高效液相色谱法测定泡菜中姜黄素

2016-07-20周至均王丽兰眉山市产品质量监督检验所

食品安全导刊 2016年15期

□ 周至均王丽兰眉山市产品质量监督检验所

高效液相色谱法测定泡菜中姜黄素

□ 周至均王丽兰眉山市产品质量监督检验所

摘要：本实验建立了二极管阵列检测器测定泡菜中姜黄素的高效液相色谱法。实验中采用XDB-C8柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）分离，以4%乙酸-甲醇为流动相，梯度洗脱，柱温35℃，检测波长为430 nm，整个分离过程在12 min内完成。该方法加标回收率范围：93.0%～98.0%，方法检出限：1 mg/kg。

关键词：高效液相色谱法；泡菜；姜黄素

姜黄素作为食品着色剂的一种天然色素，是被我国批准使用的食品添加剂。随着我国泡菜产业的发展壮大，姜黄素被添加到泡菜产品中以增强感官品质，但在《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》（GB 2 760-2014）中明确规定了酱腌菜中姜黄素最大限量为0.01 g/kg，。我国目前尚未制定食品中姜黄素的检测方法标准，为了泡菜产业更好地健康发展，因此建立一种快速、简便、高灵敏度的检测方法非常重要，本文采用液相色谱法测定泡菜中的姜黄素。

1 试验材料与方法

1.1 仪器与试剂

Agilent 1200液相色谱仪（美国安捷伦公司）、天平、超声波清洗仪、离心机、真空抽滤器、漩涡混合器。

甲醇：色谱纯

无水乙醇：分析纯

4%乙酸：量取40 mL乙酸于1000 mL容量瓶中，用纯水定容至刻度。

姜黄素标准储备液：准确称取0.100 0 g姜黄素（＞99%），用甲醇溶解并定容至100 m L容量瓶中，姜黄素含量为1 mg/mL；再吸取5.0 mL标准储备液于50 m L容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成姜黄素含量为100 μg/mL中间液；最后用甲醇梯度稀释成0.5、1 .0、5.0、1 0.0、20.0、30.0 μg/mL的标准溶液。

1.2 色谱条件

色谱柱：XDB-C8（4.6 mm×150 mm，5 μm，Agilent）；梯度洗脱，流速：1 mL/min；柱温：35℃；进样量：20 μL；检测器：二极管阵列检测器（DAD），检测波长430 nm。

2 样品处理

称取5 g粉碎后的泡菜样品（精确至0.01 g）于25 mL比色管中，用无水乙醇定容至刻度，漩涡混合1 min，放入超声波清洗器超声提取15 min，取出放入离心机中离心10 min（转速不低于4000 r/min），取上清液过水系微孔滤膜（0.45 μm）过滤后，供HPLC测定。

3 结果与分析

3.1 流动相和提取试剂的选择

姜黄素易溶解于甲醇、乙醇、乙酸等试剂中，故采用4%乙酸水溶液和甲醇作为流动相。因泡菜样品基质比较复杂，故采用梯度洗脱（见表1），以排除其他杂质干扰，得到更好的分离效果。本实验采用无水乙醇提取与用甲醇提取进行对比，结果发现提取效果无明显差异，都能得到较好回收率。而用乙醇提取，既可降低试验成本，又能避免使用甲醇对身体造成毒害。

表1 流动相及梯度表

3.2 色谱图

在1.2色谱条件下，得到姜黄素标准色谱图（如图1所示），走样时间12 min，标准品保留时间6.1 min左右。

图1 姜黄素LC标准色谱图

3.3 检测波长的选择

如图2所示，在190～600 nm波长范围内对姜黄素标准溶液进行扫描，结果显示最大吸收波长为430 nm处，且在430 nm处干扰较小，因此选择波长为430 nm进行检测。

图2 姜黄素光谱图

3.4 线性范围和检出限

在选定的色谱条件下，进样20 μL，以姜黄素质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果见表2与图3，回归方程为y= 1 15.24x + 11.508，相关系数R2=9999，说明在0.5～30 μg/mL范围内存在良好线性关系，根据信号与噪声比值等于10时作为定量检出限，得出本方法检出限为：1.0 mg/kg。

3.5 回收率与精密度

选择泡菜样品，添加3种浓度标准品，分别按照以上样品处理方法提取，测定姜黄素的质量浓度、加标回收、相对标准偏差见表3。