血浆谷氨酸脱氢酶活性测定在肝胆疾病中的临床应用评价

2016-09-12易婷婷罗光成胡帅刘素兰张国元蒋兴亮

川北医学院学报 2016年4期

关键词：梗阻性谷氨酸胆道

易婷婷，罗光成，胡帅，刘素兰，张国元，蒋兴亮

(川北医学院附属医院检验科，四川南充　637000)

血浆谷氨酸脱氢酶活性测定在肝胆疾病中的临床应用评价

易婷婷，罗光成，胡帅，刘素兰，张国元，蒋兴亮

(川北医学院附属医院检验科，四川南充637000)

目的：探讨血浆谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase，GLDH)活性测定在肝脏疾病中的临床意义。方法：采用速率法检测229例肝功能异常者(急性肝损伤25例；慢性乙型肝炎60例；肝硬化47例；肝衰竭31例；胆道梗阻性疾病29例；肝癌37例)及 120 例健康体检者(作为对照组)的血浆GLDH活性，并与 AST、ALT、ALT、GGT等常用肝胆疾病指标进行比较分析。结果：本室采用速率法测定GLDH活性的参考区间为4.4～13.3 U/L。胆道梗阻性疾病和肝癌患者血浆GLDH较对照组明显升高(P<0.05)，胆道梗阻性疾病患者的GLDH/AST比值也明显高于对照组(P<0.05)。血浆GLDH浓度与AST浓度呈显著的正相关(r=0.230，P<0.001)。血浆GLDH浓度与肝损伤程度相关，随病情好转而降低。结论：胆道梗阻性疾病和肝癌患者血浆GLDH升高最为明显，GLDH可作为判断肝细胞损伤程度和疗效观察的指标。

谷氨酸脱氢酶；肝损伤；天门冬氨酸氨基转移酶

【Abstract】Objective：To investigate the clinical significance of glutamate dehydrogenase (GLDH)in patients with liver disease.Methods：A total of 229 patients with liver disease (25 patients with acute hepatitis,60 CHB patients,47 patients with liver cirrhosis,31 patients with liver failure,29 patients with biliary obstruction,37 patients with liver carcinoma)and 120 healthy subjects were enrolled.The liver enzymes of GLDH,AST,ALT,ALT and GGT were determined.Results：The activity of GLDH in liver diseases,especially in patients with biliary obstruction and liver carcinoma,were significantly higher than that in healthy controls (P<0.05).The ratio of GLDH to AST in patients with biliary obstruction was significantly higher than that in healthy controls (P<0.05).The activities of GLDH closely related to the severity of liver damage and correlated with AST (r=0.230,P<0.001).Conclusion：The activity of GLDH was significantly increased in patients with biliary obstruction and liver carcinoma,and may be a biochemical marker for diagnosing and evaluating the liver injury.

谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase，GLDH)是一种含锌的线粒体酶，广泛存在于肝脏、肾脏、脑及胰腺等多种组织细胞中，以肝脏的含量最高[1]。GLDH亚细胞定位于线粒体中，所以是一种反映肝实质细胞坏死的指标。GLDH与谷氨酸代谢和能量代谢有关，故在一些肿瘤患者中也表达异常[2-5]。而近年来采用连续监测法的GLDH检测试剂盒在临床上已广泛应用。本室也即将开展GLDH测定，作为一个重要的肝损伤指标，评价其临床应用价值显得尤为重要。

1　材料和方法

1.1研究对象

选取川北医学院附属医院2015年3至2015年6月的229例肝功能异常患者，患者入组参考《药物性肝损伤诊治指南》[6]，以ALT≥3 ULN作为肝功能异常的入组标准。研究对象包括男性139例，女性90例，年龄 16～61岁，其中急性肝损伤25例，慢性乙型肝炎60例，慢性乙型肝炎肝硬化47例，肝衰竭31例，胆道梗阻性疾病(结石和占位)29例，肝癌(原发性和转移性)37例。选择来我院体检的120 名健康人作为正常对照组，其中男性65例，女性55例，年龄21～55岁，均无心、脑、肝、肾等系统疾病。所有对象采清晨空腹外周血3 mL，肝素抗凝并分离血浆，所有标本均无溶血和脂血现象，在2 h内完成检测。

1.2试剂与仪器

GLDH试剂盒及其配套校准品和质控品由广州科方生物技术有限公司提供，按试剂盒说明书在BECKMAN AU5800全自动化分析仪上设置实验参数，用配套校准品校准，并在室内质控在控后进行标本测定。

1.3方法原理

采用速率法测定GLDH活性。样本中的GLDH在还原型辅酶Ⅱ(NADPH)的存在下催化α酮戊二酸与氨反应生成L-谷氨酸和水，同时NADPH被氧化，通过监测340 nm吸光度下降速率即可得出样本中GLDH活性。

1.4统计学分析

2　结果

2.1参考区间

120例健康体检者的GLDH结果经kolmogorov-smirnov正态性检验，结果显示偏度系数(skewness)=0.421(标准误0.221)，峰度系数(Kurtosis)=0.334(标准误0.438)，Z=0.880，双侧P=0.422，即呈正态分布。方差分析显示不同性别和不同年龄组间GLDH水平无统计学差异(P>0.05)。以95%可信区间(±1.96 s)初步确定参考区间为4.4～13.3 U/L，略高于试剂说明书提供的参考区间(0～10 U/L)。

2.2GLDH与其它肝脏酶学指标的相关性分析

本研究检测229例肝功能异常患者的血浆GLDH、AST 、ALT、ALP、GGT 、5’-NT、ADA等酶学指标。各指标Pearson相关分析显示：血浆GLDH浓度与AST浓度呈显著的正相关(r=0.230，P<0.001)，与ALT浓度正相关(r=0.145，P=0.01)。与其它指标间无明显相关性。

2.3GLDH在不同类型肝病中的表达情况

不同类型肝病患者的GLDH水平如表1所示。其中，胆道梗阻性疾病和肝癌患者血浆GLDH较对照组明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。而急性肝损伤、慢性乙型肝炎、乙型肝硬化、肝衰竭等患者血浆GLDH与对照组比较无统计学差异(P>0.05)。另外，胆道梗阻性疾病的GLDH/AST比值较对照组明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)，其余各组患者的GLDH/AST比值较对照组明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。以前文所得参考区间为界，胆道梗阻性疾病和肝癌患者血浆GLDH阳性率也分别到达了100%和78%。

表1　不同类型肝病患者的GLDH水平±s)

*P<0.05，与正常对照组比较。

2.4GLDH随疾病转归的动态变化

本研究对15例GLDH、AST明显升高的的肝损伤患者进行了GLDH的动态观察。如图1所示，在整个疾病转归过程中，血浆GLDH与AST具有良好的协同变化关系，且GLDH入院时升高程度较AST明显。血浆GLDH与肝损伤程度(AST)相关，随病情好转而降低。

3　讨论

GLDH广泛存在于肝脏、肾脏、脑及胰腺等多种组织细胞中，以肝脏的含量最高，故可作为肝损伤的标志物[1]。GLDH大量存在于肝细胞线粒体基质及内膜中，并且其在肝小叶不同区域肝细胞内的分布是有所不同的，肝小叶中央静脉周围肝细胞中活性为周边细胞的1.72倍[2]。由于GLDH主要存在于细胞的线粒体中，当肝细胞坏死及线粒体崩解时，GLDH 才会逸出细胞进入血流。故测定血清GLDH 活性可作为线粒体损伤标志和作为诊断肝细胞严重病变的指标[7]。近年来研究表明：GLDH在一些肿瘤患者中表达升高，其升高可能与谷氨酸代谢和能量代谢有关[8]。另外，人类血浆GLDH活性具有个体差异小、无季节性波动、影响因素少等特点。因此，测定血浆GLDH 活性对肝胆疾病的诊疗具有重要意义。

本研究结果显示，健康体检者的血浆GLDH呈正态分布，不同性别和不同年龄组间无统计学意义(P>0.05)，以95%可信区间(±1.96 s)为标准，初步确定参考区间为4.4～13.3 U/L。进一步分析发现：急性肝损伤、慢性乙型肝炎、乙型肝硬化、肝衰竭等患者血浆GLDH升高并不明显，而胆道梗阻性疾病和肝癌患者的血浆GLDH升高是最为明显的，其明显高于其它各组(P<0.05)。以前文所得参考区间为界，胆道梗阻性疾病和肝癌患者血浆GLDH阳性率也分别到达了100%和78%。这与赵元明[9]的研究结果基本一致。McGill等[10-11]指出对乙酰氨基酚介导的肝损伤患者，其血清线粒体DNA、GLDH和ALT均是升高的，但GLDH升高较ALT晚，McGill认为GLDH既是肝损伤指标，更是线粒体损伤指标。因此，GLDH应当是一个损伤机制标志物，用于诊断线粒体源性肝损伤[7]。Tang等[12-14]研究发现梗阻性黄疸会导致明显线粒体损伤，肿瘤细胞生长和肿瘤治疗过程中都存在明显的线粒体损伤和功能障碍。因此，本研结果提示胆道梗阻性疾病和肝癌患者的肝细胞线粒体损伤较其他各组更为明显。既往研究[15-16]表明GLDH在各种肝炎中是明显升高的，以急性肝炎患者升高最为明显。本研究中，仅部分肝炎、肝硬化、肝衰竭患者的血浆GLDH高于参考区间，但与对照组比无统计学较差异(P>0.05)。这可能与肝炎产生原因、肝细胞损伤程度、样本采集时间，以及这些病例组患者数量较少有关，我们将进一步研究证实。

Pearson相关分析显示：血浆GLDH浓度与AST呈显著的正相关。因此，本文进一步比较了各类肝病患者的GLDH/AST比值，结果显示胆道梗阻性疾病患者的GLDH/AST比值明显高于对照组，其余各组肝胆疾病患者的GLDH/AST比值明显低于对照组。即胆道梗阻患者特征性的表现为血浆GLDH和GLDH/AST明显升高的，而AST升高相对不明显，这有助于胆道梗阻性疾病的诊断。另外，通过对肝损伤患者GLDH的动态观察，结果显示：GLDH与AST具有良好的协同变化关系，与肝损伤程度相关，随病情好转而降低，可作为判断肝细胞损伤程度和疗效观察的可靠指标。

综上所述，各类肝病患者血浆GLDH升高程度不尽相同，而胆道梗阻性疾病和肝癌患者血浆GLDH升高最为明显，其中胆道梗阻性疾病患者的GLDH/AST比值明显高于对照组。GLDH与肝损伤程度相关，随病情好转而降低，可作为判断肝细胞损伤程度和疗效观察的可靠指标之一。

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(学术编辑：赵明才)

The clinical significance of plasma GLDH activity in patients with liver disease

YI Ting-ting,LUO Guang-cheng,HU Shuai,LI Su-lan,ZHANG Guo-yuan,JIANG Xing-liang

(Department of Clinical Laboratory,Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College,Nanchong 637000,Sichuan,China)

GLDH;Liver injury;AST

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.04.022论著

天晴肝病研究基金(TQGB20150016)

2016-03-21

易婷婷(1985-)，女，硕士，检验技师。E-mail: yiyening@163.com

蒋兴亮，E-mail: jiangxl_666@163.com