CK7、Ki-67在肺癌中的表达及联合诊断价值

张慧峰秦秉玉余海波



CK7、Ki-67在肺癌中的表达及联合诊断价值

张慧峰1秦秉玉1余海波2

【摘要】目的 探讨细胞角蛋白7（cytokeratin 7，CK7）和核抗原ki-67 在肺癌中的定位表达与临床病理特征和预后的关系。方法 收集临床手术切除的肺癌组织蜡块62例，应用免疫组化检测组织中CK7 和Ki-67 的表达，结合临床病理资料和随访资料进行回顾性研究。结果CK7 和Ki-67的表达在年龄和性别的差异无统计学意义（P＞0．05）。Ki-67 在不同病理类型的肿瘤组织中表达差异无统计学意义（P＞0．05） ，但CK7在不同病理类型肿瘤组织中的表达差异有统计学意义（P＜0．01）。在高分化肺癌患者中CK7 和Ki-67 表达阳性率低于低分化肺癌患者，差异有统计学意义（P＜0．01）。CK7和Ki-67在有淋巴结转移的肺癌患者中的表达阳性率高于无淋巴结转移组，差异有统计学意义（P ＜0．01）。CK7 表达水平在病理分期较早组别（Ⅰ+Ⅱ）肺癌低于分期较晚组别（ Ⅲ + Ⅳ） ，差异有统计学意义（P＜0．01） ，但Ki-67的表达在两组中差异没有统计学意义（P=0．18）。CK7 表达与Ki-67 表达无相关性（P=0．49）。结论 CK7及Ki-67 高表达与肺癌的发生、发展及转移关系密切，对判断肺癌恶性程度及预后有重要参考价值。

【关键词】肺癌；细胞角蛋白7；核抗原ki-67；免疫组化

Objective To investigate the relationship between the expression of CK7 and Ki-67 in lung cancer and its relationship with clinical pathological features and prognosis． Methods 62 cases of lung cancer tissues were collected from clinical surgery and the expression of Ki-67 and CK7 were detected by immunohistochemistry． The clinical data and follow-up data were retrospectively analyzed． Results The positive rate of CK7 and Ki-67 in different age groups There was no statistically significant difference（P＞0．05）． There was no significant difference in the expression of Ki-67 in tumor tissues with different pathological types （P＞0．05），but there was significant difference in the expression of CK7 in tumor tissues with different pathological types（P ＜0．01）． The positive rate of Ki-67 and CK7 in patients with high differentiation was significantly lower than that in patients with low differentiation，the difference was statistically significant （P＜0．01）． The expression level of CK7 and Ki-67 in lymph node metastasis group was significantly higher than that in non lymph node metastasis group，the difference was statistically significant （P＜0．01）． CK7 expression level in lung cancer pathological staging （I + II） was significantly lower than that in late stage （III + IV），the difference was statistically significant （P＜0．01），but the expression of Ki-67 in the two groups was not statistically significant （P=0．18）． There was no correlation between CK7 expression and Ki-67 expression （P=0．49）．Conclusion CK7 and Ki-67 are important factors affecting the prognosis of patients． The abnormal expression of the two is closely related to the occurrence，development and metastasis of lung cancer． It is important to judge the malignant degree and prognosis of lung cancer．

【Key words】 Lung cancer，CK7，Ki-67，Immunohistochemistry

肺癌是致死率最高的癌症，它的发生与进展是一个逐步发展的过程。细胞的过度增殖及转移是肿瘤发生与发展的重要因素之一。细胞角蛋白7（cytokeratin 7，CK7）和Ki-67 为细胞核增殖抗原，其本身与DNA 合成有关，可以作为恶性肿瘤的细胞增殖及转移的评价指标。本研究通过采用免疫组化的方法对肺癌组织中CK7和Ki-67的表达进行检测，并收集相关的临床资料，探讨它们与肺癌的发生与发展的关系，研究二者联合使用作为肺癌预后敏感性指标的可能性。

1 材料与方法

1.1 材料

SP 试剂盒购自北京中衫生物技术有限公司，鼠抗人CK7 单克隆抗体购自迈新公司，鼠抗人Ki-67 单克隆抗体免疫组化试剂盒购自北京中衫生物技术有限公司。

1.2 一般资料

选取我院胸外科2013年10月～2014年10月手术切除肺癌标本62 例，其中男性47例，女性15例，年龄36～82岁，平均（58.3±6.7）岁。鳞癌31例，腺癌20例，腺鳞癌4例，其他7例。所有标本均为手术切除组织，有明确的病理结果，术前均未行化疗或放疗。按照2009年国际抗癌联盟（ UICC） TNM 分期标准，Ⅰ、Ⅱ期28例，Ⅲ、Ⅳ期34例。

1.3 免疫组织化学染色

切除组织石蜡包埋、切片，脱蜡，3% CO2室温孵育5～10 min，高压抗原修复，去内源性过氧化物酶及牛血清封闭。分别给予一抗4℃ 过夜，采用PBS代替一抗作为阴性对照。次日再依次滴加二抗37℃孵育20 min。最后用二氨基联苯胺（DAB） 显色，苏木素复染。乙醇梯度脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封片，光学显微镜下观察。采用PBS代替一抗座位阴性对照。采用组织学评分评估，按照各自染色程度和染色细胞数进行综合量化分析评分。阳性细胞出现棕褐色颗粒。每例标本在显微镜下随机选择10个高倍视野（×400），每个视野计数100个细胞。其中染色强度评分：无着色计为0分，浅黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。阳性细胞评分按照计数100 个细胞中阳性细胞所占百分比评分：阳性细胞＜10%为0 分，阳性细胞11%～25%为1 分，阳性细胞25%～50%为2分，阳性细胞50%～75%为3分，阳性细胞＞75%为4分。标准为：0～1分为阴性（-） ，2～3分为弱阳性（+） ，4～6分为中强阳性（++），＞6分为强阳性（+++）。阴性、弱阳性归为阴性表达，中、强阳性定义为阳性［1］。

1.4 统计学方法

数据采用SPSS 17.0 统计软件进行分析，将患者的临床资料病理学特征和实验结果共同建立数据库。计数资料采用χ2检验相关分析采用直线相关分析和t 检验，P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 CK7、Ki-67 在不同类型肺癌中的表达

表1 CK7、Ki-67 在肺癌中的表达同其临床病理特征的关系

CK7和Ki-67 均定位在细胞核。62例肺癌组织中CK7和Ki-67阳性表达分别为42 例（ 67.8 %） 和43例（ 69.4%）。男性患者CK7 和Ki-67 表达阳性率与女性均差异无统计学意义（P＞0.05。不同年龄肺癌患者中CK7 和Ki-67的表达差异无统计学意义（＞0.05）。Ki-67 在不同病理类型肿瘤组织中表达差异无统计学意义（P＞0.05） ，但CK7在不同病理类型肿瘤组织中表达差异有统计学意义（P＜0.01）。在高分化肿瘤患者组织中CK7 和Ki-6表达水平低于低分化患者，差异有统计学意义（P＜0.01）。在有淋巴结转移组的肺癌患者CK7和Ki-67的表达阳性率高于无淋巴结转移组，差异有统计学意义（P＜0.01）。CK7 表达水平在肺癌病理分期较早组别（Ⅰ+Ⅱ） 低于分期较晚组别（Ⅲ+Ⅳ） ，差异有统计学意义（ P＜0.01） ，但Ki-67的表达在两组中差异没有统计学意义（P=0.18），CK7 表达与Ki-67 表达之间无相关性（P=0.49），详见表1。

2.2 CK7 和Ki-67在肺癌中的联合检测

由表2可知，在联合诊断的62例中，表型为CK7 +/ Ki-67+的肺癌共29例，以腺癌为多，占69.0%；CK7 +/ Ki-67 -共13例，以腺癌居多，占77.0%；CK7 -/ Ki-67 +共14例，以鳞癌居多，占85.7%；CK7 -/ Ki-67 -仅为6例。

表2 CK7 和Ki-67 在NSCLC 中的联合表达

3 讨论

肺癌的发病率逐年增长，已经成为当今世界恶性肿瘤死亡的最主要原因。虽然肺癌的多学科综合治疗取得进展，但5年生存率仍较低，对于早期缺乏典型的临床症状、体征，或者是起病比较隐匿的肺癌患者，到医院就诊或是到确诊时往往已进入晚期或已出现转移，给肺癌的后续治疗带来困难，同时侵袭转移也是造成治疗效果差并导致患者死亡的主要原因。所以人们在不断探索研究新的早期诊断的办法，以期使肺癌患者能够得到更多更好的治疗。随着分子生物学以及人类基因组学的发展，人们对肺癌的发生、发展、转移机制的研究也在不断深入，为我们了解肺癌发生、发展的全过程提供了有力的基础依据，我们可以更早的发现肺癌及预后做出判断，并为进一步实现更多的分子靶向治疗、基因治疗、细胞生物学治疗等提供研究基础。

CK7是一种碱性细胞角蛋白，其分子量为54 KDa，在不同部位的腺癌中表达，其表达模式可用于鉴别转移腺癌的原发部位［2］。Ki67基因定位于第10号染色体，其蛋白质产物定位于细胞核，由相对分子质量为345 KDa和395 KDa两条多肽链组成。Ki67是临床检测核增殖的敏感性指标，G1期时即可检测出，直至细胞分裂晚期。由于细胞分裂后Ki67会迅速降解，因此Ki67的基因表达可提示机体细胞增殖情况。研究还发现，Ki67在胃癌、乳腺癌、肝癌及恶性软组织肿瘤中均有过表达，并且与肿瘤的发生发展、浸润转移及预后有密切关系，Ki67的高表达促进肿瘤细胞增殖，对其深入研究对于了解肿瘤的生物学行为和预后有重要价值［3-6］。

本研究观察到：Ki-67 在不同病理类型肿瘤组织中表达差异无统计学意义（P＞0.05），但CK7在不同病理类型肿瘤组织中表达差异有统计学意义（P＜0.01）。高分化肺癌患者CK7 和Ki-67表达水平低于低分化患者，差异有统计学意义（P＜0.01）。CK7 和Ki-67 表达水平在有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组，差异有统计学意义（P＜0.01）。CK7 表达水平在肺癌病理分期较早组别（Ⅰ+Ⅱ） 低于分期较晚组别（Ⅲ+Ⅳ） ，差异有统计学意义（P＜0.01） ，但Ki-67的表达在两组中没有统计学意义（P=0.18），CK7 表达与Ki-67 表达之间无相关性（P=0.49），这提示肺癌的增殖与转移可能与CK7和Ki-67 表达水平有关。

本研究结果显示肺癌组织中检测到Ki-67、CK7 的阳性表达均提示肿瘤细胞的增殖旺盛，还显示它们的表达水平同肺癌分化程度以及有无淋巴结转移均密切相关，故对于肺癌患者通过组织免疫组化检查这两项结果，可用于指导肺癌患者的个体化治疗，判断预后。对于肺癌患者应采取化疗、放疗、手术治疗以及分子靶向药物哪一种治疗方式或是综合治疗有一定指导作用。建议术前通过气管镜或者经皮肺穿刺取活检，早起明确病理类型的同时，通过免疫组化方法检测Ki-67、CK7 的表达水平，如果提示Ki-67、CK7 均阳性表达，提示肿瘤恶性程度较高且预后差，在无绝对手术禁忌证的情况下积极手术治疗，以降低肿瘤分期或提高远期生存率。

参考文献

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【中图分类号】R734．2

【文献标识码】A

【文章编号】1674-9316（2015）32-0168-03

doi：10．3969/j．issn．1674-9316．2015．32．125

作者单位：1 河南省人民医院重症医学科，河南 郑州 450003；2 河南省人民医院肝胆外科，河南 郑州 450003

通讯作者：余海波，E-mail：yhb2101661@163．com

Expression of Ki-67 and CK7 in Lung Cancer and Their Combined Diagnostic Value

ZHANG Huifeng1QIN Bingyu1YU Haibo21 ICU，Intensive Care Unit of He'nan Provincial People's Hospital，Zhengzhou He'nan 450003，China，2 Department of Hepatobiliary Surgery of He'nan Provincial People's Hospital，Zhengzhou He'nan 450003，China

【Abstract】