正交法优化甘草酸单铵盐β-环糊精包合工艺研究

刘　文， 王　莹， 施　洋， 郝宇薇， 刘婧怡， 兰　卫

(1库尔勒市新城街道社区卫生服务中心， 新疆　库尔勒　841000； 2新疆医科大学附属中医医院， 乌鲁木齐　830002 ；3新疆医科大学学报编辑部; 4新疆医科大学中医学院， 乌鲁木齐　830011)



·药学研究·

正交法优化甘草酸单铵盐β-环糊精包合工艺研究

刘文1， 王莹2， 施洋3， 郝宇薇4， 刘婧怡4， 兰卫4

(1库尔勒市新城街道社区卫生服务中心， 新疆库尔勒841000；2新疆医科大学附属中医医院， 乌鲁木齐830002 ；3新疆医科大学学报编辑部;4新疆医科大学中医学院， 乌鲁木齐830011)

摘要：目的优化甘草酸单铵盐的β-环糊精包合工艺。方法采用正交实验对甘草酸单铵盐-β-环糊精包合的主要参数进行筛选，以包合物的包合率和收得率为指标，选定最佳工艺。结果饱和水溶液法制备甘草酸单铵盐β-环糊精包合物的最佳工艺为：甘草酸单铵盐与β-环糊精的投料比为1∶6，包合温度为60℃，搅拌时间为1 h，搅拌速度为400 r/min。结论饱和水溶液法制备甘草酸单铵盐-β-环糊精，方法简便、操作简单。

关键词：甘草酸单铵盐； β-环糊精； 包合工艺

甘草酸单铵盐是植物中含有的一类生物活性较强的化学成分，研究发现甘草酸单铵盐可以通过抑制禽流感病毒对组织细胞的吸附及调节机体细胞免疫而达到抗禽流感病毒的作用[1]。甘草酸单铵盐对微波辐射造成的机体功能失衡有一定的保护作用，其机制可能与清除自由基、提高机体抗氧化能力有关[2]。甘草酸单铵盐还对大鼠子宫角粘连具有明显的预防作用[3]。β-环糊精中药包合物可以提高原药物的稳定性,掩盖药物的异味和臭味[4]。本研究通过优化甘草酸单铵盐-β-环糊精包合物的制备工艺，为进一步研究甘草酸单铵盐的应用提供理论依据。

1仪器与试药

甘草酸单铵盐(Monoammonium Glycyrrhizinate)[西安富捷药业有限公司，批号：20101105，本品按干燥品计算，含甘草酸(C42H62O16)不得少于95.0%]，β-环糊精(天津市光复精细化工研究所，批号：20030305)，离心机(型号：80-2型，金坛市金分仪器责任有限公司)，红外快速干燥箱(型号：WS70-1，巩义市英峪子华仪器厂)，紫外分析摄影仪(型号：YOKO-SY，武汉药科新技术开发有限公司)。

2方法与结果

2.1对照溶液的制备[5]精密称取甘草酸单铵盐0.100 0 g用无水乙醇定容至100 mL，再吸取2.5 mL至25 mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度,配制成0.1 mg/mL的对照溶液，备用。

2.2甘草酸单铵盐-β-环糊精包合物的制备[6-7]称取适量β-环糊精加入水制成饱和水溶液，置于磁力搅拌器上加热，逐滴加入甘草酸单铵盐对照液搅拌，在冰箱中冷藏，抽滤，分别用无水乙醇和蒸馏水冲洗，放入恒温干燥箱中干燥，备用。

2.3标准曲线的制备分别精密吸取上述甘草酸单铵盐对照液1.0、1.5、2.0、3.0、3.5、4.5 mL定容至10.0 mL，在249 nm处测定吸光度(A)。以浓度(C)横坐标，以吸光度值(A)为纵坐标，得回归方程为Y=6.845 1X+0.172 8, r=0.999 8,线性范围为0.010～0.045 mg/mL。

2.4重现性试验平行制备3批甘草酸单铵盐-β-环糊精包合物，采用相同方法处理，计算其包合率,重复性试验RSD为1.79% 。

2.5甘草酸单铵盐包合物的包合率和收得率测定包合率(EF%)=包合物中实际含甘草酸单铵盐量(g)/投入甘草酸单铵盐的量(g)×100%,收得率(%)=包合物的重量(g)/β-环糊精投入量(g)+甘草酸单铵盐投入量(g)×100%。

2.6方法筛选结果取饱和水溶液法、超声法、研磨法样品各0.100 0 g，依“2.5”项下方法测定包合率，包合率分别为78.37%、63.21%和74.55%，饱和水溶液法包合率最高，故确定选择饱和水溶液法。

2.7包合工艺优化

2.7.1正交试验[8-9]选择L9(34)正交设计，分别选择甘草酸单铵盐:β-环糊精用料比、包合温度、搅拌时间、搅拌速度4个因素，以综合评分为考察指标进行正交实验，见表1。由表2、表3可知B因素有显著影响，即包合温度对甘草酸单铵盐-β-环糊精包合物包合率有较大的影响，影响甘草酸单铵盐-β-环糊精包合物包合率因素大小依次为 B>A>C>D，最优工艺条件为B1A3C1D3，因A 、C 、D 3个因素无显著差异，最优工艺条件确定为为A1B1C1D1，见表4、表5。

表1　因素水平表

表2　包合率正交试验表

表3　包合率方差分析表

2.7.2正交试验结果B因素有显著影响，A、C、D 3个因素无显著影响，影响包合率因素大小依次为 B>A>C>D。A、B、C、D 4个因素均无显著影响，影响收得率因素大小依次为B>A>D>C。 包合率和收得率的最优工艺条件为同一条件，综合各因素的影响水平的显著性和非显著性，从经济、简便上考虑，确定最优工艺条件为A1B1C1D1，即:β-环糊精∶甘草酸单铵盐比为6∶1，温度为60℃，搅拌时间为1 h，搅拌速度为400 r/min。

表4　收得率正交实验表

表5　收得率方差分析表

2.7.3最优制备工艺验证制备3批样品，计算其包合率分别为63.25%、63.61%、62.92%，平均值为63.26%，RSD%=0.55%。制备3批样品，计算其收得率分别为82.42%、82.15%、81.94%，平均收得率为82.17%，RSD%=0.29%。

3讨论

β-环糊精包合技术可增加药物的溶解度和溶解速度，提高生物利用度，提高药物稳定性，降低毒副作用等优点[10]。甘草酸单铵盐(monoammonium glycyrrhizinate，MAG)具有多种生物活性，但MAG在体内易与血浆蛋白结合，采用β-环糊精包合技术可提高药物生物利用度[11]。包合物常用的制备方法有饱和水溶液法、超声波法和胶体磨法,经预试验饱和水溶液法较适宜。由单因素试验可知饱和水溶液法包合率最高，故确定本实验选择饱和水溶液法。本实验所制备的甘草酸单铵盐包合物为纯白色，颗粒均匀。本研究运用正交试验法,采用L9(34)正交表进行甘草酸单铵盐包合试验,确定了甘草酸单铵盐的β-环糊精包合物的最佳工艺。采用饱和水溶液法制备甘草酸单铵盐-β-环糊精，方法简便、操作简单，对甘草酸单铵盐的开发利用具有重要的指导意义。

参考文献：

[1]陈建新,邱灵才,方炳虎,等.甘草酸单铵盐对H9N2禽流感病毒的作用机制研究[J].中草药，2008,39(6):896-899.

[2]王亚男,郑冰清,曲新艳,等.甘草酸单铵盐对微波辐射大鼠血液损伤防护作用的实验研究[J].世界中西医结合杂志，2013，8(5)：445-447.

[3]王莉,于俊荣,高章圈，等.不同剂量甘草酸单铵盐对大鼠子宫角粘连预防作用的实验研究[J].中国计划生育学杂志，2004，2(5)：280-281.

[4]赵海霞,陈浩,田景振.环糊精包合技术[J].山东中医杂志,2000,19(4):241-243.

[5]孙芸,燕雪花,葛亮,等.甘草黄酮β-环糊精包合工艺优化[J].中国实验方剂学杂志,2011，17(4)：30-32.

[6]贺国芳,祁晓红,林芳,等.正交实验法优选克拉霉素环糊精包合工艺[J].医药导报，2005，24(10)：927-929.

[7]徐睿来,欧阳红,邓洪亮.紫草素β-环糊精包合工艺的优选[J].江西医学院学报，2004，44(6):81-82.

[8]高燕,赵渤年,丁晓彦.多指标正交实验法研制九味羌活挥发油-β-环糊精包合物[J].时珍国医国药,2007,18(8):1901-1902.

[9]丁立芬.数理统计方法[M].上海:科学技术出版社,1985:160.

[10]叶素芳.环糊精和环糊精包合物[J].化工时刊,2002,16(8):1-8.

[11]Ishida S,Sakiya Y,Ichikawa T,et al. Binding of glycyrrhizin to human serum and human serum albumin [J]. Chem Pharm Bull,1989,37(1):226-228.

(本文编辑施洋)

基金项目：国家自然科学基金(81060350)

作者简介：刘文(1970-)，女，本科，主管药师，研究方向：药学研究，E-mail：1178816808@qq.com。 通信作者：兰卫，男，在读博士，教授，硕士生导师，研究方向：中药民族药研究, E-mail ：lanwei516@sina.com.。

中图分类号：R943

文献标识码：A

文章编号：1009-5551(2016)08-1009-03

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2016.08.018

[收稿日期：2016-03-08]

Research on optimization inclusion technology of licoflavone β-cyclodextrin with orthogonal method

LIU Wen1， WANG Ying2， SHI Yang3， HAO Yuwei4， LIU Jingyi4， LAN Wei4

(1CenterofCommunityHealthService,NewTownStreetKorla，KorlaXinjiang841000,China；2TheAffiliatedofChineseMedicineHospitalXinjiangMedicalUniversity,Urumqi830002,China；3DepartmentofEditorial,JournalofXinjiangMedicalUniversity；4CollegeofTCM,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

Abstract:ObjectiveThe optimized licorice licoflavone β-cyclodextrin inclusion process. MethodsThe main parameters for the licorice flavanone-β-cyclodextrin inclusion were screened by the orthogonal experiment. The best technical process were chosen according to, the inclusion rate and the yield rate. ResultsThe best licoflavone-β-cyclodextrin inclusion condition was that the licoflavone with β-cyclodextrin′s batch feeding ratio was 1∶6 and the package gathers the temperature was 40℃, stirring as the speed of 400 r/min for 1 hour. ConclusionThe saturated peroxide solution law preparation licoflavone-Beta-β-cyclodextrin the method is simple, simplicity of operator.

Keywords:licoflavone;；β-cyclodextrin； inclusion technology