院内深部念珠菌感染菌种分布和耐药性分析

秦晓峰　王英　吴建华　顾军

(第二军医大学附属长海医院皮肤科，上海 200433)



院内深部念珠菌感染菌种分布和耐药性分析

秦晓峰王英吴建华顾军

(第二军医大学附属长海医院皮肤科，上海 200433)

目的了解我院深部念珠菌感染的类型、分布及耐药现状，指导临床用药。方法采用常规方法分离培养真菌，对我院2012年6月～2014年5月培养出的念珠菌用科玛嘉念珠菌显色培养基和API 20C AUX进行鉴定，同时使用ROSCO纸片扩散法进行药敏试验。结果共分离出念珠菌2 725株，其中白念珠菌最多 (64.73%)，其次为热带念珠菌 (13.64%)、光滑念珠菌 (10.57%)和克柔念珠菌 (2.35%)；念珠菌检出构成比以痰液最高 (45.39%)，其次为中段尿 (22.06%)和咽拭子 (16.66%)；4种念珠菌对两性霉素B和5-氟胞嘧啶均表现出较高的敏感性。结论院内深部念珠菌感染仍以白念珠菌为主，念珠菌对两性霉素B和5-氟胞嘧啶的耐药率较低，对唑类药物存在不同程度的耐药。

院内感染；念珠菌，深部；药敏试验；耐药性

[Chin J Mycol，2016，11(3):166-168]

随着广谱抗生素、糖皮质激素和免疫抑制剂的广泛应用，外科介入疗法的逐渐增多，肿瘤放疗、化疗的影响以及免疫功能低下患者 (HIV感染者、器官移植患者)的不断增多，院内深部真菌感染尤其是念珠菌感染的发生率日渐增高，同时致病真菌的种类、分布及其耐药性也在不断变化[1-2]。为了了解目前临床深部念珠菌感染的种类、分布及耐药情况，我们对我院2012年6月～2014年5月从临床标本中分离获得的2 725株念珠菌进行了回顾性分析，报告如下。

1　材料与方法

1.1标本来源

所有菌株均分离自我院2012年6月～2014年5月临床各科室送检的痰液、中段尿、粪便、咽拭子、血液、支气管肺泡灌洗液 (BALF)等标本。若同一患者同一部位标本重复送检，分离出同一菌种，统计时只统计一次。

1.2仪器与试剂

SDA培养基、血平板、科玛嘉念珠菌显色培养基 (郑州博赛生物技术股份有限公司)，API-20C AUX酵母鉴定板 (法国生物梅里埃公司)，ROSCO药敏纸片 (丹麦ROSCO公司)。

1.3分离与鉴定

所有送检标本均直接接种于SDA培养基或血平板，于37℃培养3 d，观察初代分离菌落的颜色和质地。酵母菌菌落为乳酪样、湿润发亮或膜状。如初步判断为酵母菌，则选择阳性菌落进行分离、纯化，并转种科玛嘉念珠菌显色培养基，置于30℃培养24～48 h，在念珠菌显色培养基上生长的翠绿色菌落为白念珠菌，蓝灰色菌落为热带念珠菌，粉紫色菌落为光滑念珠菌，淡粉色、紫色菌落为克柔念珠菌，白色菌落为其他念珠菌，结合API-20C AUX酵母鉴定板鉴定。

1.4药敏试验

利用ROSCO纸片扩散法对分离到的白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌和克柔念珠菌进行5-氟胞嘧啶、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B药敏试验，操作方法参考ROSCO公司提供的使用说明，抑菌环直径判读标准：敏感≥20 mm，中介12～19 mm，耐药≤11 mm。

1.5质控菌株

白念珠菌ATCC64548 (氟康唑敏感株)，白念珠菌ATCC64550 (氟康唑耐药株)，光滑念珠菌ATCC2238NL。

2　结　　果

2.1念珠菌菌种分布

2012年6月～2014年5月送检标本中共检出念珠菌2 725株，其中白念珠菌最多，为1 764株，占64.73%；热带念珠菌375株，占13.76%；光滑念珠菌288株，占10.57%；克柔念珠菌64株，占2.35%；其他念珠菌234株，占8.59%。

从检出标本的来源来看，痰液检出1 237株，占45.39%；中段尿检出601株，占22.06%；咽拭子检出454株，占16.66%；粪便检出319株，占16.66%；血液、支气管肺泡灌洗液、其他标本分别检出16株、13株、85株。

从菌株在标本中的分布看，白念珠菌、热带念珠菌及克柔念珠菌都是以痰液中检出率最高，分别为49.26% (869/1 764)、38.13% (143/375)、51.56% (33/64)，光滑念珠菌则以中段尿中检出率最高，为43.06% (124/288)(见表1)。

表1　2012年6月～2014年5月我院念珠菌鉴定结果及分布

2.2真菌药敏试验结果

4种念珠菌对两性霉素B的敏感性较高，耐药率较低，对5-氟胞嘧啶的耐药性也很低，而对唑类药物存在不同程度的耐药 (见表2)。

3　讨　　论

近年来，随着现代医学的迅速发展，先进诊疗技术的使用，临床深部真菌感染日益增多且趋向复杂化，常可导致致死性终末感染[3]。念珠菌是临床上常见的条件致病性真菌，种类颇多，引起的深部感染急剧上升，已经成为医院内深部真菌感染的主要病原菌。

我们分离的2 725株念珠菌中，白念珠菌最多，占64.73%，这与文献报道一致[4-6]。其次为热带念珠菌，占13.76%，光滑念珠菌和克柔念珠菌分别占10.57%、2.35%。由此可以看出，如今念珠菌感染谱已发生明显变化，由念珠菌属的非白念珠菌引起的感染日趋增加，特别是热带念珠菌和光滑念珠菌的致病性应当引起高度重视。从念珠菌在各种临床标本中的分布来看，67.45%的念珠菌都是分离自痰与中段尿标本，它们在痰与中段尿中的分离率分别为45.39%和22.06%，提示医院真菌感染主要以呼吸道、泌尿道感染为主[7]。由于上呼吸道、泌尿道与外界相通，且念珠菌常存在于人上呼吸道、泌尿道和阴道黏膜，当机体免疫功能因疾病或呼吸机、气管插管、留置导尿等医源性因素受到损害时，可引起继发性感染。因此对呼吸、泌尿系统感染者，应尽量减少导致真菌感染的因素，加强对真菌感染的预防和控制。同时自咽拭子中共分离出念珠菌454株，其中白念珠菌为336株，而白念珠菌又是口腔内存在的正常菌群，口腔内的白念珠菌能否引起深部念珠菌感染尚不明确。

表2　临床分离念珠菌对抗真菌药物的敏感性(%)

药敏试验结果表明，4种常见念珠菌对两性霉素B均未检测出耐药性，两性霉素B是多烯类抗真菌药，抗真菌疗效好，由于不良反应多、肝肾毒性明显，临床使用较少，但仍然推荐用于耐唑类药物的念珠菌感染。4种念珠菌对5-氟胞嘧啶的耐药性也很低，仅2.7%的白念珠菌对其耐药。5-氟胞嘧啶是一种半合成的抗真菌药物，被真菌细胞吸收后可干扰真菌细胞RNA和DNA的合成，对多种真菌感染有效。由于5-氟胞嘧啶也可导致严重的肝肾毒性，故该药很少用于临床。但对于复杂难治的真菌感染,联合应用两性霉素B和5-氟胞嘧啶治疗,其疗效均优于单独用氟康唑。4种念珠菌对唑类药物存在不同程度的耐药，白念珠菌和热带念珠菌对唑类药物的敏感性较高，白念珠菌对氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑的敏感性分别为74.5%、79.2%和82.4%，热带念珠菌对氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑的敏感性分别为71.2%、67.7%和79.5%，而光滑念珠菌和克柔念珠菌对唑类药物的敏感性相对较低。这一方面与临床上氟康唑的应用较多有关，另一方面可能和光滑念珠菌和克柔念珠菌对唑类药物的天然耐药有关，第三代唑类抗真菌药物伏立康唑的耐药性最低，可能与其在临床上应用相对较少有关[8]。本次药敏结果与文献报道不尽相同[4-6]，可能与不同地区、人群、时间以及医院抗真菌药物的使用情况有关,因此要强调常规开展真菌菌种鉴定和药敏试验的重要性，以指导临床合理用药。

目前深部真菌感染尤其是念珠菌感染已成为医院感染的主要因素，严重危及患者生命，临床上一旦怀疑存在深部真菌感染，医生往往会预防性应用抗真菌药物，一方面说明人们对深部真菌感染已引起足够的重视，另一方面抗真菌药物的滥用也会引起真菌耐药性的产生，进而影响治疗效果。因此，院内真菌感染的早期确诊非常重要，尤其是要尽快得到病原学诊断[9]。同时，我们应当加强对环境微生物学的监测与消毒管理，注意无菌操作技术，减少侵入性操作，大力提倡一次性医疗用品的使用，合理使用抗生素和糖皮质激素，从而降低院内真菌感染的发生率。

[1]金璐,黄世恩,邓旻,等.真菌感染与耐药性变迁分析[J].中华医院感染学杂志,2015,25(7):1490-1492.

[2]刘永芳,张浩,陈金文,等.医院感染念珠菌菌种分布及耐药情况分析[J].中国抗生素杂志,2015,38(5):473-475.

[3]Ramana KV,Kandi S,Bharatkumar VP,et al.Invasive fungal infections:a comprehensive review[J].Am J Infect Dis Microbiol,2013,1(4):64-69.

[4]彭丽娟,胡妮娅,杜经纬,等.医院患者深部真菌感染的临床分布与耐药性分析[J].中华医院感染学杂志,2015,25(22):5122-5124.

[5]李宗辉,孔庆涛,邓琳,等.住院患者深部真菌感染的病原菌分布及药敏分析[J].实用皮肤病学杂志,2015,8(3):167-170.

[6]周祥文,汪勇军,吴先华.深部真菌感染的病原菌分布及药敏分析[J].中华医院感染学杂志,2014,24(3):596-598.

[7]余旭良,祝进,陆军,等.深部真菌感染动态变化分析[J].中华医院感染学杂志,2013,23(21):5362-5364.

[8]李红宾,董天祥,李玉叶,等.综合医院住院患者抗真菌药物使用情况回顾调查[J].皮肤病与性病,2014,36(6):313-314.

[9]桑军军,潘炜华,廖万清.深部真菌感染早期诊断的现况与策略[J].上海医药,2014,35(9):4-7.

Distribution and drug resistance analysis of nosocomial deepCandidainfection pathogens

QIN Xiao-feng,WANG Ying,WU Jian-hua,GU Jun

(Desect1mentofDermatology,ChanghaiHospital,SecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200433,China)

ObjectiveTo understand the nosocomial deepCandidainfection types,pathogenic strain distribution and the susceptibility to common antifungal agents,to provide reliable basis for clinical diagnose and treatment.MethodsThe fungi were isolated and cultured by using the conventional methods and identified by CHRO mager medium and API-20C AUX test.The drug susceptibility test was determined by ROSCO disc diffusion method.ResultsTotally 2 725 strains ofCandidaspp.were isolated,includingCandidaalbicans(64.73%),Candidatropicalis(13.64%),Candidaglabrata(10.57%) andCandidarusei(2.35%).TheCandidaspp.were isolated from the sputum (45.39%),the urine (22.06%) and the throat swab (16.66%) respectively.The fourCandidaspecies were sensitive to amphotericin B and 5-fluorocytosine.ConclusionCandidaalbicanswas still the most commonCandidaspp.in the nosocomial deepCandidainfections.The drug resistance rates of amphotericin B and 5-fluorocytosine were the lowest,while there was a genus difference in drug resistance of the azole drugs.

nosocomial infection;Candida,deep;drug susceptibility test;drug resistance

2016-02-26[本文编辑]王飞

973项目 (2013CB531602)

秦晓峰，男 (汉族)，博士研究生在读，主治医师.E-mail:qinxiaofeng79@126.com

顾军,E-mail:gujun79@163.com;吴建华，E-mail:wujh_ch@163.com

R 519.3

A

1673-3827(2016)11-0166-03