Keap1在前列腺癌中的表达和临床意义

张普 孔丽敏 金雷钢 俞佳文 卢婷婷

Keap1在前列腺癌中的表达和临床意义

张普 孔丽敏 金雷钢 俞佳文 卢婷婷

目的 探讨Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白 1（Keap1）在前列腺组织中的表达与临床意义。方法 2001年1月至2008年10月手术治疗的前列腺癌患者（73例）和良性前列腺增生患者73例，通过免疫组织化学方法检测Keap1蛋白在前列腺癌和良性前列腺增生中的表达，并探讨其表达的临床意义。 结果 Keap1蛋白在前列腺癌组织中阳性表达率21.9%，显著低于良性前列腺增生组织82.2%（P＜0.05）；Keap1蛋白的的阳性表达率与前列腺癌患者的年龄和T分类无关，与患者的Gleason评分、有无淋巴结转移和远处转移相关（P＜0.05）；Kaplan-Meier 生存分析结果显示Keap1蛋白阳性表达的患者5年生存率显著高于于阴性表达的患者（P=0.04） 结论 Keap1蛋白可能是前列腺癌发生和发展中的重要参与者。

良性前列腺增生 前列腺癌 Kelch样环氧氯丙熔相关蛋白l

前列腺癌是严重威胁男性生命健康的恶性肿瘤之一［1］，随着我国社会经济的快速发展、人民生活水平的提高、人口老龄化的加剧以及饮食结构的改变，前列腺癌在我国的发病率呈现逐年增加的趋势［2］，然而，前列腺癌发生、发展的具体机制尚未完全阐明，临床上尚缺乏特效的化疗药物［3］。Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1）是一种重要的抑制肿瘤生长因子［4］，研究表明其在多种肿瘤的发生、发展中发挥重要的作用。本文通过探讨Keap1在前列腺癌组织中的表达并与患者的临床特征和预后的关系，以期为前列腺癌的治疗和预后判断提供新的思路和方法。

1　 临床资料

1.1 一般资料 选择2001年1月至2008年10月本院接受手术治疗并经术后病理检查证实的前列腺癌患者73例，年龄（62±8.1）岁；良性前列腺增生患者73例，年龄（63±7.5）岁。所有患者的诊断均经过病理学检查证实，本项目经过本院伦理委员会批准，患者术前签署知情同意书。收集的资料包括姓名、年龄、术前术后辅助检查的结果、TNM分期、Gleason评分、治疗情况等。排除术前接受过放、化疗治疗的患者。

1.2 免疫组织化学和HE染色 术中切除的新鲜标本在4℃中性福尔马林中浸泡2d，石蜡包埋，6μm石蜡组织切片经二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化后，进行抗原修复，采用兔免疫血清封闭，Keap1（美国Abcom公司） 抗体孵育，37℃温箱中2h，PBS充分冲洗后，二抗孵育1h，PBS洗后加入辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素作用15min，PBS冲洗后DAB显色，苏木精复染，镜下观察。采用PBS代替一抗作阴性对照。同时行常规HE染色，操作步骤严格按照标准进行。

1.3 免疫结果判断标准 有两位有经验的病理科医师采用双盲法判读，每张切片在高倍镜下（×400）计数15个视野，平均100个细胞中Keap1阳性细胞的个数为阳性细胞率。免疫组化阳性结果（ 细胞浆中出现棕黄色颗粒）的判读参照以往文献［5］，阳性细胞的染色强弱∶ 阴性为0分； 淡黄色为1分； 黄色为2分； 棕黄色为3 分。最终结果判定∶ 0～2分为阴性，3～7分为阳性。阳性细胞的百分比判断标准：0%～5%为阴性表达；6%～25%为弱阳性；26%～75%为中度阳性；＞76%为强阳性。

1.4 统计学分析 用SPSS17.0 软件。计数资料用χ2检验，Kaplan-Meier 法进行生存分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　 结果

2.1 前列腺癌和良性前列腺增生组织中Keap1蛋白的表达 见图1、表1。

图1 良性前列腺增生和前列腺癌组织中Keap1的典型表达检测结果

表1 良性前列腺增生和前列腺癌组织中Keap1阳性表达结果分析［n（%）］

2.2 Keap1的表达与前列腺癌临床病理特征分级间的关系 见表2。

表2 Keap1与前列腺癌临床病理特征分级间的关系（n）

2.3 Keap1的表达与临床预后之间的关系 Keap1 阳性表达的患者5年生存率明显高于Keap1阴性表达的患者（P=0.01）。见图2。

图2 Keap1表达与患者五年生存率之间的关系

3　 讨论

在生理状态下，Keap1与NF-E2相关因子2（Nrf2）结合，将Nrf2锚定于由肌动蛋白构成的细胞骨架上，阻碍Nrf2由细胞浆向细胞核内的转录［6］；当外界的亲电试剂、活性氧簇刺激时，Keap1与Nrf2蛋白发生解偶联，脱离Keap束缚的Nrf2从胞浆转移到细胞核内，与Maf蛋白结合成异二聚体后识别抗氧化反应元件，从而促进下游2相解毒酶、蛋白酶体、泛素酶及抗氧化蛋白类基因的转录和表达，从而达到提高细胞抗氧化应激的能力，Nrf2在肿瘤的发生和发展中发挥重要作用［7］。最近研究发现Keap1是一种重要的肿瘤抑制因子，在多种肿瘤的发生和发展中发挥重要的作用：研究者对119名乳腺癌患者的Keap1同时进行分析，发现Keap1表达量低与乳腺癌患者的高病死率有关［8］；在非小细胞肺癌组织中，Keap1高表达的患者无疾病进展生存期显著高于低表达组［7］，此外Keap1的表达量还是影响肺癌患者化疗疗效的重要因素［9］，重要的最近一项研究发现Keap1蛋白的缺失，可以促进前列腺癌细胞的增殖和增强药物抵抗性［10］，以上结果提示Keap1同样在前列腺癌细胞的发展和侵袭中发挥重要的作用。

本资料结果显示，Keap1阳性表达者主要位于细胞浆中，在前列腺癌组织中的阳性表达率显著低于良性前列腺增生，综合以往研究结果［11］，提示导致Keap1表达个体的差异机制可能是由于遗传背景、Keap1甲基化和Nrf2突变。此外，本资料还发现Keap1蛋白的阳性表达情况与患者的年龄、T分类无关，而与患者的Gleason评分、淋巴结转移和远处转移呈正相关。Keap1阳性表达的患者5年生存率显著高于阴性表达的患者，这可能与Keap1高表达的肿瘤组织其细胞增殖和转移能力下降相关。

综上所述，Keap1蛋白在前列腺癌组织中的表达率显著降低，并与患者的预后密切相关，提示Keap1对于判断前列腺癌患者的预后可能具有重要意义。

1 Burotto M， Singh N， Heery CR， et al. Exploiting synergy： immunebased combinations in the treatment of prostate cancer. Front Oncol，2014，4：351.

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3 Fowler JE Jr， Mounzer A. Advances in the surgical treatment of localized cancer of the prostate. Surg Annu， 1989，21：327～341.

4 Leinonen HM， Kansanen E， Polonen P， et al. Role of the Keap1-Nrf2 pathway in cancer. Adv Cancer Res， 2014，122：281～320.

5 Huang CF， Zhang L， Ma SR， et al. Clinical significance of Keap1 and Nrf2 in oral squamous cell carcinoma. PLOS ONE， 2013，8（12）：e83479.

6 Kansanen E， Kuosmanen SM， Leinonen H， et al. The Keap1-Nrf2 pathway： Mechanisms of activation and dysregulation in cancer. Redox Biol， 2013，1（1）：45～49.

7 Solis LM， Behrens C， Dong W， et al. Nrf2 and Keap1 abnormalities in non-small cell lung carcinoma and association with clinicopathologic features. Clin Cancer Res， 2010，16（14）：3743～3753.

8 Barbano R， Muscarella LA， Pasculli B， et al. Aberrant Keap1 methylation in breast cancer and association with clinicopathological features. Epigenetics， 2013，8（1）：105～112.

9 曹宝山， 朱翔， 陈森， 等. Keap1在非小细胞肺癌中的表达及与化疗疗效相关性的研究. 中国肺癌杂志， 2012，15（10）：591～596.

10 Zhang P， Singh A， Yegnasubramanian S， et al. Loss of Kelch-like ECH-associated protein 1 function in prostate cancer cells causes chemoresistance and radioresistance and promotes tumor growth. Mol Cancer Ther， 2010，9（2）：336～346.

11 Jaramillo MC， Zhang DD. The emerging role of the Nrf2-Keap1 signaling pathway in cancer. Genes Dev， 2013，27（20）：2179～2191.

Objective To examine the expression of Kelch-like ECH-associated protein 1 （Keap1） in benign prostate hyperplasia and prostate cancer，and explore the relationship between Keap1 expression and prostate cancer.Methods Specimens from 73 patients with prostate cancer managed in our hospital between January 2001 and October 2008 were included in this study. Immunohistochemical staining was used to detect the expression of Keap1 in benign prostate hyperplasia and prostate cancer. All the specimens were confi rmed by pathology for benign prostate hyperplasia or prostate cancer. Results The positive expression rate of Keap1 in benign prostate hyperplasia and prostate cancer were 82.2% and 21.9%，respectively. The positive expression rate of Keap1 in prostate cancer was signifi cantly lower than those in benign prostate hyperplasia （P＜0.05）. The Keap1 expression in prostate cancer has nothing to do with the age and T stage （P＞0.05），but with Gleason score，lymph node and distant metastasis （P＜0.05）. Furthermore，the lower expression of Keap1 Keap1 was associated with a poorer survival （P=0.011）.Conclusion Keap1 play an important role in the pathology and development of prostate cancer，and could be an important therapeutic target in the treatment of prostate cancer

benign prostate hyperplasia prostate cancer Keap1

浙江省温州市科技计划项目（S20090038）

325035 温州医科大学附属第二医院（张普 孔丽敏）325035 温州医科大学药学院（金雷钢 俞佳文 卢婷婷）