卡巴他赛注射液细菌内毒素检查法的研究

田文娟，李淑敏，段春艳，王以云

(山东新时代药业有限公司，山东 临沂 273400)

卡巴他赛注射液细菌内毒素检查法的研究

田文娟，李淑敏，段春艳，王以云

(山东新时代药业有限公司，山东 临沂 273400)

为建立卡巴他赛注射液的细菌内毒素检查方法。参照《中国药典》2010年版二部附录细菌内毒素检查法--凝胶法进行试验。结果表明将卡巴赛注射液用其注射用溶剂振摇混匀后，稀释40倍时对细菌内毒素检查无干扰作用。所以卡巴他赛注射液可采用细菌内毒素检查法--凝胶法进行细菌内毒素检测。

卡巴他赛注射液；细菌内毒素检查；干扰试验

卡巴他赛是第三代紫衫烷类药物，药物通过与微管蛋白结合，促进微管组装，抑制细胞进入有丝分裂期而抑制癌细胞增殖，适用于与泼尼松联用治疗既往用含多烯紫杉醇治疗方案激素难治的转移性前列腺癌患者[]。本试验参照《中国药典》2010年版二部附录细菌内毒素检查法(XIE)进行了干扰试验[2]，为该产品建立简便、快捷、检测灵敏度高的细菌内毒素检查方法提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

旋涡混合仪，型号：XW-80A，生产单位：上海医科大学仪器厂；电热恒温干燥箱，型号：GZX-9246MBE，生产单位：上海博迅实业有限公司医疗设备厂；恒温水浴锅，型号：HH-8，生产单位：上海梅香仪器有限公司。

1.2 供试品

卡巴他赛注射液，生产厂家为山东新时代药业有限公司；批号为207150401、207150402、207150403；卡巴他赛注射液规格为60mg:1.5mL，注射用溶剂规格为4.5mL。

1.3 试剂

细菌内毒素检查用水(厂家：湛江安度斯生物有限公司，批号：1405261)，鲎试剂(厂家: 福州新北生化工业有限公司，批号：13111012，标示灵敏度：0.25EU·mL-1；厂家：湛江安度斯生物有限公司，批号：1409231, 标示灵敏度0.25EU·mL-1; 厂家：福州新北生化工业有限公司，批号：14041412，标示灵敏度：0.125EU·mL-1；厂家：湛江安度斯生物有限公司，批号：1405261, 标示灵敏度0.125EU·mL-1)，细菌内毒素工作标准品(厂家：中国食品药品检定研究院，批号：150601-201176，效价：100EUo 支-1)。

2 方法与结果

2.1 最大有效稀释倍数

取一瓶卡巴他赛注射液加注射用溶剂4.5 mL(一瓶)振摇混匀后，根据公式MVD= L·C/λ计算最大有效稀释倍数 ，其中L为细菌内毒素限值，依据卡巴他赛注射液临床使用标准，L=0.5 EU·mg-1；C为供试品溶液的浓度，C=60mg· (1.5mL+4.5mL)-1=10mg·mL-1；λ为鲎试剂的标示灵敏度。当市售鲎试剂的最高灵敏度为0.03 EU·mL-1时，MVD=(0.5EU·mg-1×10mg·mL-1)/0.03EU·mL-1=160,即此时卡巴他赛注射液的最大有效稀释倍数为160倍。

2.2 干扰预试验

2.2.1 鲎试剂的灵敏度复核

按《中国药典》2010年版二部附录细菌内毒素检查法对两个厂家的标示灵敏度λ为0.25 EUomL-1的鲎试剂进行灵敏度复核，鲎试剂灵敏度的测试值为λc。当λc在0.5λ～2λ(包括0.5λ和2λ)时，方可用于供试品的细菌内毒素检测，并以标示灵敏度为该批鲎试剂的灵敏度。结果见表1。

表1 鲎试剂灵敏度复核结果

2.2.2 干扰预试验

卡巴他赛注射液的最大有效稀释倍数为160倍，取供试品一瓶加注射用溶剂4.5 mL(一瓶)振摇混匀作为原液，然后用细菌内毒素检查用水进行一系列倍数的稀释，将10倍，20倍，40倍，80倍，160倍的供试品稀释溶液作为供试品溶液组(不含内毒素标准溶液的供试品稀释液)；分别用以上浓度的供试品稀释溶液作为溶剂将细菌内毒素工作标准品进行稀释，制成均含2λ内毒素标准溶液且供试品稀释倍数为10倍，20倍，40倍，80倍，160倍的的稀释溶液作为供试品阳性对照组，用以上两个厂家灵敏度为0.25 EU o mL-1的鲎试剂进行干扰预试验，每个浓度平行做两管，同时做阴性对照和阳性对照，实验结果见表2。

表2 卡巴他赛注射液干扰预试验结果

卡巴他赛注射液的干扰试验预实验中阴性对照组为阴性，阳性对照组为阳性，实验有效，表中结果说明其最小不干扰稀释倍数为20倍，综合考虑为保证试验的可行性，采用40倍的供试品稀释液进行干扰试验。

2.3 干扰试验

按《中国药典》2010年版二部附录细菌内毒素检查法，用两个厂家标示灵敏度λ为0.125 EU·mL-1的鲎试剂进行干扰试验。用40倍的供试品稀释液作溶剂将细菌内毒素工作标准品制成含内毒素浓度为0.25、0.125、0.06、0.03 EU·mL-1的供试品溶液，同时用细菌内毒素检查用水将细菌内毒素工作标准品制成浓度为0.25、0.125、0.06、0.03 EU·mL-1的内毒素标准溶液，同时做阴性对照，根据公式E= antilg(∑X/4)分别计算出内毒素标准溶液和含供试品的内毒素溶液的反应终点浓度的几何平均值(Et 和Es)，试验结果见表3。

表3 卡巴他赛注射液干扰试验结果

从以上干扰试验结果可得出：内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值Es均在0.5λ～2.0λ之间，含供试品的内毒素溶液的反应终点浓度的几何平均值Et 均在0.5 Es ～2.0 Es 之间(包括0.5 Es和2.0 Es)，表明供试品稀释40倍时，对鲎试剂与细菌内毒素反应无干扰作用。

2.4 供试品细菌内毒素检测结果

将3批供试品分别进行40倍稀释，用灵敏度0.125 EU·mL-1的鲎试剂，按《中国药典》2010年版二部附录细菌内毒素检查法，进行细菌内毒素检查，结果见表4。3批供试品细菌内毒素均符合规定，即内毒素含量小于0.5 EU·mg-1。

表4 卡巴他赛注射液细菌内毒素检查结果

3 讨论

细菌内毒素随注射剂进入人体血液所导致的"热原反应"是注射剂临床应用中发生率较高的不良反应，细菌内毒素检测是注射液制剂质量检查的重要项目。本文按《中国药典》2010版二部附录XIE“细菌内毒素检查法--凝胶法”进行细菌内毒素检查法研究，结果表明卡巴他赛注射液加注射用溶剂振摇混匀后，稀释40倍时对细菌内毒素检查无干扰作用，可在大于或等于此稀释倍数下采用“凝胶法”进行卡巴他赛注射液的细菌内毒素检查，从而控制供试品的内毒素含量在限值范围内，保证产品质量，确保患者用药安全。

[1] 刘 琪，刘 明，朱 刚，等.转移性去势抵抗性前列腺癌药物治疗进展[J].现代泌尿外科杂志,2014,19(9):625-627.

[2] 国家药典委员会.中国药典[S].二部，2010：附录99-102.

(本文文献格式：田文娟，李淑敏，段春艳.卡巴他赛注射液细菌内毒素检查法的研究[J].山东化工，2016，45(04)：48-49,51.)

Study on Bacterial Endotoxin Test in Cabazitaxel Injection

Tian Wenjuan, Li Shumin, Duan Chunyan，Wang Yiyun

(Shandong New Time Pharmaceutical Co.,Ltd. , Linyi 273400，China)

Objective： To establish an endotoxin test method for cabazitaxel injection. Methods Experiments were conducted according to the bacterial endotoxin testing method in Chinese Pharmacopoeia 2010 edition(Volume II). Results： When diluted 40 times with specialized solvent, cabazitaxel has no interferential effect on the gelation reaction of endotoxin. Conclusion ：The established endotoxin testing method can be used in the quality control of cabazitaxel injection.

cabazitaxel injection; endotoxin test method; disturbance test

2016-01-17

R927.1

A

1008-021X(2016)04-0048-02