两种精子处理方法对精子活力及正常形态率影响比较

谢文燕　白爱红

两种精子处理方法对精子活力及正常形态率影响比较

谢文燕白爱红

目的 比较上游法和密度梯度离心法对正常精液的处理效果。方法 回顾性分析2014年1月～2015年12月男方精液正常因女方因素来我院进行IUI的临床资料，比较上游法和密度梯度离心法后处理前后精子活力及正常形态率。结果 两种方法处理后精子活力和正常形态精子率均较处理前升高，精子活力的提高差异有统计学意义（P ＜0.05），与上游法相比，密度梯度离心法处理的精液具有更高的密度和正常形态精子比率（P＜0.05）。结论 对正常的精液，两种处理方法均能得到合适的精子，但对于液化不好的，或者精子总数少的以及精液正常精子比例少的患者，可采用密度梯度离心法处理精液。

精液处理；上游法；密度梯度离心法

作者单位：漯河市中心医院妇产科，河南 漯河 462003

宫腔内人工授精（intrauterine insemination，IUI）是将优选过的精子注入女性宫腔内，因其操作简单，费用低，是辅助生殖技术的优先选择项目［1-2］。精液处理是宫腔内人工授精的关键步骤，其目的是没有精浆，细胞碎片及病原微生物污染的精子悬液，回收足够量的正常形态活动力好的精子。目前常用的精液处理方法是上游法和密度梯度离心法。这两种方法各有优缺点，目前没有公认的最佳方法［3-5］。本研究回顾性分析2014年1月～2015年12月男方精液正常因女方因素来我院进行IUI的临床资料，共213周期，通过比较上游法和密度梯度离心法后精子活力及正常形态比率，以期寻找最佳的精液处理方法。

1　材料与方法

1.1研究对象

选择2014年1月～2015年12月于我院男方精液常规正常，因女方因素行IUI的患者，共213周期，96例。其中男方年龄23～39岁，不孕时间2～10年，原发性不孕58例，继发性不孕38例。根据精液处理方法分为两组，其中上游法处理103周期，密度梯度离心法处理110周期。上游组男性中原发不育31例，继发不育15例，平均年龄（30.5±2.7）岁，平均不育年限（3±1.6）年，平均精液体积（3.5±1.9）ml；密度梯度离心组男性中原发不育27例，继发不育23例，平均年龄（31.7±3.2）岁，平均不育年限（4±1.2）年，平均精液体积（4.4±2.1）ml；两组男性一般资料差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2精液采集与处理

1.2.1精液采集 嘱男方禁欲3～7 d，IUI当日手淫法排精。精液标本收集到一次性无毒取精杯中，37℃放置30 min。

1.2.2精液处理 待液化后分析精液常规参数，取10 μl精液涂片，自然晾干后采用巴氏染色法染片，油镜下分析正常形态精子比率。

1.2.3上游法 在圆底试管里加入液化后的精液，上层小心加入等体积的培养液（QUINN’S Sperm Washing Medium），把试管45°放置于5% CO2，37℃培养箱中。半小时后吸取上清液，1 500转/min离心10 min，弃上清。精子团用培养液稀释至0.6 ml备用。处理后精液进行常规参数分析，10 μl精液涂片，自然晾干后采用巴氏染色法染片，油镜下分析正常形态精子比率。1.2.4密度梯度离心法 在离心管中加入2 ml 80%梯度液（PureCeption），再小心加入等体积40%梯度液（PureCeption），把液化后的精液小心加入液面上。1 800转/min离心15 min，弃上清液，仅留最底层精子团。用2 ml培养液悬浮，再次1 200转/min离心5min。弃上清，精子团用培养液稀释至0.6 ml备用。

1.2.5处理后精液进行常规参数分析，10 μl精液涂片，自然晾干后采用巴氏染色法染片，油镜下分析正常形态精子比率。

1.3统计学处理

采用SPSS 13.0统计学软件分析数据，计量资料采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

两组处理前后精液参数结果：两组方法处理前，精液密度、活力、正常形态率间差异没有统计学意义（t精液密度=1.108 3，t活力=0.857 1，t正常形态率=0.993 7，P＞0.05）。两组方法处理后，活力均较处理前明显升高，差异有统计学意义（t上游法=14.564 5，t密度梯度离心法= 12.707 3，P＜0.05）；正常形态精子比例有升高，差异具有统计学意义（t上游法=3.564 6，t密度梯度离心法=6.786 1，P＜0.05）。两种方法处理后的精子活力相似，差异没有统计学意义（t=0.082 7，P ＞0.05）。上游法处理后精液密度低于梯度离心法处理的精液密度，差异有统计学差异（t=5.287 6，P＜0.05）。上游法处理后正常形态精子比率低于密度梯度离心法，差异没有统计学意义（t=0.7840，P＞0.05），见表1。

3　讨论

精液处理是人工授精取得成功的关键环节。其目的是获得足够数量的活动力好的精子，并使之同时获能。把处理好的精子悬液注入女性宫腔内，缩短精子在女性生殖道内游动距离，以期提高妊娠率。

表1　两组处理前后精液参数比较

本文中两种方法处理后的精子数量均能达到标准，但上游法回收的精子数少于密度梯度离心法，这是因为上游的回收率依赖于精子团表面积和精子活动力，由于细胞团有多层细胞，有潜在运动能力的精子可能处在细胞团内部，不能达到与培养液接触的界面［6］。采用上游法处理精液能达到去除精浆及精浆内抑制受精的物质，如前列腺素、异性蛋白、抗精子抗体及各种非精子细胞成分［7］。Erel等［8］认为，异常精子经密度梯度离心法处理后，得到精子的顶体反应率、低渗肿胀实验阳性率和核成熟的精子比率均高于上游法，密度梯度离心法处理精液后精子回收率较高。但密度梯度离心法多次的离心可能会对精子微观结构造成破坏。与上游法相比，密度梯度离心在增加正常精子数量方面显出优势［9］，这与我们的结果相似。

对正常的精液，两种方法处理均能获得用于人工授精的精子。但对于液化不好的，或者精子总数少的以及精液正常精子比例少的患者，可采用密度梯度离心法处理精液，以达到获取足够数量和活力精子的目的。

［1］张丽珠. 临床生殖内分泌与不育症［M］. 北京：科学技术出版社，2001：5.

［2］谭玉梅，宋革，祝晓丽，等. 密度梯度离心联合上游法的精液处理在供精体外受精胚胎移植中的应用［J］. 中国医学创新，2015，12（22）：56-58.

［3］郭永成，邢光卫，夏冰，等. 弹性髓内钉与外固定架修复儿童股骨干骨折的Meta分析［J］. 中国组织工程研究，2015，19（31）：5072-5078.

［4］黄茜，丘映，许常龙，等. 精子优选方法对人工授精治疗结局的影响［J］. 中国性科学，2013，22（6）：35-37.

［5］许观照，张丽红，王时灿，等. 精子冻存技术及上游法精子处理技术对精子DNA完整性的影响［J］. 生殖医学杂志，2013，22（12）：945-950.

［6］张扬，皮洁. 辅助生殖技术中的精液处理［J］. 中国优生与遗传杂志，2008，18（8）：126-127.

［7］王自然，何全中. 精子的体外优化计数［J］. 新乡医学院学报，2002，19（6）：513-516.

［8］Erel CT，Senturk LM，Irez T，et al. Sperm-preparatio techniques for men with normal and abnormal semen analysis A comparison［J］. J Repord Med.，2000，45（11）：917-922.

［9］Prakash P，Leykin L，Chen Z，et al. Preparation by differential gradient centrifugation is better than swim-up in selecting sperm with normal［J］. Fertil Steril，1998，69（4）：722-726.

Comparison the Effect of Two Kinds of Processing Methods on Sperm Motility and Normal Morphology Sperm Rate

XIE Wenyan BAI Aihong Department of Obstetrics and Gynecology， Luohe Central Hospital， Luohe He’nan 462003， China

Objective To compare the treatment effect of normal sperm by Swim-up and density gradient centrifugation. Methods From January 2014 to December 2015， the clinical data of IUI because of female factors and male sperm normal were retrospectively analyzed to compare the effect of swim-up and density gradient centrifugation on sperm motility and normal morphology sperm rate. Results Sperm motility and normal morphology sperm rate were increased after two kinds of treatment， there was a significant difference in sperm motility （P＜0.05）， after density gradient centrifugation， density and normal morphology sperm rate were significantly higher than after Swim-up （P＜0.05）. Conclusion For normal sperm， two kinds of methods both can get a proper sperm，but for bad liquefied， less total sperm number and patients with normal sperm but low sperm percentage， density gradient centrifugation may be a better way.

Sperm preparation， Swim-up， Density gradient centrifugation

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.19.086

R698

A

1674-9308（2016）19-0135-03