miR-146b在沿海居民甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义

邵志翔



·论著·

miR-146b在沿海居民甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义

邵志翔

目的探讨miR-146b在沿海居民甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义。方法收集2012年1月1日至2015年1月1日手术切除的丹东沿海甲状腺乳头状癌患者组织及癌旁正常甲状腺组织存档蜡块50例，采用实时定量PCR检测甲状腺乳头状癌组织与周围正常组织中miR-146b的表达，并分析甲状腺乳头状癌组织中miR-146b相对表达量与临床病理特征的关系，采用kaplan-Meier法进行生存分析。结果沿海居民甲状腺乳头状癌组织中miR-146b相对表达量的中位数及全距为1.545(0.442，2.881)高于癌旁组织为1.078(0.312，2.665)(Z=-2.999，P<0.01)。miR-146b高表达是肿瘤直径≥1 cm、包膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ的危险因素(P<0.05)；而性别、年龄、病灶数与miR-146b表达水平无关(P>0.05)。不同miR-146b相对表达水平的甲状腺乳头状癌患者的生存率差异无统计学意义(P=0.971)。结论miRNA-146b在沿海居民甲状腺乳头状癌组织中高表达，与甲状腺乳头状癌的发生发展及侵袭转移密切相关。

甲状腺乳头状癌；miR-146b；微RNAs；沿海居民；相关性

甲状腺癌是最常见的内分泌系统肿瘤，发病率约占所有恶性肿瘤中1.7%[1]。而甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)是甲状腺癌最常见的病理类型，占甲状腺恶性肿瘤的90%左右。微RNA(microRNA, miRNA)是一种内源性、非编码单链小分子RNA，它通过与靶基因mRNA碱基配对引导沉默复合体(RISC)降解mRNA或阻碍其翻译，从而在转录后水平调控基因表达[2-4]。它们通常与 miRNAs 的3’-非编码区互补结合，通过后转录控制着基因的表达水平，从而参与调控细胞的增殖、生长、凋亡及免疫应答等生命活动。最近发现，miRNA 在许多人类癌症中存在异常表达，包括甲状腺癌[5]。研究表明，许多miRNA与肿瘤的预后和转移相关，而miR-146b正是其中之一[6]。沿海居民摄入海产品相对较多，摄碘量相对较大，属甲状腺癌高发人群，本研究通过实时定量PCR检测miR-146b在沿海居民甲状腺乳头状癌组织和癌旁正常组织中的表达，探讨miR-146b的表达水平与临床病理特征的关系，为甲状腺乳头状癌的分子诊断和靶向治疗提供参考依据。

1　资料与方法

1.1一般资料选取丹东市第一医院病理科2012年1月1日至2015年1月1日临床资料完整的手术切除的甲状腺乳头状癌组织及癌旁正常甲状腺组织存档蜡块50例，所有病例均为丹东沿海常住居民。男24例，女26例;年龄23～68岁，中位年龄41岁。根据2009年第七版国际抗癌联盟甲状腺癌TNM分期标准，Ⅰ期24例，Ⅱ期17例，Ⅲ期9例。所有患者术前未接受化疗或放射治疗。

1.2主要仪器与试剂本研究RNA提取试剂Trizol购自美国Invitrogen公司，qRT-PCR反转录及实时定量染料购自Takara宝生物工程(大连)有限公司，miR-146b茎环法引物由广州锐博公司设计合成，Real-time PCR仪器为ABI7900HT，由美国福斯特市应用生物系公司生产。

1.3实时定量聚合酶链反应按照操作说明书依据Trizol法检测组织中的总DNA。按操作说明书采用RT引物探针在ABI7900HT中运行检测miR-146b的表达，RNU6B作为内参对照。经过3次独立实验，计算出相对定量(relative quantification,RQ)的值进行数据分析。

1.4miR-146b基因表达水高低判定标准以miR-146b基因表达水平2-ΔΔCt计算，将2-ΔΔCt结果由大到小排序，取中位数1.545为判定标准，>1.545为高表达，反之为低表达。

1.5随访从行甲状腺乳头状癌切除术后开始至死亡或者末次临床随访结束的时间即2015年12月1日为止。

1.6统计学分析应用SPSS 20.0统计软件，计量资料非正态分布或方差不齐采用中位数及全距表示，并采用配对设计Wilcoxon符号秩检验比较甲状腺乳头状癌及癌旁组织中miR-146b的相对表达量差异。miR-146b表达水平与性别、年龄、肿瘤直径、病灶数、包膜侵犯、淋巴结转移和TNM分期等临床因素的相关性用Chi-square检验。不同miR146b相对水平的甲状腺乳头状癌患者生存分析采用kaplan-Meier法，并采用Log rank检验比较2组患者生存率差异，P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1不同组织中miR-146b的相对表达量实时定量PCR检测甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中miR-146b的相对表达量，并比较两组中miR-146b的相对表达量有无差异。由于甲状腺乳头状癌组织与癌旁正常组织中的miR-146b相对表达量均不符合正态分布，故采用配对设计Wilcoxon符号秩检验比较两组miR-146b的相对表达量差异。经分析发现，甲状腺乳头状癌组织中miR-146b相对表达量的中位数及全距为1.545(0.442，2.881)高于癌旁组织1.078(0.312，2.665)，差异有统计学意义(Z=-2.999，P=0.003)。见图1。

图1甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中miRNA-146b的相对表达水平

2.2miRNA-146b表达与甲状腺乳头状癌患者临床病理特征的关系比较甲状腺乳头状癌患者的表达水平与临床病理特征发现miR-146b高表达是肿瘤直径≥1 cm、包膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ的危险因素(P<0.05)；而性别、年龄、病灶数与miR-146b表达水平无关(P>0.05)。见表1，图2。

2.3miR-146b表达水平与甲状腺乳头状癌患者预后的相关性对50例甲状腺乳头状癌患者随访1～4年，随访中位时间为521 d，分析发现不同miR-146b水平的甲状腺乳头状癌患者的总体生存率差异无统计学意义(P=0.971)。见图3。

3　讨论

微RNA简称miRNAs，是一类长约22核苷酸(nt)的非编码的单链RNA分子，约70 nt的前体miRNA(pre-miRNA)经Dicer酶剪切而来。miRNA参与生物体生命过程中一系列的重要进程，包括发育、造血、器官的形成和凋亡、细胞增殖，甚至是癌症发生。研究发现，越来越多的miRNA在肿瘤发生及发展中发挥着重要作用[7-9]。单个miRNA通过在肿瘤细胞中独特的表达改变影响一系列下游基因，以miRNA为靶点可以引发广泛的治疗效应，这为以miRNA相关的靶向治疗提供了广泛诱人的前景。miRNA在人类肿瘤中常出现异常表达，在肿瘤中低表达的miRNA通过特异性抑制下游致癌基因发挥肿瘤抑制因子作用，高表达的miRNA通过特异性抑制下游抑癌基因而发挥致癌作用。有研究发现，miRNA与肿瘤侵袭和转移密切相关，miRNA调控肿瘤侵袭转移机制成为了研究热点，miR-146b就是其中之一[10]。

表1　甲状腺乳头状癌患者miR-146b表达水平与临床病理特征的关系　例(%)

图2　甲状腺乳头状癌患者不同临床病理特征的miR-146相对表达水平

图3　甲状腺乳头状癌患者miR-146b表达与预后的相关性

甲状腺癌是最常见的内分泌相关肿瘤，其中甲状腺乳头状癌是甲状腺癌最常见的病理类型。居住在沿海城市的居民平时较多摄入海产品，且爱吃腌制海产品，相对摄碘量较大，属于甲状腺癌的高发人群。故研究miR-146b在沿海居民甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义对甲状腺乳头状癌的分子诊断和靶向治疗可提供一定的参考依据。本研究认为与癌旁正常组织相比miR146b相对表达量在甲状腺乳头状癌组织中显著提高(P<0.01)。这与杨明等[11]研究甲状腺腺瘤患者miR-146b的表达及与BRAF突变的相关性研究中结论miRNA-146在TC组织中呈低表达的结论不同。而另有研究认为miR146b在甲状腺乳头状癌中表达升高，有望成为甲状腺乳头状癌新的分子标志物的结论[12,13]，与本研究结论相符。本研究发现miR-146b高表达是肿瘤直径≥1cm、包膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ的危险因素(P<0.05)，这与Chou等[14]研究认为miRNA146b与甲状腺外侵袭显著相关，且miRNA-146b在高风险组表达水平显著提高的结论相同。截至随访结束，本研究认为不同miR-146b相对表达水平的甲状腺乳头状癌患者的生存率差异没有统计学意义，这与杨明等[11]研究不能确定miR-146b表达水平与生存预后关系的结论一致。

综上所述，miR-146b在沿海居民甲状腺乳头状癌中高表达，是肿瘤直径≥1 cm、包膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ的危险因素。本研究尚未发现miR-146b表达水平与生存预后的关系，而miR-146b在沿海居民甲状腺乳头状癌中通过靶基因调控细胞的侵袭迁移机制尚未得到明确答案，需进一步研究，从而为临

床阻断甲状腺乳头状癌细胞的迁移和侵袭提供治疗参考。

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Expression and significance of miR-146b in the papillary thyroid carcinoma of the coastal residents

SHAOZhixiang.

DepartmentofPathology,TheFirstHospitalofDandongCity,Liaoning,Dandong118000,China

ObjectiveTo investigate the expression and significance of miR-146b in papillary thyroid carcinoma of the coastal residents.MethodsThe tumor specimens and normal tissues beside tumor from 50 patients with papillary thyroid carcinoma who underwent surgical resection were collected in The First Hospital of Dandong City from January 1,2012 to January 1,2015. The expression levels of miR-146b in 50 cases of papillary thyroid carcinoma tissues and normal tissues beside tumor were detected by RT-PCR. Kaplan-Meier analysis was used to evaluate the survival status of patients.Moreover the correlation between relative expression levels of miR-146b and clinicopathological characteristics of papillary thyroid carcinoma was analyzed.ResultsThe median and full range of miR-146b expression levels in papillary thyroid carcinoma tissues were 1.545 (0.442,2.881,respectively),which were significantly higher than those [1.078 (0.312,2.665,respectively)] in adjacent normal tissues (Z=-2.999,P<0.01).The high-expression of miR-146b was the risk factors of tumor size, tumor capsular invasion, lymph node metastasis and TNM advanced stage (Ⅲ+Ⅳ) (P<0.05).However patient’s sex and age, focus number were not related with the expression levels of miR-146b (P>0.05). There were no significant differences in the survival rates among the patients with different expression levels of miR-146b (P>0.05).ConclusionThe high-expressions of miRNA-146b exist in papillary thyroid carcinoma tissues of the coastal residents,which are closely correlated to the pathogenesis,development,invasion and metastasis of papillary thyroid carcinoma.

papillary thyroid carcinoma; miR-l46b; microRNA; coastal residents; correlation

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.18.010

118000辽宁省丹东市第一医院病理科

R 736.1

A

1002-7386(2016)18-2758-04

2016-03-29)