晋南蔓菁化学成分分析及蛋白质的含量测定

李卫红

（山西省医药与生命科学研究院，山西太原　030006）



晋南蔓菁化学成分分析及蛋白质的含量测定

李卫红

（山西省医药与生命科学研究院，山西太原030006）

晋南蔓菁为十字花科芸薹属植物，具有增强免疫等功效，在当地有“小人参”之称。为了对其所含化学成分及蛋白质的含量有所了解，采用系统预试验方法，对晋南蔓菁可能含有的化学成分进行鉴别，用考马斯亮蓝法测定蔓菁中蛋白质的含量；通过试管反应对蔓菁水提取液、石油醚提取液、95%乙醇提取液进行分析；用pH值为11的氢氧化钠溶液制备供试液，考马斯亮蓝染色法于595 nm处测定吸光度。结果表明，晋南蔓菁中含有蛋白质、多糖、有机酸、甾体、三萜及生物碱等化学成分；测得的蛋白质含量为1.90%。

晋南蔓菁；化学成分；蛋白质；考马斯亮蓝法

蔓菁（Brassica rapa L.） 为十字花科芸薹属植物。蔓菁根入药，性味平、辛、苦，具有开胃下气、利湿解毒的功效。晋南蔓菁是蔓菁的一个变种，其种子可以打油，是当地主要的油料作物；根可食用，在民间应用广泛，已有上百年的食用历史，其形似人参，富有营养，具有滋补功效，在当地被称为“小人参”。近年来，食源性抗癌成分的研究进展明确表明，十字花科植物在肿瘤预防中具有突出作用。在200多项流行病学研究资料中有80%的结果表明，食用植物性食物特别是十字花科植物，能够降低多种癌症（如肺癌、胰腺癌、膀胱癌、前列腺癌、甲状腺癌、皮肤癌、胃癌、结肠癌）的患病危险［1］。蔓菁含丰富的植物纤维，可增强胃肠活力、稀释毒素、降低致癌因子浓度，从而发挥排毒防癌作用。药理研究表明，蔓菁提取物具有抗缺氧［2］、提高免疫力［3］、抗辐射［4］等活性。目前，晋南蔓菁化学成分的测定未见报道，本文通过某些化合物的特征反应来初步确定晋南蔓菁所含化学成分［5］，采用考马斯亮蓝G-250染色法测定其中蛋白质的含量［6］，为其资源的开发利用提供科学依据。

1　材料与方法

1.1仪器与试剂

757型UV，上海精科仪器厂产品；KQ-250B型超声清洗仪，昆山市超声仪器有限公司产品；Thermo Fisher Lynx 6000 Label2型离心机，Thermo Fisher公司产品。

95%乙醇、石油醚、双缩脲试剂、茚三酮试剂、费林试剂、α-萘酚、浓硫酸、三氯化铁、氯化钠、明胶、溴酚蓝试剂、盐酸、镁粉、三氯化铝、浓氨水、氢氧化钾、氢氧化钠、异羟戊酸铁试剂、醋酸镁、3，5-二硝基苯甲酸、苦味酸、醋酐、氯仿硅钨酸、磷钼酸、碘化汞钾试剂、碘-碘化钾试剂、考马斯亮蓝G-250（中国科学院上海生物化学研究所8510211）、牛血清蛋白（SCIENTIFIC RESEARCH SPECIAL082013；晋南蔓菁，采自山西运城。

1.2方法

1.2.1蔓菁化学成分预试验

（1）样品制备。取一定量的蔓菁，于60℃下干燥2 h，放至室温后粉碎，粉末过60目筛，即为试验用蔓菁粉末。

（2）水提取供试液的制备。称取蔓菁粉末20 g，置于具塞磨口锥形瓶中，加去离子水200 mL，浸渍24 h，过滤后所得滤液即为冷水供试液。剩余滤渣在60℃水浴加热1 h，过滤后所得滤液即为热水供试液。

（3）石油醚提取供试液的制备。称取蔓菁粉末5 g，置于具塞磨口锥形瓶中，加石油醚50 mL，室温浸渍过夜，过滤后所得滤液即为石油醚供试液。

（4）乙醇提取供试液的制备。取蔓菁粉末50 g，置1 L圆底锥形瓶中，加入95%乙醇500 mL，置水浴上加热回流2 h，放冷，滤液即为乙醇供试液。

（5）方法。按各化合物特征反应方法进行试验。

1.2.2蔓菁中蛋白质的含量测定

（1）标准蛋白溶液的配制。精密称取牛血清蛋白0.010 g，用蒸馏水溶解，定容至10 mL，得1.0 mg/mL标准蛋白对照品溶液，4℃冰箱保存。

（2）考马斯亮蓝G-250溶液的配制。精密称取0.175 g考马斯亮蓝G-250，溶于50 mL 95%乙醇后，加入85%的磷酸100 mL，摇匀，为储备液。取储备液30 mL，加95%的乙醇15 mL，85%的磷酸30 mL，蒸馏水425 mL，摇匀，待用。

（3）供试样品溶液的制备。精密称取蔓菁粉末7.5 g，加10倍体积pH值11的氢氧化钠溶液，超声提取1 h，每隔10 min测pH值，并用氢氧化钠溶液调节至相应值。以转速4 000 r/min离心20 min，取上清液，定容至100 mL，得碱提法供试品溶液。

（4） 绘制标准曲线。分别量取0，0.02，0.04，0.05，0.06，0.08，0.10 mL的牛血清蛋白溶液于7个10 mL具塞试管中，各加水至1.0 mL，加考马斯亮蓝G-250溶液4 mL，摇匀，室温放置5 min后，于595 nm处测吸光度，绘制标准曲线。

（5）样品中蛋白质的含量测定。取0.05 mL供试品溶液于10 mL具塞试管中，加超纯水至1.0 mL，加考马斯亮蓝G-250溶液4 mL，摇匀，室温放置5 min。以蒸馏水为空白，于595 nm处测定吸光度。

2　结果与分析

2.1晋南蔓菁化学成分预试验

晋南蔓菁水提取液及石油醚提取液预试验结果见表1，乙醇供试液预试验结果见表2。

表1　晋南蔓菁水提取液及石油醚提取液预试验结果

由表1和表2可知，蔓菁主要含蛋白质、多糖、有机酸、甾体、三萜及生物碱等生物活性物质。

2.2蔓菁中蛋白质的含量测定方法学考察

2.2.1标准曲线的绘制

以标准溶液蛋白质的含量（μg）为横坐标、吸光度A595nm为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y=0.006 8X+0.095 1，R2=0.998 0。

2.2.2精密度试验

精密吸取6份牛血清蛋白标准溶液0.06 mL，测定吸光度。

标准蛋白精密度试验结果见表3。

由表3可知，本法分析精密度良好。

2.2.3稳定性试验

精密称取蔓菁粉末7.5 g，每隔5 min测1次吸光度。

稳定性试验结果见表4。

由表4可知，RSD为2.10%，表明15 min内显色反应较稳定。

2.2.4重复性试验

精密称取6份蔓菁粉末7.5 g，测定吸光度。

重复性试验结果见表5。

由表5可知，本方法的RSD为2.57%，说明该方法的重复性良好。

表2　乙醇供试液预试验结果

表3　标准蛋白精密度试验结果

表5　重复性试验结果

2.2.5回收率试验

精密称取蔓菁粉末3.75 g，加入标准牛血清蛋白70 mg，按照供试样品制备方法制备供试液。

回收率试验见表6。

由表6可知，样品加样回收率范围在92.53%～102.95%，RSD为2.97%，准确度较好。

2.3蔓菁中蛋白质的含量测定

精密称取3份蔓菁粉末7.5 g，用碱提法制备供试液。

表6 回收率试验

含量测定结果见表7。

表7 含量测定结果

由表7可知，计算得样品中蛋白质的含量为1.90%。

3　结论

晋南蔓菁含有丰富的营养物质，在当地有近百年的食用历史。采用化合物特征反应检测蔓菁化学成分，对晋南蔓菁的化学成分有了初步了解，在此基础上，可以对晋南蔓菁进行有针对性的分析研究。在与陕西合阳蔓菁所含的化学成分对比后［5］，二者的特征反应有些微小区别，说明陕西合阳与山西晋南的气候和土壤条件相似。其中，晋南蔓菁蛋白质的特征反应明显，有必要对蛋白质含量做进一步检测。蛋白质的测定方法有多种，如双缩脲法、福林酚法、凯氏定氮法等，但这些方法在测定蛋白质的含量时均存在不同程度的缺陷。如凯氏定氮法是测定粗蛋白的经典方法，但在测定提取液中的有效蛋白时，由于样品中非蛋白质含氮化合物的干扰，使得测定结果往往高于实际提取有效蛋白质的实际含量，且样品处理复杂、耗时长。福林酚法是灵敏度较高的方法之一，但该法专一性较差，提取过程中受甘氨酸、糖类等干扰较多。考马斯亮蓝法是一种常用的微量蛋白质含量测定方法，采用考马斯亮蓝法测定蔓菁中蛋白质含量的灵敏度高、操作简便、特异性强。考马斯亮蓝法常常在检测植物组织粗提液中可溶性蛋白质含量时被采用，在20～100 μg含量范围内线性关系良好，测蔓菁蛋白质在15 min内较稳定，超过15 min即出现数值偏差，所以染色后，15 min之内应完成测定。通过精密度、稳定性、重现性、加样回收率等方法学考察，表明该方法简单快速、精密度高、准确度及重现性好，是测定蔓菁中蛋白质含量的一种有效方法，为进一步分离测定蛋白和利用蔓菁资源提供了科学依据。

［1］单毓娟.十字花科蔬菜的癌症预防作用 ［J］.国外医学卫生学分册，2005，32（5）：35-37.

［2］谢玥，马超，蒋思萍，等.西藏芜根提取物对小鼠抗缺氧作用的初步研究 ［J］.四川动物，2009，28（6）：853-856.

［3］马龙，屈卫东，邓淑文，等.新疆芜菁抗衰老作用的实验研究 ［J］.新疆医学院学报，1998（1）：36-39.

［4］肖春霞.芜菁膏对脾虚湿盛型大肠癌FOLFOX4化疗减毒作用的临床观察 ［J］.新疆医学院学报，2011（6）：45-47.

［5］陈易彬.合阳蔓菁化学成分预实验及其药理活性研究 ［J］.食品科技，2011，36（3）：107-108.

［6］罗群.考马斯亮蓝法快速测定菜籽粕中可溶性蛋白质的含量 ［J］.成都大学学报，2014，33（2）：128-129.◇

文章编号：1671-9646（2016）07a-0055-02

Jinnan Manjing Chemical Composition Analysis and Determination of Its Protein Content

LI Weihong
（Shanxi Insititute of Medicine and Life Science，Taiyuan，Shanxi 030006，China）

Jinnan Manjing，which is locally known as“little ginseng”，belongs to the genus of Brassicaceae plant.It can enhance the immune system of the organism.In order to understand the chemical composition and the protein content of Manjing，system preliminary test and coomassie blue staining method are used in the experiment respectively.First，use the tube reaction to analyze Jinnan Manjing water extract，petroleum ether extract and 95%ethanol extract；then prepare the test solution with pH 11 NaOH solution，which is used with coomassie blue staining method to measure the absorbance value at 595 nm.The tests conclud that Jinnan Manjing contains protein，polysaccharide，organic acids，steroids，triterpenoids and alkaloids，etc.The protein contention in Jinnan Manjing is 1.90%.

Jinnan Manjing；chemical composition；protein；coomassie blue staining method

TS201

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2016.07.014

1671-9646（2016）07a-0048-03

2016-05-04

李卫红（1966— ），女，本科，高级工程师，研究方向为天然产物研究与开发。