化浊解毒活血通络法对血管性痴呆小鼠学习记忆能力的影响

赵见文，王志勇，闫国强，张颜伟，田军彪，宋书昌，解新苓



化浊解毒活血通络法对血管性痴呆小鼠学习记忆能力的影响

赵见文1，王志勇1，闫国强1，张颜伟1，田军彪2，宋书昌1，解新苓1

1.河北省沧州中西医结合医院(河北沧州 061001)；2.河北省中医院

摘要：目的观察化浊解毒活血通络法对血管性痴呆小鼠学习记忆能力的影响。方法将60只昆明小鼠随机分为模型组、阳性对照组、中药治疗组、假手术组，每组15只，前3组采用反复脑缺血再灌注法制备血管性痴呆模型。造模成功后假手术组、模型组灌服生理盐水，阳性对照组灌服脑复康液，中药治疗组给予化浊解毒活血通络中药灌服。治疗后对各组小鼠采用跳台试验进行行为学测试。结果与模型组相比，化浊解毒活血通络法能够提高血管性痴呆小鼠的行为学成绩。结论化浊解毒活血通络法可以改善血管性痴呆小鼠的学习记忆能力。

关键词：血管性痴呆；化浊解毒活血通络法；浊毒；浊瘀毒损；学习记忆能力

血管性痴呆(vascular dementia，VD)是指由脑血管病因素导致脑功能障碍而产生的获得性智能损害综合征，主要表现为记忆力、计算力、定向力等认知功能的减退以及情感行为的异常，是临床上常见的慢性进展性疾病之一[1]。现代医学对VD尚无确切有效的治疗药物或特异性方法。中医学以整体观与辨证论治为指导思想，在治疗VD方面具有自身的特色与优势[2]。化浊解毒活血通络法是在浊毒理论[3-4]指导下，结合祖国医学的血瘀学说，根据VD发病的病理基础所创立的中医治疗体系，本研究旨在通过观察化浊解毒活血通络方药对VD小鼠学习记忆能力的影响，了解该方法对VD的作用效果。

1材料与方法

1.1实验药物及仪器根据化浊解毒活血通络法拟定中药处方，其药物组成及剂量(成年人用量)如下：天竺黄10 g，九节菖蒲12 g，半夏9 g，郁金15 g，地龙6 g，川芎9 g，赤芍9 g，当归12 g，薏苡仁30 g，茯苓12 g，泽泻9 g，栀子6 g，防风6 g。方中各药材均购买于北京同仁堂股份有限公司。阳性对照组药物为脑复康(国药准字H37021040，山东方明药业集团股份有限公司生产，规格400 mg)。实验动物用药剂量相当于临床等效剂量3倍，按动物体表面积进行折算。实验仪器主要有电子天平(瑞士METTER AE100型)、小鼠跳台仪(中国医学科学院药物研究所制造)等。

1.2实验动物成年健康昆明小鼠60只，雌雄各半，体重38 g～40 g，SPF级，由河北医科大学实验动物中心提供，随机分为模型组、化浊解毒活血通络法治疗组(中药治疗组)、阳性对照组、假手术组，每组15只。

1.3构建VD动物模型根据文献采用脑组织反复缺血再灌注的方法制备小鼠VD动物模型[5]。小鼠术前隔夜禁食12 h，自由饮水。在室温24 ℃～25 ℃的无菌环境内行手术造模，手术动作轻柔，术中严格无菌操作。将小鼠腹腔注射10%水合氯醛(350 mg/kg)麻醉后，仰卧位固定于手术台，对其颈部皮肤进行剪毛备皮，然后使用碘伏酒精进行常规消毒。制备VD动物模型时，小鼠颈正中切口，分离双侧颈总动脉并套四号丝线扣，然后拉紧丝扣，阻断血流，同时在距尾尖约1 cm处断尾放血，放血约0.3 mL迅速热凝止血。颈总动脉血流被阻断10 min后，将丝扣松开，灌注10 min后，再次阻断血流10 min；第2次再灌注后观察10 min，如小鼠呼吸、心跳平稳，即可缝合皮肤，伤口处洒青霉素粉末，放回笼中正常饲养。假手术组只分离颈总动脉，套丝扣不阻断血流，尾部不放血，观察时间与其他各组相同。

1.4试验动物的给药方法实验小鼠均于术后第2天开始给药。假手术组、模型组给予生理盐水以20 mL/(kg·d)灌服。中药治疗组给予上述化浊解毒活血通络中药以29.00 g/(kg·d)灌服，阳性对照组给予脑复康以0.72 g/(kg·d)灌服，各组治疗均为每日1次，连续应用14 d。

1.5行为学检测方法连续用药14 d后采用跳台试验对各组小鼠进行行为学测试。跳台仪的箱壁由黑色塑料板围成，底板为可通过36 V交流电的多根铜栅，铜栅的一角放置橡胶圆台作为安全区，小鼠可停留在圆台上回避电击。实验前将小鼠放入箱中自由活动3 min熟悉环境，然后接通铜栅电源并持续5 min，观察并记录小鼠首次找到安全区所需要的时间(反应时间)和5 min内受到电击的总次数(错误次数)，作为学习测试成绩。24 h后将小鼠再次放入箱中自由活动3 min，然后将其放上橡胶圆台，接通铜栅电源并持续5 min，观察并记录小鼠首次跳下圆台的潜伏期和5 min内受电击的总次数(错误次数)，作为记忆测试成绩。

2结果

小鼠跳台试验结果如表所示，模型组小鼠较假手术组反应时间延长、潜伏期缩短、错误次数增多，差异有统计学意义(P<0.05)，提示模型组小鼠的学习记忆能力明显下降，该实验VD模型构建成功。与模型组比较，中药治疗组和阳性对照组的反应时间均明显缩短、潜伏期延长、错误次数减少，差异有统计学意义(P<0.05)，提示化浊解毒活血通络中药同脑复康一样均能改善VD小鼠的学习记忆能力，提高VD小鼠的行为学成绩。中药治疗组较阳性对照组反应时间缩短、潜伏期延长、错误次数减少，差异有统计学意义(P<0.05)，提示化浊解毒活血通络中药对VD小鼠行为学成绩的改善优于西药脑复康。

表1　各组小鼠14d后的跳台实验结果(±s)

3讨论

随着我国人口老龄化进程的加快，包括VD在内的认知障碍性疾病发病率日益增高。VD是老年期痴呆中最常见的类型，它是脑循环障碍缺血缺氧所导致的认知功能低下综合征。很长时间以来，现代药物治疗是VD治疗的主体，包括胆碱能类制剂、抗氧化剂、兴奋性氨基酸受体拮抗剂和脑代谢增强剂等。随着传统医学的发展和研究的深入，中医中药作为改善认知功能的治疗手段被逐渐应用于VD的治疗中。

VD隶属于祖国医学的“呆病”范畴，其“发于中风”“病变在脑”[6]，与肝脾肾等脏密切相关。王永炎院士就呆病进行了系统研究，并提出了“毒损脑络、脑髓”学说[7]。VD病人多为年迈之人，其诸脏渐虚，气机失布，水津不化，酿生痰湿，或兼中风，脑络受损，髓海渐衰，元阳不足，痰湿不散，日久蕴藉，则成浊毒。浊毒一旦化生，便难以自除，必将结滞络脉，扰于血循，凝塞为瘀。浊凝清窍，瘀损脑络，则元神失养，神明不用，灵机记性渐失，发为该病。因此“浊瘀毒损”是VD发生发展的主要病理机制。在“浊毒致病理论”[8-9]与“血瘀学说”基础上，根据VD的“浊瘀毒损”病理机制制定了针对VD发病的“化浊解毒活血通络”治法。本研究中选用临床常用的化浊解毒活血通络中药拟定为协定处方，对VD小鼠进行干预，并通过跳台实验评估其行为学成绩。通过比较得知，化浊解毒活血通络法能够有效地改善VD小鼠的认知功能，提高其学习能力和记忆能力。

化浊解毒活血通络法对VD小鼠行为学成绩的改善提示该方法对VD小鼠受损神经元可能具有一定保护作用。化浊解毒活血通络法对VD小鼠发挥神经保护作用的机制可能是多元性的，还需要大量的实验研究进一步探索。在动物实验研究的基础上，借鉴现代医学知识进一步开展该中医治法的多中心随机对照临床研究，以便使VD的中医药预防和治疗取得突破性进展。

参考文献：

[1]Lewis PR.MERRTT’S 神经病学[M].高旭光，译.沈阳：辽宁科学技术出版社，2002：6.

[2]郝晓晓，陈烔华.中医治疗血管性痴呆的研究现状及进展[J].四川中医，2013，31(3)；150-153.

[3]高颖，谢颖桢.试论浊毒在血管性痴呆发病中的作用[J].中国中医急症，2000，12(9)：6.

[4]唐启盛．“浊毒痹阻脑络”对老年期痴呆的影响[J]．北京中医药大学学报，1997，20(6)：24-25.

[5]吕佩源，尹昱，王伟斌，等．二氢麦角环肽对血管性痴呆小鼠海马钙信号转导机制的干预作用[J].中华老年医学杂志，2004，23(3)：192-195.

[6]张志真，刘慧林.血管性痴呆发病机制及辨证论治的再认识与思考[J].北京中医，1999，18(5)：9-12.

[7]王永炎，张伯礼．血管性痴呆现代中医临床与研究[M].北京：人民卫生出版社，2003：49.

[8]王正品，李佃贵，杜艳茹，等.浊毒致病论与现代中医病因学[J].中医杂志，2010，51(1)：11-13.

[9]许筱颖，郭霞珍.浊毒致病理论初探[J].辽宁中医杂志，2007，34(1)：28-29.

(本文编辑薛妮)

基金项目：河北省沧州市科技计划项目(No.131302143)；河北省中医药管理局科研计划课题(No.2014356)

通讯作者：赵见文，E-mail：zhaojianwen6@163.com

中图分类号：R742.5R285.5

文献标识码：A

doi：10．3969/j．issn．1672-1349．2016．12．008

文章编号：1672-1349(2016)12-1335-03

(收稿日期：2015-09-29)

Effects of Huazhuo Jiedu Huoxue Tongluo Management on Learning and Memory Capability in Mice with Vascular Dementia

Zhao Jianwen，Wang Zhiyong，Yan Guoqiang，Zhang Yanwei，Tian Junbiao，Song Shuchang，Xie Xinling

Cangzhou Hospital of Integrated Traditional and Western Medicine，Cangzhou 061001，Hebei，China

Abstract：ObjectiveTo observe the effects of Huazhuo Jiedu Huoxue Tongluo method on learning and memory capability in mice with vascular dementia.MethodsSixty Kunming mice were randomly divided into model group，positive control group，traditional Chinese medicine(TCM) group and sham operation group.Each group had 15 mice.Models of vascular dementia in the first three groups were established through repeated cerebral ischemia-reperfusion.Physiological saline was given to the mice in the sham operation group and model group.Naofukang solution was given to the mice in the positive control group.Mice in TCM group were given Huazhuo Jiedu Huoxue Tongluo decoction after models were successfully established.To do behavioral testing by jumping test after treating.ResultsCompared with the model group，the learning and memory were improved in TCM group.ConclusionHuazhuo Jiedu Huoxue Tongluo method has protective effect on learning and memory capability in mice with vascular dementia.

Key words：Huazhuo Jiedu Huoxue Tongluo method；vascular dementia；learning and memory capability