GC法测定维A酸残留溶剂

李佳阳，鲁利彦

(东北制药集团股份有限公司，辽宁　沈阳　110027)



GC法测定维A酸残留溶剂

李佳阳，鲁利彦

(东北制药集团股份有限公司，辽宁沈阳110027)

建立了GC法对维A酸残留溶剂甲醇进行检测。色谱柱DM-624(30 m×0.53 mm×3.0 μm)；分流比：1:1；检测器温度：200 ℃；进样器温度：250 ℃；载气：N2；柱温程序：60 ℃保持5 min，40 ℃/min升温至220 ℃保持3 min；柱流速：10.0 mL/min，恒流模式；进样量：1.0 mL；检测器：FID；顶空进样。结果表明：方法线性R≥0.99，甲醇检测限≤0.0050%。方法准确灵敏，可用于维A酸残留溶剂进行检测。

GC法；维A酸；残留溶剂

维A酸是体内维生素A的代谢中间产物，主要影响骨的生长和促进上皮细胞增生、分化、角质溶解等代谢作用。用于治疗寻常痤疮、银屑病、鱼鳞病、扁平苔癣、毛发红糠疹、毛囊角化病、鳞状细胞癌及黑色素瘤等疾病。本文运用GC方法，建立了能够将维A酸中残留的甲醇定量检测的方法。

1　实　验

1.1仪器与试药

气相色谱仪：Agilent 6890N；顶空进样器：Agilent G1888；色谱柱：DM-624(30 m×0.53 mm×3.0 μm)及DB-624(30 m×0.53 mm×3.0 μm)。

甲醇：色谱纯；二甲亚砜：色谱纯。

1.2测试条件

分流比：1:1；

检测器温度：200 ℃；

进样器温度： 250 ℃；

载气： N2；

柱温程序：60 ℃保持5 min，40 ℃/min升温至220 ℃保持3 min；

柱流速：10.0 mL/min，恒流模式；

进样量：1.0 mL；

检测器：FID；

顶空条件：顶空温度：95 ℃，传输线温度：110 ℃,平衡时间：30 min；

GC循环时间：23 min。

1.3溶液制备

1.3.1标准贮备液配制

准确称取甲醇1.2005 g，置于100 mL容量瓶中，加二甲亚砜稀释至刻度，摇匀 (相对浓度：甲醇30.0125%)。

1.3.2标准溶液配制

准确吸取标准贮备液1.00 mL，用二甲亚砜稀释至100 mL，摇匀(相对浓度甲醇：0.3001%)。

1.3.3空白

二甲亚砜。

1.3.4样品溶液的制备

称取供试品0.2 g，精密称定，置于20 mL顶空瓶，加二甲亚砜5.00 mL溶解，密封。

1.4验证所使用的试剂与标准品

甲醇：批号：20120115211,色谱纯；二甲亚砜：批号：77965,色谱纯。

2　结果与讨论

2.1系统适用性

待仪器稳定后，精密吸取标准溶液5 mL六份于六个顶空瓶中，立即密封。注入色谱仪。

甲醇RSD=3.73%(≤10.0%)。

2.2方法专属性

单独进样稀释用的溶剂，证明该溶剂对被测残留溶媒无干扰；单独进样每一个须测定的溶剂标准品，确定其保留时间；进样标准溶液，计算分离度以确定所有待检溶剂间无干扰。

溶剂名称：甲醇；保留时间：1.06 min；柱效N甲醇=4981。

2.3样品测定

分别检测三批供试品，得到测定结果(见表1)。

表1　样品测定结果Table 1　Sample test result

2.4检测限与定量限

利用信噪比法，即把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，计算出能被可靠地定量的被测物质的最低浓度。

将标准溶液分别用空白稀释，计算S/N。一般以信噪比S/N在3:1或2:1时相应浓度确定检测限浓度；一般以信噪比S/N 在10:1时相应浓度确定定量限浓度。检测限=0.003%，定量限=0.015%。

2.5线性关系

2.5.1溶液配制

(1)50%标准溶液：准确吸取标准贮备液0.5 mL，用二甲亚砜稀释至100.0 mL，摇匀(甲醇浓度：60.025 μg/mL)。

(2)80%标准溶液：准确吸取标准贮备液0.8 mL，用二甲亚砜稀释至100.0 mL，摇匀(甲醇浓度：96.04 μg/mL)。

(3)120%标准溶液：准确吸取标准贮备液1.2 mL，用二甲亚砜稀释至100.0 mL，摇匀(甲醇浓度：144.06 μg/mL)。

2.5.2计算

用已知溶剂定量称样并配制成相对浓度为定量限浓度、50%、80%、100%、120%五种测试溶液。每种溶液平行进样2次，计算平均峰面积。以样品平均浓度对相应平均峰面积做回归曲线，计算回归方程及相应的线性回归系数。

回归方程:Y=1.48850X-2.81059

相关系数:R=0.99863

2.6甲醇准确度

制备含已知溶剂为定量限(配制方法见2.4)、50%、100%、120%四种浓度的溶液(配制方法见2.5.1)。选择样品(0311203001)定量称样15份，其中3份作为空白，其余12份分别加入上述四种浓度的溶液，每种浓度的溶液平行加入三份样品中，进样。

甲醇回收率：96.81%～109.7%。

2.7耐用性

耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为所建立的方法用于日常检验提供依据。

此次选择考察的变动因素有：色谱柱、柱温、柱流速等。

表2　不同条件下残留溶剂检测结果Table 2　The reducing solvent analysis results at different conditions

经试验，测定条件小的变动能够满足系统适用性试验要求，可确保检验方法的可靠性。

2.8中间精密度

考察随机变动因素。此次验证选择的是不同日期、不同分析人员、不同仪器对精密度的影响。

表3　不同条件下残留溶剂检测结果Table 3　The reducing solvent analysis results at different conditions

经试验，测定条件小的变动能够满足系统适用性试验要求，检测结果均无显著差异，可确保检验方法的可靠性。

3　结　论

根据色谱条件，对本方法的专属性、检测限、定量限、系统适应性、系统精密度、线性关系、准确度、耐用性等进行验证。其柱效N甲醇=4981，检测限=0.003%，定量限=0.015%，并测得回收率96.81%～109.7%；线性范围预期从最小定量限到标准限度的120%范围内成线性关系，R≥0.99，结果符合规定。

根据实验结果，与方案中的标准进行比较，通过配制供试品溶液进行色谱分析，调整色谱条件，建立适用性要求。分析方法验证指导原则中的指标，本次采用的方法适合于相应检测要求，可保证专属、灵敏。此次维A酸残留溶剂检测分析方法验证成功。故此方法可用于维A酸残留溶剂检测，并可有效保证产品质量。

[1]中人民共和国药典2010年版2部[S].

[2]丛凡贺,李佳阳,辛潇.气相色谱法测定注射用头孢他啶中的残留溶媒[J].实用药物与临床,2009,12(S1):121-123.

[3]朱晓琼,冯文宇,刁恩德.GC法测定乙酰左旋肉碱盐酸盐残留溶剂[J].实用药物与临床,2013,16(S1):17-18.

Reducing Solvent in Tretinoin Analysis by GC

LI Jia-yang， LU Li-yan

(Northeast Pharmaceutical Group Co., Ltd., Liaoning Shenyang 110027, China)

Reducing methanol in tretinoin analysis method by GC was established. Using method chromatographic column DM-624(30 m×0.53 mm×3.0 μm), split ratio was 1:1, detector temperature was 200 ℃, injector temperature was 250 ℃, N2was used as carrier gas, column temperature procedure, hold temperature was at 60 ℃ for 5 min, and then increased the temperature to 220 ℃ at 40 ℃/min and holded 3 min. column rate was 10 mL/min, under CC mode, injection volume was 1 mL, FID was used as detector, headspace sampling. Result showed linear R≥0.99, methanol detector limitation ≤0.0050%. The method is accuracy and sensitive which is suit for reducing solvent in tretinoin analysis.

GC method; tretinoin; reducing solvent

O657.7+1

B

1001-9677(2016)09-0124-03