213～217.

3 Fehon R G，McClatchey A I，Bretscher A，et al.Organizing the cell cortex：the role of ERM proteins .Nat Rev Mol Cell Biol，2010，11（4）：276～287.

4 Wang H， Rana S， Giese N，et al.Tspan8， CD44v6 and alpha6beta4 are biomarkers of migrating pancreatic cancer-initiating cells.Int J Cancer，2013，133（2）：416～426.

5 Jiang H，ZhaoW，Shao W.Prognostic value of CD44v6 Expression in patients with non-small cell lung cancer： meta-Analysis. Tumour Biol，2014，35（8）：7383～7389.

6 Nandy SB， Gangwani L， Nahleh Z， et al. Recurrence and metastasis of breast cancer is influenced by ovarian hormone's effect on breast cancer stem cells . Future Oncol， 2015，11（6）：983～995.

7 Wang J， Xiao L， Luo CH， et al. CD44v6 promotes beta-catenin and TGF-beta expression， inducing aggression in ovarian cancer Cell. Mol Med Rep， 2015，11（5）：3505～3510.

8 Ayhan A，Tok EC，Bildiricil，et al.Over expression of CD44 Variant 6 in human endometrial cancer and its prognostic significance .Gynecol Oncol，2001，80（3）：355～358.

9 Soon Cheol Hong， Jae Yun Song， Jae Kwan Lee， et al. Significance of CD44v6 expression in gynecologic malignancies. Obstet Gynaecol，2006， 32（4）： 379～386.

10 Basakran NS. CD44 as a potential diagnostic tumor marker. Saudi Med J， 2015， 36（3）：273～279.

11 Samija I，Matesa N，Lukac J，et al.Galectin-3 and CD-44v6 as markers for preoperative diagnosis of thyroid cancer by RT-PCR .Diagn Mol Pathol，2011，20（4）：233～241.

12 Ayhan A，Tok EC，Bildiricil，et al.Over expression of CD44 Variant 6 in human endometrial cancer and its prognostic significance .Gynecol Oncol，2001，80（3）：355～358.

Purpose To investigate the expressions of CD44v6 in endometrial cancer tissues and the relationship with clinical pathological factors. Methods Expressions of CD44v6 were detected by immunohistochemical technology SP detection method in 36 patients with endometrial cancer，20 patients with Atypical endometrial hyperplasia and 20 normal endometrial tissue.The relationships between positive expression of CD44v6 in endometrial cancer tissues and clinical pathological factors were analyzed. Results Positive expression of CD44v6 in endometrial carcinoma was significantly higher than Control group， There is no correlation between expression of CD44v6 protin in endometrial carcinoma and clinical stage， myometrial invasion， histologic grade（P＞0.05），but with statistically significance （P＜0.05） between differences of lymph node metastasis. Conclusion The higher expression of CD44v6 play a role in the development of endometrial cancer and the prognosis analysis， the lower expression of CD44v6 is expected to become a new target site in treatment of endometrial cancer.

Endometrial cancer CD44v6 Immunohistochemistry

313000 浙江省湖州市中心医院妇产科

1.2主要试剂 鼠抗人CD44v6单克隆抗体、免疫组化染色试剂盒（SP-9000即用型）、其他材料包括：中性树胶、PBS缓冲液（pH=7.2～7.4）、柠檬酸钠缓冲溶液（pH=6.0）、DAB显色剂均购自福州迈新生物科技公司。

1.3方法 （1）标本采集与处理：所有实验标本均经10%缓冲福尔马林溶液固定，石蜡包埋，连续切片4张，其中1张行HE染色，进行分类诊断，然后由3位资深病理医师对以上实验标本进行复查，病理诊断及临床诊断均一致的标本作为研究样本；1张用于免疫组化实验，按照免疫组织化学S-P三步法操作染色；1张用于对照试验；另1张备用。（2）实验步骤：实验步骤及结果判定严格按照试剂盒说明书进行。（3）实验结果判断：CD44v6在组织中的阳性表达主要定位于细胞膜，同时伴有不同程度的细胞浆染色，以细胞不染色为阴性细胞；以细胞被染成淡黄为弱阳性细胞；以细胞被染成黄色或棕黄色为阳性细胞。在光镜下随机观察5个不同的视野，根据染色强度及染色范围进行综合评分，染色强度：棕褐色（计3分）、棕黄色（计2分）、淡黄色（计1分）、无色（计0分）。染色范围：＞50 %（计3分）、20%～50 %（计2分）、5%～20 %（计1分）、＜5%（计0分）。累积计分0～1分为阴性（-）、2～3分为弱阳性（+）、4～5分为阳性（++）、6分为强阳性（+++）。

1.4统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。计数资料采用χ2检验或Fisher精确概率法。以P＜0.05为差异有统计学意义。