药桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)的薄层鉴别的研究*

李　玲，张　琴，朱卫敏，孙　莲

(1 新疆医科大学药学院,新疆　乌鲁木齐　830011; 2 乌鲁木齐职业大学，新疆　乌鲁木齐　830002)



药桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)的薄层鉴别的研究*

李玲1，张琴2，朱卫敏1，孙莲1

(1 新疆医科大学药学院,新疆乌鲁木齐830011; 2 乌鲁木齐职业大学，新疆乌鲁木齐830002)

建立了药桑叶中DNJ的薄层鉴别的方法。分析了不同薄层板、展开剂、显色剂及温度对分离的影响。在试验中，以正丁醇-冰醋酸-水(5:2:1)为流动相在硅胶G板上展开，茚三酮为显色剂，药桑叶提取物中在与DNJ标准品相对应位置上出现相同颜色的斑点，Rf为0.36。分离后的斑点圆整、清晰，重现性好，符合薄层层析要求，可用于药桑叶的质量控制。

药桑叶；DNJ；薄层鉴别

桑叶为桑科(Moraceae)桑属植物桑(Morus alba Linn.)的树叶，是一种药食两用的植物。自古以来，传统的中医就将桑叶作为治疗消渴症的药物应用于临床。新疆的药桑属于桑科桑属黑桑种的一种，是新疆独有的桑品种之一，是我国国内唯一的具有22倍体花性染色体的桑品种，药用价值极高[1]。在桑叶中1-脱氧野尻霉素(以下均用简称：DNJ)含量远高于其它植物，具有降血糖、抗病毒和抗肿瘤转移等作用，因此应用价值和开发前景非常广阔[2]。无论是少量制备还是大量生产的过程中，都必须建立DNJ的分离鉴定方法，以控制其在制备、生产过程中的品质。薄层层析法操作简单，成本较低，本文参考近几年文献中对DNJ的分析检测方法，结合实际情况，对新疆药桑叶中DNJ的薄层鉴别方法进行了研究。

1　试剂与仪器

1.1材料与试剂

DNJ标准品(HPLC≥98%，上海源叶生物科技有限公司)；乙醇、三氯甲烷，氨水，正己烷，丙酮，正丁醇，冰乙酸、磷钼酸，碘化铋钾，茚三酮，香草醛均为分析纯。

硅胶G板(青岛海洋)；碱性硅胶G薄层板及Al2O3薄层板，自制；药桑叶，采自新疆不同地方，经新疆医科大学药学院天然药物教研室帕丽达·阿布力孜教授鉴定为桑科植物药桑的叶。

1.2主要仪器与设备

KQ5200DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。

2　试验方法

2.1溶液的制备

2.1.1标准溶液的制备

准确称取5.0 mg的DNJ标准品，置于5 mL容量瓶中，加入少量去离子溶解，定容，配制成浓度为1 mg·mL-1的标准溶液。

2.1.2样品的准备

称取5.0 g过40目筛的干燥的药桑叶粉，40 mL 65%乙醇，超声20 min，离心取清液，剩下的残渣再用20 mL 65%乙醇重复处理一次，所得清液和前一次合并，用旋转蒸发器蒸发溶液浓缩到较小体积，离心后取清液，再浓缩至0.5 mL[2]。

2.1.3显色剂的配制

(1)磷钼酸试剂：称取10 g磷钼酸，溶于100 mL乙醇中；喷洒后120 ℃条件下加热15 min，再用氨气熏。

(2)改良碘化铋钾：称取碘化铋钾2 g，溶于20 mL冰乙酸中，溶解后加入50 mL蒸馏水，量取此溶液10 mL，加入20 mL 0.6 mol·L-1HCl溶液，加入100 mL蒸馏水。

(3)茚三酮显色：称取0.2 g茚三酮，溶于5 mL冰乙酸和95 mL正丁醇中；喷洒0.2%的茚三酮，105 ℃条件下加热15 min。

(4)香草醛：称取5 g香草醛溶于100 mL 10%硫酸乙醇溶液。

2.2薄层层析分析[3-4]

用毛细管吸取标准溶液和样品溶液适量，距薄层板底部边沿1 cm处点样，吹风机吹干溶剂，放入已用展开剂预饱和30 min 的层析缸中，在室温条件下，进行上行展开，展距为8 cm，挥干展开剂，显色剂显色，计算比移值Rf。

2.2.1薄层板的选择

选取硅胶G薄层板、碱性硅胶G薄层板、Al2O3薄层板、按2.2步骤将各种薄层板放入展开剂中展开，考察不同薄层板的展开效果。

2.2.2展开剂的选择

按2.2步骤将薄层板分别放入展开剂中展开，考察不同展开剂不同配比的展开效果，具体见表1、表2。

表1　不同展开剂的配比

表2　一种展开剂不同的配比

2.2.3显色方法的选择

选取2.1.3中显色剂，考察DNJ的展开效果，计算Rf值。

3　结果与讨论[5-6]

3.1不同薄层板对桑叶中DNJ的展开效果(表3)

表3　不同薄层板对桑叶中DNJ的展开效果

从表3可以看出，用相同的展开剂和显色剂，桑叶中DNJ在不同薄层板的展开效果表现出明显差别，其中在硅胶G薄层板上的展开效果明显好于其它。

3.2不同展开剂对桑叶中DNJ的展开效果(表4)

表4　不同展开剂对桑叶中DNJ的展开效果

从表4可以看出，用相同的薄层板和显色剂，桑叶中DNJ在比例相近的不同展开剂中展开效果表现出明显差别，其中在展开剂为正丁醇:冰乙酸:水的展开效果最好，斑点圆整且显色。

3.3不同展开剂对桑叶中DNJ的展开效果(表5)

表5　同种展开剂不同配比对桑叶中DNJ的展开效果

从表5可以看出，用相同的薄层板和展开剂，桑叶中DNJ在比例不同的展开剂中展开效果表现出明显差别，其中在展开剂正丁醇:冰乙酸:水(配比(V/V)为5:3:1)的展开效果最好，斑点圆整，显色，Rf=0.36。在TLC分析中，一般认为分析组分的显色斑点圆整，清晰，不拖尾，Rf值在0.3～0.7为最合适。

3.4不同展开剂对桑叶中DNJ的展开效果(表6)

表6　不同显色剂对药桑叶中DNJ的显色效果

从表6可以看出，用相同的薄层板和相同比例的展开剂，桑叶中DNJ对不同显色剂展开效果表现出明显差别，其中当显色剂为0.2%的茚三酮时，显色明显。

4　结　论

DNJ是哌啶类多羟基生物碱，分子结构中无特殊官能团，展开后，在自然光下观察不到有色斑点，置于254 nm和365 nm 紫外灯下观察也无斑点。本试验建立了DNJ薄层层析分离鉴定方法，确定最佳条件:选用硅胶G薄层板，展开剂为正丁醇:冰乙酸:水(5:3:1)，显色剂为0.2%茚三酮，DNJ的Rf=0.36，分离效果和显色效果均很好。

[1]梁明,王鹏,张会慧,等.1-脱氧野尻霉素的研究进展[J].安徽农业科学,2012,40(17):9222-9223.

[2]徐鑫,魏晓蕊,叶群,等.超声波辅助提取桑叶中1一脱氧野尻霉素工艺的响应面法优化[J].扬州大学学报(农业与生命科学版),2012,33(4):81-86.

[3]孔菲,丁莹,梁雪,等.川穹、当归的薄层层析鉴别[J].中医药学报,2013,41(2):56-57.

[4]范程浪,王雪松,臧威,等.紫杉醇的薄层层析显色反应与应用[J].中国酿造,2012,31(9):160-162.

[5]孙莲，严寒信，姑再努尔.桑枝中黄酮类的HPLC指纹图谱的研究[J].新疆医科大学学报, 2014,37(3):312-314.

[6]李晓娜,曹清明,钟海燕,等.薄层层析技术在植物活性成分研究中的应用进展[J].食品与机械, 2010,26(6):144-147.

Study on DNJ in the Mulberry Leaves by Thin-layer Chromatography*

LI Ling1, ZHANG Qin2, ZHU Wei-min1, SUN Lian1

(1 Pharmacy College, Xinjiang Medical University, Xinjiang Urumqi 830011;2UrumqiVocationalUniversity,XinjiangUrumqi830002,China)

The TLC method was established to separate and identify DNJ in the mulberry leaves. The effects of different plate, developing agent and reagent on the separation of components were analyzed. In the experiment, using silica gel G plate, n-butanol:acetic acid:water(5:3:1) was used as a developing agent, chloro-O-toluidine was used for reagent. Rfvalues between the 2nd spot evolved by ester-phase of in and the spot of standard reagent DNJ was the same. Spots were round and dear, reproducibility well, Rf=0.36. The research aimed to lay the foundation for separating and identifying DNJ from mulberry leaves.

mulberry leaves; 1-deoxojirimyci; thin-layer chromatography

新疆医科大学科研创新(XJC201316)。

李玲(1982-)，女，讲师，主要从事新疆天然药物开发利用。

孙莲(1961-)，女，教授，主要从事药物分析研究。

TQ460

B

1001-9677(2016)01-0073-03