西吡氯铵含漱液对常见肠道细菌及部分ESBL+株的抗菌活性研究

王新红（广州医科大学附属口腔医院 广州口腔病研究所 口腔医学重点实验室，广东 广州 510140）

西吡氯铵含漱液对常见肠道细菌及部分ESBL+株的抗菌活性研究

王新红*
（广州医科大学附属口腔医院 广州口腔病研究所 口腔医学重点实验室，广东 广州 510140）

目的 检测0.1%西吡氯铵洗漱液对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、变形杆菌、粪肠球菌标准株及部分临床分离ESBL+株（超广谱β-内酰胺酶）的抗菌活性。方法 参考NCCLS标准，以微量肉汤稀释法进行检测。结果 西吡氯铵对上述各种细菌有较好抑制效果，绝大多数菌株为15.63 μg/mL。结论 0.1%西吡氯铵洗漱液能有效抑制常见肠道细菌及其耐药株的生长，具有较好的抗菌活性，可进一步拓宽其在临床消毒中的应用。

西吡氯铵；大肠埃希菌；肺炎克雷伯菌；变形杆菌；粪肠球菌；微量肉汤稀释法；抗菌活性

R78

B

1671-8194（2016）18-0013-02

西吡氯铵（cetylpyridinium chloride，CPC）是目前国内外常用的口腔消毒剂之一，主要成分为阳离子季铵化合物。国内外相关研究证实，该消毒剂对黏膜无明显刺激作用，可安全用于黏膜消毒［1］。该制剂主要用于口腔卫生保健［2］，属非处方药，常见剂型为含漱液，使用方便快捷。国内外相关抗菌研究主要针对口腔感染中常见细菌和真菌［3］，但对肠道杆菌及相关耐药菌（超广谱β-内酰胺酶，ESBL+）的抗菌研究较少。本文对临床常见肠道杆菌如大肠埃希菌（含标准株及ESBL+耐药株）、肺炎克雷伯菌（含标准株及ESBL+耐药株）、普通变形杆菌及粪肠球菌为实验材料进行了研究，观察西吡氯铵的抗菌作用，以期对该消毒剂进行深入开发，拓展其在临床中的应用范围。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 药品：0.1%CPC漱口液［杭州民生药业有限公司，批号：

141211，规格：0.1%/200 mL（瓶）］，硫酸庆大霉素注射液（欣辰药业股份有限公司，批号：1407096311，规格：2 mL∶8万单位×10支），0.9%氯化钠注射液（山东华信制药集团股份有限公司，批号：20140531S02，规格：500毫升/瓶）。

1.1.2 培养基：营养琼脂（北京奥博星生物公司，批号：20150107），水解酪蛋白（M H）肉汤（北京奥博星生物公司，批号：20140611），以上培养基按说明书配制，并按说明书规定条件121 ℃高压蒸汽灭菌15 min备用。

1.1.3 主要仪器设备：麦氏比浊管，参考资料自行配制；大龙移液器（2～20 μL、20～200 μL、50～300 μL 12道），96孔无菌细胞培养板及一次性无菌培养皿（直径90 mm），均购自北京博通生物试剂公司；中科美菱YC-300L冷藏柜，购自广州沪瑞明仪器有限公司；DNP-9300-BS-11电热恒温培养箱，购自上海和勤分析仪器有限公司；SpectraMax M5酶标仪，购自美国Molecular Devices公司。

1.1.4 实验细菌：实验所需菌株由广州医科大学附属羊城医院检验科提供。大肠埃希菌［含标准菌株CMCC（B）44102 1株及其ESBL+耐药株2株，ESBL-2株］、肺炎克雷伯菌［含标准菌株CMCC（B）46117 1株及ESBL+耐药株2株，ESBL-2株］、普通变形杆菌［标准菌株CMCC（B）49027 1株］及粪肠球菌［标准菌株CMCC（B）49027 1株］，总计12株。上述各菌株以营养琼脂培养基平板进行37 ℃24 h培养后，挑取菌苔，参照比浊管将各菌株以生理盐水配成1×106cfu/mL的菌液备用。

1.2 实验方法：根据美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）推荐的微量稀释法稍作改进［4］，用96孔板培养细菌，参考细菌生长现象判定最小抗菌浓度（MIC）。

原始待检药物等效浓度为1 mg/mL，经递倍稀释得到2、4、8、16、32、64、128、256倍稀释梯度。阳性对照、阴性对照、药物稀释梯度及操作方法见文献［5］。药液和对照加样完毕后，每孔加入1×106的对应菌液10 μL，每个药物做3次平行试验，37 ℃24 h培养，以酶标仪对培养板在600 nm波长下测定OD值，结合细菌生长情况判断实验结果。

2 结 果

2.1 阳性、阴性及空白对照：经37 ℃24 h培养后，硫酸庆大霉素阳性对照孔中无明显生长现象，阴性孔细菌对照中细菌生长良好，肉眼可见明显浑浊，以酶标仪检测，其吸光度与硫酸庆大霉素阳性对照孔明显不同。药物稀释梯度各孔及MH肉汤空白孔中培养液均澄清，无肉眼可见生长现象。

2.2 抗菌实验结果（含标准菌株）：大肠埃希菌标准菌株CMCC （B）44102及各临床分离株的MIC均为15.63 μg/mL；肺炎克雷伯菌CMCC（B）46117标准株及临床分离菌株的MIC多为31.25 μg/mL，仅1株为15.63 μg/mL；普通变形杆菌CMCC（B）49027的MIC为31.25 μg/mL，粪肠球菌CMCC（B）49027的MIC为15.63 μg/mL，见表1。

表1 抗菌实验结果

3 讨 论

表面活性剂是常用消毒剂中的重要一类，可通过降低表面张力，增强细胞的通透性，与生物膜上的蛋白质相互作用使之变性灭活，进而起到抑制并杀灭病原生物的作用。西吡氯铵亦属中性表面活性剂，其作用机制与上述相同，故此该消毒剂不易受常见细菌耐药性影响，有较为广泛的抗菌谱，对金黄色葡萄球菌、链球菌、具核梭菌、幽门螺杆菌、大肠埃希菌、伤寒沙门菌等常见临床感染细菌均有一定抗菌效果［6］，可抑制口腔感染中常见的真菌如白色假丝酵母、新生隐球菌等的生长，用于口腔真菌感染疗效较好［7］，有文献显示，该消毒剂对白色假丝酵母感染的治疗效果显著好于聚维酮碘［8］。该消毒剂不良反应尚不明确，除味觉障碍外，无其他不良反应的报道，对口腔正常菌群无明显影响［9］，在临床工作中得到了广泛应用，主要用于抗细菌及真菌感染，作为口腔疾病的辅助治疗药物，还可用于日常口腔护理及口腔清洁。

实验中各菌株均为临床常见肠道细菌，多属于正常菌群，少数可引起各种肠道感染及肠道外感染，如大肠埃希菌腹泻、出血性结肠炎及败血症等，肺炎克雷伯菌可致肺炎、败血症等，变形杆菌可致烧伤后感染、肺部感染，粪肠球菌能引起泌尿道感染，也能导致术后根管感染［10-14］。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和普通变形杆菌均属于肠道杆菌，在正常人体消化道中分布广泛，少数菌株具有一定的致病性。特别是由于近年来抗生素的大量应用，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌等逐渐产生了耐药性，可水解第三代甚至第四代头孢类抗生素，临床称之为超广谱β-内酰胺酶（Extended Spectrum β-Lactamases，ESBLs），严重影响临床治疗效果［15-21］。此外，粪肠球菌为革兰阳性细菌，多为肠道正常菌群成分，但亦有少数可致尿路感染、败血症、盆腔感染等，亦有相当一部分具备一定的耐药性。故此，选取上述菌株，研究西吡氯铵对其抗菌作用，具有较高的临床价值，可有效控制上述各菌及其ESBL+耐药株所致感染。

实验结果显示，0.1%西吡氯铵含漱液对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌标准株和临床株（含ESBL+/ESBL-）均有一定抑制效果，其中对大肠埃希菌的抗菌效果较为显著，全部菌株均为15.63 μg/mL；而对肺炎克雷伯菌标准株和临床株的抗菌效果稍弱，多数为31.25 μg/mL，仅1株为15.63 μg/mL。该结果说明0.1%西吡氯铵含漱液对上述两种细菌均有较好抗菌效果，且不受ESBL耐药性影响。该结果与西吡氯铵的表面活性抗菌机制相对应，说明出现ESBL耐药性后，菌株可产生超广谱β-内酰胺酶，但其细胞成分及结构并未出现较大变化，故此对西吡氯铵的敏感度亦无显著变化。综上所述，西吡氯铵对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、普通变形杆菌和粪肠球菌的标准株及部分耐药株均有较好抗菌效果。因此，该消毒剂不仅可广泛应用于口腔临床，亦可用于其他部位的消毒，充分扩展其临床适用范围。

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Cetylpyridnium Chloride Gargle on the Antibacterial Activity of Common Intestinal Bacteria and ESBL+Strains

WANG Xin-hong*
（Guangzhou Medical University Affiliated Oral Hospital， Guangzhou Institute of Oral Diseases， Key Laboratory of Oral Medicine， Guangzhou 510140 China）

［Abstracts］ Objective The in vitro antimicrobial activity of 0.1% cetylpyridinium chloride was determined against Escherichia coli， Klebsiellar pneumonia，Proteus vulgaris， Enterococcus faecalis and some clinical isolates. Methods Micro both dilution method. Results For most strains， The MICs of cetylpridinium chloride reach 15.63 μg/mL. Conclusion 0.1% of cetylpyridinium chloride has significant antibacterial effect on common Enteric bacillis，and this is helpful to expand its clinical application.

Cetylpyridinium chloride； Escherichia coli； Klebsiella pneumoniae； Proteus； Enterococcus faecalis； Broth microdilution method； Antibacterial activity

E-mail： xinhongwang325@163.com