国内子宫肌瘤动物模型造模方法近况研究※

吕明圣　王瑢睿　张见伟　汤轶波（北京中医药大学第一临床医学院，北京　100029）

国内子宫肌瘤动物模型造模方法近况研究※

吕明圣王瑢睿张见伟汤轶波*
（北京中医药大学第一临床医学院，北京100029）

目的 搜集文献，从实验动物、造模方式、具体使用药物及频率、造模时间等角度比较，从中选择出最优化的子宫肌瘤造模方法。方法 以CNKI为检索工具，检索国内2011—2015年全文中包含“子宫肌瘤”“造模”或“子宫肌瘤”“模型”的期刊文章，筛选到相关文章44篇（4篇为综述），对以上文章进行资料汇总比较。结论 实验动物多选用SD大鼠，造模方式多采用雌孕激素双模法，雌激素选用苯甲酸雌二醇或己烯雌酚（常用剂量0.02mg/只，3次/周，给药16周），孕激素选用黄体酮（常用剂量1 mg/只，1次/周，给药4周），给药方式多为肌注。

子宫肌瘤；动物模型；综述；癥瘕

子宫肌瘤是女性生殖器官最常见的良性肿瘤，好发于育龄女性，其发病原因至今仍不明确，可能与女性体内的性激素 （雌激素、孕激素）水平高有一定相关性［1］。目前对子宫肌瘤的治疗以手术切除为根治方法，但对于不符合手术条件或有生育需求的患者，药物控制仍为首选。为了明确子宫肌瘤的发病机制及筛选有效治疗药物，常需借助动物模型。本研究以CNKI为检索工具，检索国内2011—2015年全文中包含“子宫肌瘤”“造模”或“子宫肌瘤”“模型”的期刊文章，经过筛选得到相关文章44篇 （4篇为综述［2-5］）。笔者对以上相关文章中动物模型的造模方法等情况进行比较汇总，以期学界同行共同探讨研究。

1　实验动物的选取

除去综述外的40例报道，共有25例采用SD大鼠造模 （62.5%），8例采用豚鼠，6例采用Wistar大鼠，此外还有人采用CB-17Scid小鼠 （1例）。采用SD大鼠造模的25例报道中，大鼠体重分布在180～220 g的最多 （56%）。其余实验动物高频体重分布区间详见表1。

表1　不同实验动物高频体重分布区间　　（g）

2　造模方法

40例报道中有3例为造模方式的优化比较研究。贾志玲等［6］以外源性激素双模法建立模型，分空白对照组，高频率注射组 （每天肌注乙烯雌酚0.04 mg/只及黄体酮1.0 mg/只），中频率注射组 （每天肌注乙烯雌酚0.04 mg/只，每周3次肌注黄体酮1.0 mg/只），低频率注射组 （隔日肌注乙烯雌酚0.04 mg/只，每周1次肌注黄体酮1.0 mg/只），连续给药5周，得出结论中频率注射组造模效果较好。王占利等［7］将大鼠分为短期对照组、短期模型组、长期对照组、长期模型组，对照组和模型组除注射试剂不同外无其他差异。短期模型组腹腔注射苯甲酸雌二醇0.5 μg/（g·d），连续25 d后改为腹腔注射黄体酮4 μg/（g·d），连续5 d；长期模型组每周3次肌注苯甲酸雌二醇0.5 μg/g，12周后加每周两次肌注黄体酮5 μg/g，连续4周，最终得出结论长期模型组效果更佳。陈海刚等［8］从给药量和给药周期进行分组研究，实验分200 μg模型组 （每周2次肌注雌二醇200 μg/只）；300 μg模型组 （每周2次肌注雌二醇300 μg/只）及正常对照组，并于实验8周及10周分别处死大鼠以观察造模情况，结果显示低剂量组与高剂量组平均肌瘤形成率相近，无统计学差异，但高剂量组大鼠死亡时间均早于低剂量组；给药8周与10周肌瘤形成率亦无统计学差异。综上，低剂量8周给药造模效果更佳。

除此之外的37例报道，大抵选用以下三种造模方式：雌激素诱导单模法 （2例），雌孕激素诱导双模法（25例），去势加激素诱导法 （9例），此外还有以异种移植人体子宫肌瘤细胞加雌孕激素诱导的方法造模，术后第4周处死动物，其子宫形态及病理切片均提示造模成功［9］。

雌激素的选择以苯甲酸雌二醇及己烯雌酚为主，给药方式多取大鼠腿部肌肉注射 （61%），也有报道采用皮下注射（20%）、腹腔注射（11%）和灌胃（8%）的方式。常用剂量为0.2 mg/只，但对于长期给药造模的大鼠，给药量应随其体重变化而调整，常选剂量为0.05 mg/100 g，详见表2。给药频率以3次/周及隔日给药居多，详见表3。给药时间多为16周及20周，详见表4。

孕激素的选择以黄体酮为主，也有个别案例选用安宫黄体酮 （2例）［10-11］。与雌激素相同，肌肉注射给药占多数。常选剂量为1 mg/只 （详见表5），给药频率以2次/周和1次/周居多 （详见表6），给药时间多为4周 （详见表7）。

此外，在雌孕激素诱导双模法造模的25例中，23例雌孕激素给药时间重叠；去势加激素法的9例中，8例采用摘除卵巢并术后皮下注射雌激素的方式造模，1例采用摘除卵巢加术后肌注雌孕激素的方式造模［12］。

3　讨论

子宫肌瘤是妇科常见病，近年来对此病的关注度呈上升趋势。在动物实验中，如何成功有效的构建子宫肌瘤模型是最基础也是最重要的。笔者在对资料汇总比较的过程中也发现了一些问题值得共同探讨：

（1）实验方法的描述欠详细

在笔者搜集的40篇文献中，有7篇未能详细描述给药周期，9篇未能描述给药频率，1篇未能准确描述药物浓度，这给后续研究者的重复试验造成了一定困扰。此外在描述给药频率时，应明确每周注射药物的具体时间，而不应仅仅以3次/周或隔日给药模糊处理。在描述药物名称时更应严谨，避免将己烯雌酚误写作乙烯雌酚或已烯雌酚。

（2）探讨何种造模方式更佳的文章较少

20世纪80年代，Fujii等［13］发现雌孕激素共同作用下可以诱导机体产生多发性结节，近年来学界多采用此类办法构建子宫肌瘤模型，但对具体给药方法的讨论较少。笔者在搜集近五年资料时发现，不同学者采用的造模方法相差较大，仅孕激素的给药时间就有13种，这给相关研究者在选择造模方式上造成一定困惑。贾志玲［6］、王占利［7］、陈海刚［8］分别从给药频率、给药时间和给药浓度的角度实验探究更佳的造模方法，获得一些成果，希望能有更多此类研究。

表2　雌激素给药剂量

表3　雌激素给药频率

表4　雌激素给药时间

表5　孕激素给药剂量

表6　孕激素给药频率

表7　孕激素给药时间

（3）基于数据的最佳激素诱导动物子宫肌瘤造模方法

笔者通过对文献资料的汇总比较，认为以下造模方法可供参考：动物选用体重180～220 g的SD大鼠，给药方式采用雌孕激素双模法，每周3次肌肉注射苯甲酸雌二醇注射液，用药剂量为0.02 mg/只，给药16周；在第13周起每周加用一次肌肉注射黄体酮注射液，用药剂量为1 mg/只，给药4周。实验者可在第17周取材，判断造模是否成功。

除本文提到的激素诱导法、去势加激素诱导法、异种移植子宫肌瘤细胞法之外，子宫肌瘤的造模方式还有很多，如自发性子宫肌瘤动物模型、免疫缺陷动物移植性子宫肌瘤模型等［14-15］，但国内报道较少。

［1］谢幸，苟文丽.妇产科学［M］.北京:人民卫生出版社，2013:310-313.

［2］李文，刘新敏.子宫肌瘤动物模型构建方法的实验研究概况［J］.现代妇产科进展，2014（11）:917-919.

［3］万庆芝，郭纪芬，吴志兵，等.中医药治疗子宫肌瘤实验研究概况［J］.新中医，2013（10）:117-119.

［4］景慧芳，张晓甦.子宫肌瘤动物模型研究［J］.长春中医药大学学报，2013 （3）:513-514.

［5］杨晓乐，时燕萍.中医药干预子宫肌瘤实验的最新概况［J］.中医药导报，2014（1）:103-104.

［6］贾志玲，王娟，郭春燕，等.双模法建立子宫肌瘤动物模型的试验研究［J］.内蒙古农业大学学报（自然科学版），2012，33（Z1）:18-22.

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［11］郭秀静，谭蕾，谈媛，等.紫蛇消瘤汤对子宫肌瘤模型大鼠子宫形态及PTEN蛋白表达的影响［J］.上海中医药大学学报，2015（1）:57-61.

［12］陈嘉，赵绪韬，顾丰华，等.鳖甲煎丸对子宫肌瘤模型大鼠血清激素水平及子宫组织病理改变的影响［J］.世界临床药物，2015（4）:243-250.

［13］Fujii S，Nakashima N，Okamura H，et al.Progesterone-induced smooth muscle-like cells in the subperitoneal nodules produced by estrogen.Experimental approach to leiomyomatosis peritonealis disseminata.［J］.American Journal ofObstetrics&Gynecology，1981，139（2）:671-680.

［14］Ishikawa H，Ishi KSerna V A，Kakazu R，et al.Progesterone is essential for maintenance and growth of uterine leiomyoma.［J］.Endocrinology，2010，151（6）:2433-42.

［15］Walker CL，Hunter D，Everitt J I.Uterine leiomyoma in the Eker rat:A unique model for important diseases of women［J］.Genes Chromosomes&Cancer，2003，38（4）:349-356.

Recent Review of Establishing Animal Mod of Hysteromyoma in China

LYU Mingsheng，WANG Rongrui，ZHANG Jianwei，TANG Yibo*
（School of the First Clinical Medicine，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China）

Objective To choose the optimal model of establishing hysteromyoma animal mode by collecting and comparing the literatures which include experimental animal，the way of modeling，specific drugs，the frequency and modeling time.Methods Collecting articles including"hysteromyoma""establishing model"or"hysteromyoma""modeling"from 2011 to 2015 in China by CNKI，through screening，44 related articles were selected（4 of them are overview），and these elements mentioned above from the related articles were compared.Conclusion Sprauge Dawley rats are widely used as the experimental animal，the most common way of modeling is a dual model of estrogen and progestin，estradiol benzoate or diethylstilbestrol is widely used as the estrogen（the usual dose:0.02mg for one rat，3 times a week，16 weeks），progesterone is widely used as the progestin（the usual dose:1mg for one rat，1 time a week，4 weeks），and intramuscular injection is widely used as the administration pathway.

hysteromyoma；animal experiment；review；zhengjia

10.3969/j.issn.1672-2779.2016.16.063

1672-2779（2016）-16-0146-03

��张文娟 本文校对：闫丽强

2016-03-08）

北京市大学生科学研究与创业行动计划项目（No：BJGJ1406）

souptyb@163.com