替加环素、米诺环素对VanM型万古霉素耐药屎肠球菌体外抗菌活性

陈春辉，郭　燕，吴　湜，杨　洋，胡付品，朱德妹，徐晓刚



替加环素、米诺环素对VanM型万古霉素耐药屎肠球菌体外抗菌活性

陈春辉，郭燕，吴湜，杨洋，胡付品，朱德妹，徐晓刚

摘要：目的 了解替加环素及米诺环素对VanM型万古霉素耐药屎肠球菌临床分离株的体外抗菌活性。方法 收集2006 —2014年上海地区临床分离VanM型万古霉素耐药屎肠球菌45株；采用PCR扩增及测序确认菌种和万古霉素耐药基因型；测定替加环素及米诺环素等10种抗菌药物对VanM型万古霉素耐药屎肠球菌的MIC。结果 45株临床分离株均确认为VanM型万古霉素耐药屎肠球菌；所有菌株对万古霉素高度耐药（MIC 128～＞256 mg/L），对替考拉宁耐药率为71.1%。几乎所有菌株对左氧氟沙星（100%）和氨苄西林（97.8%）耐药，对米诺环素、庆大霉素和利福平的耐药率分别为15.6%、64.4%和82.2%，未检出替加环素和利奈唑胺耐药株。结论 替加环素和米诺环素对VanM型万古霉素耐药屎肠球菌有良好的体外抗菌活性。

关键词：替加环素； 米诺环素； 万古霉素； 耐药； 屎肠球菌

自1988年万古霉素耐药肠球菌（VRE）在欧洲报道以来［1］，VRE已迅速波及世界各地，成为医院感染的重要病原菌。由于此类耐药株多数表现为多重耐药，临床治疗困难，给患者生命与健康带来严重威胁［2-3］。VanM型VRE于2006年在上海地区分离的万古霉素耐药屎肠球菌临床株中发现，同期分离的该基因型菌株具有多重耐药表型，但多数菌株对多西环素敏感［4］，故四环素类药物有望用于VanM型万古霉素耐药屎肠球菌所致感染。米诺环素与多西环素同属四环素类，替加环素则为米诺环素的衍生物。本研究收集了上海地区的VanM型万古霉素耐药屎肠球菌临床分离株，就替加环素及米诺环素对该菌株的体外抗菌活性进行分析，以期为临床抗菌药物选择提供客观依据。

1. 材料与方法

1.1细菌来源

1.1.1 临床分离株 2006年1月—2014年4月在上海地区临床分离的万古霉素耐药屎肠球菌45株。

1.1.2 质控菌株 粪肠球菌ATCC29212为复旦大学附属华山医院抗生素研究所保存菌株。

1.2培养基及抗菌药物

Mueller-Hinton琼脂、BHI琼脂及肉汤（英国OXOID公司）；阳离子调节MH肉汤（美国BD公司）。万古霉素、替考拉宁、米诺环素、红霉素、左氧氟沙星、庆大霉素、氨苄西林以及利福平等抗菌药物购自中国食品药品检定研究院；替加环素E试验药敏纸片为法国生物梅里埃公司产品。

1.3分子生物学及生化试剂

Taq DNA聚合酶、dNTP、为大连宝生物工程有限公司（TaKaRa）产品；琼脂糖为美国Bio-Rad公司产品。

1.4临床株菌种确认及万古霉素耐药基因分型

1.4.1 菌种确认 采用通用引物8F、1492R（序列见表1）扩增临床分离VRE菌株的16S rRNA基因，扩增产物测序后与GenBank序列进行比对，以进一步确认菌种。

1.4.2 耐药基因分型 采用万古霉素耐药基因通用引物（序列见表1）扩增万古霉素耐药基因，扩增产物经测序、比对，确定万古霉素耐药基因型。

表1　引物序列Table 1 Primers used in this study

1.5药物敏感性试验

万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、红霉素、左氧氟沙星、庆大霉素、米诺环素以及利福平等抗菌药物用琼脂稀释法测定药敏，参照CLSI 2012版推荐方法进行［6］。替加环素E试验法按说明书操作步骤完成。药物敏感性判断标准参照CLSI 2012版［6］。替加环素敏感性参照欧洲抗菌药物敏感试验委员会（European Committee on Antimicrobial Susceptibility testing.http：//www.eucast.org）判断标准：MIC≤0.25 mg/L为敏感。

2　结果

2.1菌种确认及万古霉素耐药基因分型

经PCR扩增及测序分析，45株临床分离菌均为屎肠球菌，且携带vanM基因，即所有菌株均确认为VanM型万古霉素耐药屎肠球菌。

2.2药物敏感性

VanM型万古霉素耐药屎肠球菌对替加环素、米诺环素及其他8种抗菌药物的敏感性见表2。未发现替加环素耐药株，米诺环素耐药率仅为15.6%。

表2　VanM型万古霉素耐药屎肠球菌对10种抗菌药物的MIC值Table 2 MICs of 10 antimicrobial agents against VanM-type vancomycin-resistant E. faecium isolates

3　讨论

VRE已在我国多地出现并传播［7-8］。VanM型VRE是发现于上海地区的新型VRE［4］，耐药表型与VanA型VRE相似，不仅对万古霉素等糖肽类抗菌药物耐药，对氨苄西林、庆大霉素等也大多耐药，呈多重耐药表型，其所致感染临床可供治疗的药物有限。近年来上海地区VanM型VRE逐渐增多［9］，如何应对此类耐药菌感染值得关注。

目前临床采用的四环素类药物包括多西环素和米诺环素，近年在国内上市的替加环素则是米诺环素的衍生物，属甘氨酰环素类抗生素，不但对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌等革兰阴性菌有效，对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌等革兰阳性菌也有抗菌活性。虽然目前替加环素仅被推荐用于万古霉素敏感粪肠球菌所致复杂性皮肤软组织感染及腹腔感染，但已有文献报道替加环素单药或联合其他药物成功治疗VRE所致的腹腔及皮肤软组织感染［10］。

为进一步了解米诺环素及替加环素对VanM型万古霉素耐药屎肠球菌的体外抗菌活性，本研究收集了45株VanM型菌株，测定了它们对米诺环素、替加环素以及其他8种抗菌药物的敏感性。结果显示，所有VanM型耐药株对替加环素和利奈唑胺均敏感，对米诺环素的耐药率为15.6%，远低于氨苄西林（97.8%）、左氧氟沙星（100%）、利福平（82.2%）、庆大霉素（64.4%）等抗菌药物，表明米诺环素、替加环素对该型VRE具有良好的体外抗菌活性，如能得到体内研究的进一步证实，可作为临床治疗万古霉素耐药屎肠球菌感染的备选药物。

参考文献：

［1］UTTLEY AH， COLLINS CH， NAIDOO J， et al. Vancomycinresistant enterococci［J］. Lancet， 1988， 1（8575-6）：57-58.

［2］ARIAS CA， CONTRERAS GA， Murray BE. Management of multidrug-resistant enterococcal infections［J］. Clin Microbiol Infect， 2010， 16（6）：555-562.

［3］LAM S， SINGER C， TUCCI V， et al. The challenge of vancomycin-resistant enterococci： a clinical and epidemiologic study［J］. Am J Infect Control， 1995， 23（3）：170-180.

［4］XU X， LIN D， YAN G， et al. vanM， a new glycopeptide resistance gene cluster found in Enterococcus faecium［J］. Antimicrob Agents Chemother， 2010， 54（11）：4643-4647.

［5］GEE JE， DE BK， LEVETT PN， et al. Use of 16S rRNA gene sequencing for rapid confirmatory identification of Brucella isolates［J］. J Clin Microbiol， 2004， 42（8）：3649-3654.

［6］Clinical and Laboratory Standards Institute 2012. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing［S］. Twenty-Second Informational Supplement M100-S22.

［7］CHENG VC， TAI JW， CHEN JH， et al. Proactive infection control measures to prevent nosocomial transmission of vancomycin-resistant enterococci in Hong Kong［J］. J Formos Med Assoc， 2014， 113（10）：734-741.

［8］KANG M， XIE Y， HE C， et al. Molecular characteristics of vancomycin-resistant Enterococcus faecium from a tertiary care hospital in Chengdu， China： molecular characteristics of VRE in China［J］. Eur J Clin Microbiol Infect Dis， 2014， 33（6）：933-939.

［9］CHEN C， SUN J， GUO Y， et al. High prevalence of vanM in vancomycin-resistant Enterococcus faecium isolates from Shanghai， China［J］. Antimicrob Agents Chemother， 2015，59（12）：7797-7798.

［10］HEIZMANN WR， LöSCHMANN PA， ECKMANN C， et al. Clinical efficacy of tigecycline used as monotherapy or in combination regimens for complicated infections with documented involvement of multiresistant bacteria［J］. Infection，2015， 43（1）： 37-43.

中图分类号：R978

文献标识码：A

文章编号：1009-7708（2016）03-0327-03

DOI：10.16718/j.1009-7708.2016.03.013

收稿日期：2015-06-01 修回日期：2015-11-20

基金项目：国家自然科学基金（81171613）。

作者单位：复旦大学附属华山医院抗生素研究所，卫生部抗生素临床药理重点实验室，上海 200040。

作者简介：陈春辉（1987—）女，博士研究生，主要从事感染性疾病的诊治及细菌耐药机制研究。

通信作者：徐晓刚，E-mail：xuxiaogang@fudan.edu.cn。

In vitro activity of tigecycline and minocycline against VanM-type vancomycinresistant Enterococcus faecium

CHEN Chunhui， GUO Yan， WU Shi， YANG Yang， HU Fupin， ZHU Demei， XU Xiaogang. （Institute of Antibiotics，Huashan Hospital， Fudan University； Key Laboratory of Clinical Pharmacology of Antibiotics， Ministry of He alth， Shanghai 200040， China）

Abstract:Objective To investigate the in vitro activity of tigecycline and minocycline against VanM-type vancomycin-resistant Enterococcus faecium. Methods A total of 45 strains of VanM-type vancomycin-resistant E. faecium were obtained from hospitals in Shanghai between 2006 and 2014. Species and vancomycin resistance genotype were identifed by PCR and sequencing analysis. Minimal inhibitory concentrations （MICs） of ten antimicrobial agents against these strains were determined. Results All the 45 isolates were VanM-type vancomycin-resistant E. faecium， and resistant to vancomycin （MIC： 128 to ＞256 mg/L）. And 71.1% of the strains were resistant to teicoplanin. Almost all isolates showed resistance to levofoxacin （100%） and ampicillin （97.8%）. About 15.6%， 64.4% and 82.2% of the strains were resistant to minocycline， gentamicin and rifampicin， respectively. Conclusion Tigecycline and minocycline exhibit excellent in vitro activity against these VanM-type vancomycin-resistant E. faecium isolates.

Key words:tigecycline； minocycline； vancomycin； antibiotic resistance； Enterococcus faecium