产后抑郁与Foxp3基因位点924(rs2232365)多态性的相关性探讨

林宇明　陈盛强　王焕霞

1　广州市越秀区光塔街社区卫生服务中心(广州 510120)2　广州医科大学附属第二医院(广州 510260)



·论著·

产后抑郁与Foxp3基因位点924(rs2232365)多态性的相关性探讨

林宇明1陈盛强2王焕霞1

1广州市越秀区光塔街社区卫生服务中心(广州 510120)2广州医科大学附属第二医院(广州 510260)

【摘要】目的探讨Foxp3-924(rs2232365)基因位点多态性与产后抑郁的相关性。方法选取211例在越秀区光塔街社区卫生服务中心分娩的产妇进行回访研究，所有产妇均经PCR-SSP技术对Foxp3-924(rs2232365)基因位点分型。结果对比产后抑郁组与对照组产妇Foxp3-924各种基因型频率，结果显示均无差异(P>0.05)。结论产后抑郁和Foxp3-924(rs2232365)位点基因多态性无较大关联。

【关键词】产后抑郁基因位点多态性

产后抑郁为精神科疾病的一种，该病在临床上较为常见。分娩时适龄女性正常的生理状态，但由于部分女性缺乏对分娩知识的了解，加之对疼痛的恐惧，对分娩后生活的担忧，或者受重男轻女思想的影响等极易出现较为消极、悲观的心理情绪。此外，分娩后，产妇还极易因受性激素、心理、社会角色等变化等的影响而产生一些负面的情绪、心理改变，进而可产生产后抑郁情况。产后6周内发生的产后抑郁情况在临床属于较为典型的现象，该现象通常会贯穿产褥期，严重者可能会贯穿于幼儿上学前[1]。据统计，产后抑郁的发病率较高，其约占全部产妇的15%～30%左右。有研究显示抑郁症患者多伴有中枢及外周5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)水平下降现象。而抑郁症和免疫系统间则具有较为紧密的关联，抑郁症通常可导致多种躯体机体的免疫改变；而免疫炎症反应则可在一定程度上诱发抑郁症发生。随着医学研究的不断深入及医学技术的改善，临床上逐渐开始加强对调节性T细胞研究的重视。调节性T细胞属于T细胞亚群中的一个，可有效的抑制免疫反应。Foxp3为CD4+CD25+Tr的特异性标志物，是CD4+CD25+Tr细胞发育和功能维持的主要调节基因。研究表明抑郁症患者外周血CD4+CD25+Foxp3+T水平明显较低，这就表明产后抑郁的发病中有Foxp3参与。有研究显示，人体免疫疾病和人类Foxp3基因中13个突变点均有关联，现在临床上在产后抑郁和Foxp3基因-924基因位点多态性关系方面的研究仍不多，本研究为了解Foxp3-924基因位点多态性与产后抑郁的相关性而进行了如下研究。

1材料与方法

1.1研究对象一般资料本组211例产妇均为随机选取2013年6月—2014年9月在广东省越秀区诗书街社区医疗中心的产后回访的产妇作为研究对象。产妇的年龄为24～42岁，平均年龄为29.4岁。研究对象均为广东本土汉族人，足月产妇。既往无精神障碍史，无原发性高血压等心血管疾病、肝肾疾病、糖尿病等病史。对209例产妇分别进行爱丁堡产后抑郁症评估量表(Edinburgh postnatal depression scale，EPDS)调查问卷。并根据EPDS诊断标准，以大于或等于10分提示病人存在不同程度的抑郁症状，则视为筛查阳性。总分越高，反应抑郁程度越高[5]。排除伴有糖尿病、高血压等基础疾病的患者，排除有心脏病史的患者；在清晨患者空腹时取静脉血3 mL，并将抽取的静脉血保存于无菌真空管内，管内应事先注入乙二胺四乙酸抗凝剂，离心分离后置于4℃环境中。

1.2材料Foxp3-924(rs2232365)基因位点PCR引物序列如下：上游引物P1 5′-CTGGCT CTCTCCCCAACTGA-3′，P2 5′- CTGGCTCTCTCCCCAACTGC -3′；下游引物R 5′-ACA G AGCCCATCATCAGACTCT CTA-3′，引物由上海生工公司合成。Taq DNA聚合酶和dNTP由北京鼎国生物技术公司提供。Foxp3抗体购自BioLegend公司，SP免疫组化染色试剂盒购自福州迈新生物技术公司。

1.3制备标本基因组DNA采用苯酚—氯仿法抽提。

1.4以PCR-SSP法为依据对Foxp3-924基因位点多态性进行检测，依次将模板DNA 3.0 μl，Primer 1 1.0 μl，Primer 2 1.0 μl，dNTP 3.0 μl，10×PCR Buffer 3.0 μl，Taq DNA Polymerase 1.0 μl等加入至0.5mL离心管内，然后加入适量水，使总体积达到30.0μl。PCR条件：在94℃条件下进行为期3min预变性，然后再相同温度下进行1 min变性，将温度降低至60℃，并进行退火1 min，72℃延伸1 min，循环31次；72℃ 延伸5min。PCR扩增后用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测是否有特异性的扩增产物。

2结果

2.1Hardy-Weinberg遗传平衡检验采用Hardy-Weinberg定律吻合度检进行检测，两组研究对象人群混杂因素影响比较无差异(P>0.05) 。

2.2Foxp3-924位点基因多态性与产后抑郁易感性关系PCR扩增借助Foxp3-924位点G等位基因特异性引物进行，可见片段大小为442bP，可得GG基因型纯合子；若以Foxp3-924位点A等位基因特异性引物实施扩增处理则可见片段为427bp,可得AA基因型纯合子，其结果均符合和目的片段大小。A、G两对引物分别扩增时，可同时出现阳性条带的基因型为AG杂合子，结果见图1。对各基因型进行序列测定，可见GG、AA和 AG三种基因型与PCR结果相符见图2。对Foxp3-924位点的基因型及等位基因频率分析子痫前期组研究对象各基因型和等位基因与正常组比较无统计学意义，具体见表1产后抑郁和正常组Foxp3-924位点基因型及等位基因频率。

图1Foxp3-924位点基因型PCR-ARMS分析电泳图

注：A：M：DNA marker；1，2，4～12，14～18，22：G等位基因阳性；3，13，19～21，23：G等位基因阴性。B：M：DNA marker；4，7～8，12～14，16～18，20～22：A等位基因阳性；1～3，5～6，9～11，15，19，23：A等位基因阴性。

图2Foxp3-924位点各基因型测序图 A：Foxp3-924AA基因型序列；B：Foxp3-924GG基因型序列；C：Foxp3-924AG基因型序列。

表1　Foxp3-924位点多态性基因型及等位基因在人群中分布频率

产后抑郁病人Foxp3-924位点G等位基因频率与正常组比较无较大差异(P>0.05)。AA、GA、GG三种基因型频率在产后抑郁患者中分别占39.1%、39.1%、21.7%；在健康对照中分别占36.4%、45.0%、18.6%。GA 和GG基因型在产后抑郁患者中的频率与正常对照组相比没有差异(χ2=0.70,P>0.05 )，见表1。

3讨论

目前对抑郁发病机制的研究证实，抑郁症并不是由单一的神经递质失衡引起，而是受多因素影响的。早有研究证实炎症反应在抑郁症的发生发展中起到重要作用，抑郁症患者体内炎症前细胞因子、急性期反应蛋白、化学增活素及细胞粘附分子等水平明显升高。炎症前细胞因子可对抑郁症的特征性改变造成较大的影响，比如神经内分泌的改变、突出可塑性改变等。近几年，许多临床和动物实验研究表明:①大部分抑郁症患者均伴有免疫系统激活现象；②对于接受细胞因子治疗的非抑郁症患者则多伴有抑郁行为；③部分伴有免疫性疾病的病人出现抑郁症状的几率更大。④HPA轴可被部分细胞因子激活，可促使中枢肾上腺系统功能亢进，且可能会促使血清素系统活化，导致抑郁症相关血液生化改变现象发生[2]。由此可见，免疫调节的失衡对产后抑郁的发病有着不可忽视作用。邱文静等[3]和李艺等[6]研究结果表明抑郁症外周血中的CD4+CD25+Treg细胞明显减少，CD4+CD25+Treg上的糖皮质激素表达减少；冀德才等[4]发现抑郁症自杀未遂患者存在的免疫抑制与CD4+CD25+Treg调节性T细胞及IL-2、IL-6水平相关；洪敏等[5]研究发现针药结合治疗改善小鼠抑郁症行为表现可能通过调节Treg细胞的功能发挥作用。以上结果提示调节性T细胞在抑郁症的发生发展中起到重要作用。Foxp3是叉状头转录因子的一种，该因子具有促进Treg细胞分化发育的功效，并且有利于促进Treg细胞功能稳定。研究显示 Foxp3可在CD4+CD25+Treg细胞中特异性表达，一旦有异常现象发生往往会对CD4+CD25+Treg细胞功能、数量等造成影响。研究表明Foxp3表达减少可引起多种疾病，合理的诱导Foxp3表达可起到防治1型糖尿病的作用[2]；另外，有专业学者研究结果显示抑郁症患者FOXp3 mRNA水平表达明显低于正常人。有研究显示，Foxp3还具有调高人体免疫力，且可维持内环境稳定，若Foxp3表达异常则会在很大程度上增加疾病的发生率，目前尚未明确导致其表达异常的原因，且临床上对于Foxp3表达异常与抑郁症间的相关性仍未明确，故而仍需进行更加深入的研究。我们推测作为抑郁症的一种的产后抑郁的发生与FOXp3基因的突变有关。而国内外对于产后抑郁与FOXp3基因基因多态性的相关性的研究尚属空白。通过查阅文献，我们选择FOXp3基因SNP-924(A/G, rs2232365)单核苷酸多态性位点来研究其与产后抑郁的相关性。

在本研究中我们使用PCR-SSP法,对所选择全部样本进FOXp3基因SNP-924A/G位点基因多态性与中国广东地区产后抑郁相关性分析。结果发现，FOXp3基因SNP-924A/G单核苷酸基因多态性与中国广东地区产后抑郁发病之间无显著相关性，但其样本基因型符合Hardy-Weinberg遗传平衡，样本具有群体代表性。出现无相关性的结果的可能原因有：①FOXp3基因的SNP-924不是广东地区产后抑郁候选SNP位点；②本研究样本量不多，判断FOXp3基因是否为广东地区产后抑郁的易感基因,还必须加大样本量，对该基因的多个多态性位点进行检测。③抑郁症与产后抑郁二者具有疾病异质性，心理因素、社会因素等对于产后抑郁的发生具有更大的作用。此外，疾病表型的多样化也是导致研究结果产生差异的重要因素，因此，我们在研究时，也应关注基因多态性与疾病临床表型多样性的内在联系，更深入结合临床，以做到更好地实现研究的临床应用价值。同时，我们需要加大样本量、扩大样本收集范围，以使研究结果更具有群体代表性，更好地服务临床。我们在下一步的研究中可以对研究对象进行CD4+CD25+Treg数量及FOXp3表达的检测，对相关激素水平进行监测和激素受体基因多态性等方面展开研究，以期把产后抑郁的发病机制研究透彻。本研究结果显示子痫前期易感性与Foxp3单倍体的关联较大。其与Park等、Andre GM等[13]和Hassannia H等[7-17]等的研究结果相符。这些研究结果提示我们对于疾病发病因素的影响应重视对基因突变研究的重视，同时应着重分析单基因，了解Foxp3-924基因型与Foxp3其他位点的相关性。本研究为明确产后抑郁间和Foxp3-924单核苷酸多态性间的关联。临床上仍难以排除产后抑郁易感性和Foxp3-924的相关性，仍需进行进一步研究。

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Discussion of the correlation between postpartum depression and Foxp3 Locus 924(rs2232365) polymorphism

LinYuming,WangHuanxia.GuangtaStreetCentralCommunityHealthServiceofYuexiuRegion，Guangzhou510120，China

ChenShengqiang.TheSecondAffiliatedHospitalofGuangzhouMedicalUniversity，Guangzhou510260,China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the distribution of-924(rs2232365) genotypes and to explore the correlation between gene loci polymorphism and postpartum depression.MethodsIn puerpera in Yuexiu district Guangta street community health center, there were 211 cases of childbirth study visits, who were confirmed by PCR-SSP technique Foxp3-924 (rs2232365) gene locus genotyping.ResultsCompared postpartum depression group and control group Foxp3-924 various genotypes, it showed no great difference (P> 0.05).ConclusionIt has no greater relevance between postpartum depression and Foxp3-924 (rs2232365) polymorphism loci.

【Key words】Postpartum depression; Gene locus; Polymorphism

基金项目:广东省人口和计划生育委员会科研项目(20132054)

通信作者：林宇明，E-mail: gzlinyuming123@163.com

DOI：10.3969/j.issn.1000-8535.2016.02.001

(收稿日期：2015- 09-24)