高效液相法测定颠茄磺苄啶片中硫酸阿托品含量

刘益庆（连云港市药品检验所　连云港　222006）

高效液相法测定颠茄磺苄啶片中硫酸阿托品含量

刘益庆（连云港市药品检验所连云港222006）

目的：建立测定颠茄磺苄啶片中硫酸阿托品含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，0.8%三乙胺溶液（用磷酸调节pH值至2.9）-乙腈（85∶15）为流动相，检测波长为210nm，柱温为室温。结果：硫酸阿托品在12.56～200.96μg/ mL范围内线性关系良好；r=0.9998；平均回收率为96.79%（n=6），RSD为1.4%。结论：该方法简便、快速、准确并且专属性强。

颠茄磺苄啶片 硫酸阿托品 高效液相

颠茄磺苄啶片（Belladonna Sulfamethoxazole and Trimerhoprim Tablets）为复方制剂，其组分为：磺胺甲噁唑、甲氧苄啶、颠茄流浸膏。磺胺甲噁唑作用于二氢叶酸合成酶，干扰合成叶酸的第一步，甲氧苄啶作用于叶酸合成代谢的第二步，选择性抑制二氢叶酸还原酶的作用，二者合用可使细菌的叶酸代谢受到双重阻断。颠茄为M胆碱受体阻断药，能抑制乙酰胆碱的毒蕈碱作用，主要抑制节后胆碱能神经支配的自主性效应器部位乙酰胆碱的活动，受乙酰胆碱支配的平滑肌的活动也被抑制。抑制平滑肌、心肌、窦房结和房室结，以及外分泌腺等的兴奋。较大量的颠茄也能减少胃肠的蠕动和分泌，降低输尿管和膀胱的张力，对胆总管和胆囊仅略为松弛。目前，还没有特定的方法对颠茄磺苄啶片中的颠茄流浸膏的成分进行定量，故建立此方法极为重要。

1　仪器与试药

Aglient 1260型高效液相色谱仪；梅特勒AB265S电子分析天平；硫酸阿托品对照品（中国食品药品检定研究院，批号为100040-201312）；颠茄磺苄啶片（哈药集团制药六厂，批号为：20120416，20130522，20140517）；阴性对照品（自制）；乙腈为色谱纯，水为超纯水，三乙胺、磷酸均为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件：色谱柱：菲罗门C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.8%三乙胺溶液（用磷酸调节pH值至2.9）-乙腈（85∶15）；检测波长：210nm；柱温：室温。

2.2溶液制备：对照品溶液的制备：精密称取硫酸阿托品对照品0.02512g，置25ml量瓶，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀。

供试品溶液的制备：取本品10片，研磨成细粉，置分液漏斗中，加氨试液15ml，振摇使溶解，迅速用氯仿振摇提取6次，每次10ml，剧烈振摇，合并所有的氯仿液，蒸干，残渣加甲醇使其溶解并转移至5ml量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀。

阴性对照品溶液制备：按处方比例称取磺胺甲噁唑、甲氧苄啶及辅料适量，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.3方法学考察

标准曲线制备：精密量取硫酸阿托品对照品溶液，分别制成浓度为12.56、25.12、50.24、100.48、200.96μg/mL的溶液，依次进样10μL进行测定，以峰面积（Y）对浓度（x）作线性方程，得到Y=11.047x+17.917，r=0.9998（n=5）。结果表明，硫酸阿托品对照品浓度在12.56～200.96μg/mL范围内峰面积与其浓度呈现良好的线性关系。

精密度试验：取同一浓度的硫酸阿托品对照品溶液重复进样6次，每次10μL，结果其峰面积的RSD为0.92%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性实验：取同一批（20140517）供试品溶液，分别于2、4、6、8、12、24h时进样，按上述色谱条件测定。结果峰面积的RSD为1.21%（n=6），表明供试品溶液在24h内稳定。

重现性实验：取同一批（20140517）样品5份，按照供试品溶液制备方法处理并依次测定。结果RSD为1.8%（n=5），表明方法重现性良好。

加样回收试验：精密称取已知含量的样品1g三份，1.25g三份，1.5g三份，置9个25ml量瓶中，分别精密称取硫酸阿托品对照品约25mg三份，30mg三份，40mg三份，依次置9个25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表1。

表1　加样回收试验

样品含量测定：取3批样品，按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，依上述色谱条件测定含量，分别进样10μl，记录色谱图，按外标法计算，结果见表2、图1。

表2　样品含量测定结果

3　讨论

颠茄磺苄啶片所含的颠茄流浸膏成分很少，容易受到磺胺甲恶唑的干扰，笔者尝试很多提取方法，诸如乙酸乙酯、氯仿，最后通过加入氨试液，氯仿振摇萃取，提取到量比较多的硫酸阿托品成分。

关于流动相的选择，笔者尝试了水—乙腈、缓冲盐—甲醇、水—缓冲盐—乙腈，通过不断摸索、调节几相的比例，最终确定了本次实验的色谱条件为：0.8%三乙胺溶液（用磷酸调节pH值至2.9）-乙腈（85∶15），检测波长为210nm。该条件能使样品中的各组分得到有效分离，精确定量硫酸阿托品的含量，并无干扰，见图1。

关于进样量的选择，笔者尝试了 5μL、10μL、15μL和20μL，由于该药中含有磺胺甲噁唑和甲氧苄啶，组分高，出峰很多，10μL效果最好。

颠茄磺苄啶片主药成为为磺胺甲噁唑和甲氧苄啶，笔者曾根据溶解性试图将此两组成分去除，只留下颠茄流浸膏，但效果不明显，今后可以考虑利用柱切系统将这两种主药成分去除！参考文献

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［S］.北京：化学工业出版社，2015：1335-1336.

［2］陈浩，张文婷，陈勇，郭增喜，程巧鸳.RP-HPLC法测定颠茄片中硫酸阿托品的含量［S］.西北药学杂志，2010，25（5）：328-329.

［3］韩忠刚，冯华，罗秀琼.HPLC法测定颠茄浸膏片中硫酸阿托品的含量［J］.中医药导报，2008，14（9）：47.

Determination of Atropine in BelladonnaSulfamethoxazoleandTrimerhoprim Tablets by HPLC

Liu Yiqing（Lianyungang Institute for Drug Control，Lianyungang 222006）

Objective：To establish a HPLC methodfor determination of Atropine in Belladonna Sulfamethoxazole andTrimerhoprim Tablets.Methods：The HPLC System consistedof Gemini Phenomenex C18column，0.8%triethylamine solution（adjust pH value to 2.9 with phosphoric acid）-acetonitrile（85∶15）as mobile phase，with detection wavelength 210nm.Results：The linear range of atropine was 12.56～200.96μg/mL.The mean recovery was 96.79%（n=6）.conclusion：The method is proved to be simple，rapid，accurate and exclusive.

Belladonna Sulfamethoxazole and Trimerhoprim Tablets Atropine HPLC

R927.2

A

1672-8351（2016）02-0013-02