p67蛋白在胰腺癌组织中的表达及预后意义

谢二娟，　玉素甫·买买提，　方　华△

1湖北省医学会，武汉　4300712华中科技大学同济医学院附属协和医院乳腺甲状腺外科，武汉　430022



p67蛋白在胰腺癌组织中的表达及预后意义

谢二娟1，玉素甫·买买提2，方华1△

1湖北省医学会，武汉4300712华中科技大学同济医学院附属协和医院乳腺甲状腺外科，武汉430022

目的分析p67蛋白在胰腺癌和癌旁组织中的表达及预后意义。方法共纳入90例胰腺导管腺癌患者，每位患者具有对应的癌组织和癌旁组织标本，采用免疫组织化学技术进行芯片染色，检测组织芯片中p67的表达，分析p67的表达与胰腺癌临床病理特征的关系，并进行生存分析及Cox回归分析探讨p67的 预后价值。结果90例胰腺癌组织中p67阳性表达率为57.8%。p67阳性表达与肿瘤大小及临床分期显著相关(均P<0.05)。p67在癌旁组织的阳性表达率与淋巴结转移、临床分期具有显著相关性(均P<0.05)。胰腺癌组织p67阳性组患者的总生存期(OS)短于p67阴性组患者(P<0.05)，在癌旁组织中有相同趋势。Cox多因素分析显示癌旁组织p67阳性为胰腺癌不良预后的独立因素。结论p67阳性表达预示胰腺癌的不良预后。p67抑制剂可能会改善胰腺癌患者的预后。

胰腺癌;p67;预后;组织芯片

胰腺癌是侵袭能力强，极易转移的恶性肿瘤。早期行根治性手术是可能治愈的唯一希望，但多数患者在发病早期即发生转移，术后5年生存率并不高[1]。目前，寻找早期诊断指标，并为生物靶向治疗提供依据是胰腺癌研究的重点和难点[2]。c-myc原癌基因参与细胞增殖、分化，与肿瘤细胞的发生发展密切相关[3]，其编码的蛋白产物p67与细胞中Vav1相互作用激活Rac，继而共激活还原性辅酶Ⅱ(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH)，参与细胞氧代谢，活性氧的大量产生致细胞超氧，降低吞噬细胞的自我监视作用[4]。体外研究结果显示，p67蛋白与急性白血病、脑肿瘤、结肠癌等多种肿瘤的复发转移和不良预后相关[5-7]。本研究采用组织芯片及免疫组织化学技术，检测胰腺癌组织中p67蛋白的表达，探讨p67与胰腺癌病理参数的相关性，考察其是否可以作为胰腺癌的预后指标。

1　材料与方法

1.1研究对象

组织芯片购自上海生物芯片工程中心。收集90例胰腺癌患者的完整临床病理资料。本组患者手术前影像学检查均未发现远处转移，均未接受放射治疗、化学治疗及其他抗肿瘤治疗。手术后病理诊断均为胰腺导管腺癌，具有3～7年的随访资料，平均随访时间为(45.0±2.9)个月。总生存期(overall survival，OS)定义为:患者接受手术治疗到患者死亡或者末次随访时间。患者死亡原因排除非胰腺癌的死亡。

1.2免疫组织化学染色及评分判定

链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)免疫组织化学试剂盒购自福州迈新生物公司。组织芯片厚度4 μm，贴附于载玻片上，60℃充分烤片。操作步骤：①二甲苯脱蜡后梯度乙醇水化，磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次，每次5 min，3% H2O2阻断内源性过氧化物酶10 min，水浴抗原修复20 min，5%正常山羊血清封闭10 min；②滴加p67抗体，4℃冰箱过夜后PBS洗3次，每次3 min，滴加二抗后37℃恒温箱中孵育30 min，PBS洗3次，每次3 min，生物素-亲和素-酶结合物(ABC)复合物30 min，PBS洗3次，每次3 min；③滴加二氨基联苯胺(DAB)显色剂，苏木精复染，常规脱水后制成中性树脂封片。干片后送到上海芯超公司进行切片扫描。免疫组织化学结果由2位病理科医生采用双盲法独立对所有标本进行评分判定。细胞核染色呈棕黄色颗粒为主定义为p67阳性。

1．3统计学方法

采用χ2检验和Fisher精确概率法分析组间差异，应用Kaplan-Meier法和Log-rank绘制、检验生存曲线，应用COX回归进行风险因素的单因素及多因素分析，以P<0.05为差异有统计学意义，统计分析应用SPSS 22.0软件完成。

2　结果

2．1p67表达与胰腺癌及癌旁组织临床病理特征的相关性

本研究共纳入90例胰腺导管腺癌患者的癌组织，根据p67的免疫组织化学染色检测评分结果分为p67阳性和阴性组，见表1。其中52例p67阳性，38例p67阴性，p67阳性率 57.8%。p67阳性表达与年龄、性别、肿瘤部位、病理分级、血管侵犯无显著相关性 (均P>0.05)。淋巴结阳性转移的患者p67高表达，但差异无统计学意义(P>0.05)。p67阳性表达组中肿瘤大小较阴性组大(P<0.05)，临床分期较晚(P<0.01)。在癌旁组织中，p67高表达与年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小、病理分级、血管侵犯均无显著相关性，p67阳性组中淋巴结转移阳性者明显增多(P<0.05)，癌旁组织中p67高表达的患者通常临床分期较晚(P<0.01)。

2．2胰腺癌患者的生存分析

应用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，用Log-rank检验差异性。生存分析结果显示癌组织中p67阳性表达组患者OS较阴性组显著缩短(P<0.05)，见图1。在癌旁组织中，生存分析呈现同样趋势，p67阳性患者比p67阴性患者OS明显缩短(P<0.01)，见图2。COX单因素分析结果显示胰腺癌和癌旁组织p67的高表达与淋巴结转移、肿瘤临床分期以及胰腺癌预后相关，而与年龄、病理分级、血管侵犯与否、肿瘤大小等因素无相关关系。多因素分析结果揭示p67在癌旁组织中的高表达是胰腺癌独立的预后因素，见表2。

表1　p67的表达与胰腺癌临床病理特征的关系

续表1

图1　p67在胰腺癌组织中的表达及与预后的关系Fig.1 Relationship between the p67 expression and prognosis in pancreas cancer tissues

图2　p67在胰腺癌癌旁组织中的表达及与预后的关系Fig.2 Relationship between the p67 expression and prognosis in paracancerous tissues of pancreas cancer

临床病理特征分类计数单因素HRP值多因素HRP值性别女331.7130.062男57年龄(岁)<50421.0840.756≥5048肿瘤部位胰头63-0.794胰体10胰尾17肿瘤大小T16-0.740T269T3～T415病理分级G11-0.169G264G325淋巴结转移否541.7470.0341.2170.626是36血管侵犯否381.2880.332是52临床分期Ⅰ期41-0.025-0.380Ⅱ期47Ⅲ期2癌组织p67表达阴性381.7600.0411.2950.392阳性52癌旁组织p67表达阴性542.9690.0002.6480.001阳性36

3　讨论

在肿瘤细胞中，TGIF通过PI3K/AKT信号通路诱导NOX2/p67(PHOX)络合物激活，促进癌细胞迁移、提高了侵袭能力。p67沉默可以抑制TGIF诱导的癌细胞浸润和转移[8-9]。体外实验证实，p67蛋白过度表达具有促进癌细胞生长、浸润和转移的作用。本研究结果显示，癌组织和癌旁组织中p67阳性患者的OS较p67阴性患者短，说明p67阳性肿瘤具有侵袭性。在p67阳性表达组，癌组织中肿瘤体积明显增大，临床分期明显较晚。这些结果进一步说明在p67表达阳性的肿瘤中，肿瘤细胞侵袭性更强。在癌旁组织中，p67表达阳性率与淋巴结发生肿瘤细胞转移的比例具有显著相关性，与肿瘤体积不具有相关性，可能由于取材位置与肿瘤之间距离的差异相关。而病理分级、血管侵犯情况与p67表达阳性率不具有相关性，可能与p67不参与组织学分化及血管浸润有关。多因素Cox回归分析显示癌旁组织中p67阳性表达是胰腺癌的独立危险因素，可能癌旁组织p67高表达的胰腺癌体内已经发生微转移。

本研究显示癌组织中高表达的p67促进癌细胞的迁徙、浸润和转移，使其具有更强的侵袭性。因此癌旁组织中p67表达的阳性情况可作为一个预后指标，指导早期胰腺癌的诊断和治疗。抑制p67的表达，可作为未来胰腺导管腺癌生物靶向治疗的方向，值得进一步研究。

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(2016-04-13收稿)

Prognostic Value of p67 Expression in Pancreas Cancer

Xie Erjuan1，Yusufu·Maimaiti2，Fang Hua1△

1MedicalAssociationofHubeiProvince，Wuhan430071，China2DepartmentofBreastandThyroidSurgery，UnionHospital，TongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430022，China

ObjectiveTo investigate the p67 expression in specimens of pancreas cancer and corresponding paracancerous tissues and its prognostic value.MethodsThe p67 expression in pancreas adenocarcinoma patients was detected by immunohistochemistry.The relationship between the p67 expression and clinicopathological features of pancreas cancer was analyzed.Survival analysis and the COX regression hazards model were used to study the prognostic value of p67 expression in pancreas cancer.ResultsThe p67 positive expression rate in 90 pancreas cancer patients was 57.8%.The p67 expression was significantly associated with tumor size and clinical stage (P<0.05).The overall survival (OS) in patients positive for the p67 expression was shorter than in those negative for the p67 expression (P<0.05).Multivariate analysis demonstrated that the p67 expression was independent predictor of poor prognosis in patients with pancreas cancer.ConclusionThe p67 expression predicts a poor prognosis in patients with pancreas cancer.Overexpression of p67 shows a high probability of lymphatic metastasis in pancreas cancer.The p67 inhibition therapy may be necessary to improve the poor prognosis in patients with pancreas cancer.

pancreas cancer;p67;prognosis;tissue microarray

，Corresponding author，E-mail：3044402087@qq.com

R735.9

10.3870/j.issn.1672-0741.2016.04.021

谢二娟，女，1976年生，医学硕士，副主任技师，E-mail：xzz07@126.com