文心兰离体培养技术研究

李力

[摘 要]应用植物离体培养技术研究文心兰增殖技术。结果表明：文心兰原球茎增殖的最佳培养基为MS+6-BA4 mg·L-1+NAA0.4mg·L-1+活性炭1.5g·L-1+蔗糖20.0g·L-1；最佳的幼苗分化培养基是1/2MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.5mg· L-1+蔗糖20.0g·L-1+琼脂10.0g·L-1为佳；最佳的壮苗培养基以1/2MS+NAA1.0mg·L-1+蔗糖20 g·L-1+活性炭2.0 g·L-1+黄瓜汁10%为佳。

[关键词]文心兰；原球茎；增殖；分化；壮苗

[中图分类号]S682.31 [文献标识码]A

文心兰（Oncidium）为兰科文心兰属植物，又名跳舞兰、舞女兰或跳舞女郎（Dancing Lady Orchid）。近年来，作为重要的切花和盆花种，市场需求量急剧增加，成为洋兰类的新宠之一。文心兰同其它兰科植物一样，多采用传统的分株或播种等方法进行繁殖，由于分株繁殖系数低，播种又存在后代性状不一致等缺点，因而，利用现代生物组织培养技术进行种苗的快繁生产具有重要的意思。为此本实验对文心兰原球茎的增殖、分化及壮苗进行了探索性研究。

1 材料与方法

1.1 材料与主要仪器

1.1.1 供试材料

文心兰茎尖诱导形成的原球茎（Protocorm Like Body以下简称PLB）。

1.1.2 主要仪器

塑料瓶、玻璃棒、量筒、移液管、酒精灯、PHS-2数显酸度计、超净工作台、高压蒸气灭菌锅、METTLERPM200电子天平

1.2 试验方法

1.2.1 原球茎的增殖

先将文心兰茎尖诱导形成的PLB在MS+6-BA 2+NAA 1的培养基上扩增30 d，培养温度（28±1）℃、光强2000～1500 Lx、光照时间12 h/d。继代增殖達到一定数量后进行以下探索性实验。

1.2.1.1 不同浓度6-BA和NAA对文心兰PLB增殖的影响试验

以MS为基本培养基，具体设计方案见表1。每种处理接5瓶，每瓶接种15个PLB块，PLB块3mm，3次重复。培养温度（28±1）℃、光强2000～1500 Lx、光照时间12 h/d，培养时间为30 d。

1.2.1.2 不同MS对文心兰PLB增殖的影响

将文心兰PLB分别接种在MS、1/2MS、1/3MS+6-BA2.0 mg·L-1 +NAA1.0mg·L-1 的培养基上，每种处理接5瓶，每瓶接种15个PLB，PLB块3mm，3次重复。培养温度（28±1）℃、光强2000～1500Lx、光照时间12h/d，培养时间为30 d。

1.2.2 分化与壮苗

1.2.2.1 不同浓度激素组合对幼苗分化的影响将增殖得到的原球茎切割后，以MS为基础培养基，通过分别添加激素6-BA和NAA含量来探索最佳分化苗配方。每种处理接5瓶，每瓶接种15个PLB，PLB块3mm，3次重复。培养温度（28±1）℃、光强2000～1500Lx、光照时间12h/d，培养时间为30d。统计幼苗分化率。

1.2.2.2 不同添加物对壮苗生根的影响

为了提高后期移苗的成活率，本试验设计了香添加蕉、黄瓜、马铃薯、椰乳汁、水几种壮苗生根培养基，对壮苗生根的影响试验，每种处理接5瓶，每瓶接10株2～3cm的文心兰无根苗。基本培养基采用1/2MS+蔗糖20 g·L-1+活性炭2.0 g·L-1+NAA1.0 mg·L-1。培养温度（28±1）℃、光强2500 Lx、光照时间14 h/d，培养时间为60d。

2 结果与分析

2.1 6-BA和NAA对文心兰PLB增殖的影响

根据表一的试验结果，对不同6-BA和NAA对文心兰PLB增殖的影响进行方差分析，其分析结果见表二。

表二的方差分析结果表明，NAA和6-BA对文心兰PLB的增殖影响显著（P<0.05），NAA与BA的交互作用不大（P>0.05）。

从表二可以看出，a因素3水平中a2与之间a1和a3差异显著，说明6-BA 4.0 mg·L-1时，最有利于文心兰PLB的增殖。

从表三可以看出，b2与b1和b3之间差异显著，说明NAA0.4 mg·L-1时最有利于文心兰PLB的增殖。故文心兰PLB增殖的最优激素组合为6-BA4 mg·L-1+NAA0.4 mg·L-1。

2.2 不同MS培养基对文心兰PLB增殖的影响

由表四可知，大量元素对文心兰PLB增殖有一定影响，大量元素太低不利于PLB增殖，1/3MS增殖系数只有1.5，MS和1/2MS增殖系数较高，没有明显差异，达到2.1以上。

2.3 不同添加物对壮苗生根的影响

从表五可以看出，在文心兰壮苗生根实验中，不同添加物对促进瓶苗生根存在一定的差异。处理2（添加黄瓜汁），生根率达100.0%，平均每株有6条根，植株高6.0 cm，且根系粗壮。从表五还可以看出添加香蕉、马铃署、椰乳汁对生根都有一定促进作用，生根率分别为85.0%、80%、67%，均比对照高。实验结果表明，添加黄瓜汁对文心兰壮苗生根最有利。

3 小结与讨论

文心兰作为漂亮的观赏花卉，市场的需求量很大。NAA 能促进细胞分裂、诱导愈伤组织的形成，6-BA 可促进细胞分裂和生根等，培养基中的生长素和细胞分裂素的比率合适与否是决定生芽和壮苗生根的关键。提高细胞分裂素的质量浓度，有利于芽的形成；提高生长素质量浓度，有利于根的形成。

通过实验得出：心兰PLB的最佳增殖培养基是MS+6-BA4mg· L-1+NAA0.4mg·L-1 +活性炭1.5g·L-1+蔗糖20.0g·L-1是。最佳的幼苗分化培养基是1/2MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1+蔗糖20.0。最佳的生根壮苗是1/2MS+NAA1.0mg·L-1+蔗糖20g·L-1+活性炭2.0g·L-1+黄瓜汁10%作为壮苗培养基最为理想，培养基中加入适当天然有机物有助生根壮苗。

[参考文献]

[1] 张毓，张佐双，赵世伟.世界观赏兰花[M].辽宁科技出版社， 2004.

[2] 范成明，李枝林，何月秋.兰花组织培养及分子生物学研究进展[J].园艺学报，2003（4）.

[3] 曹孜义，刘国民.实用植物组织培养技术教程[M].兰州：甘肃科学技术出版社，2000.

[4] 崔广荣，刘云兵，张俊长等.文心兰组织培养的研究[J].园艺学报，2004（2）.

[5] 颜隽，唐岱，杨秋等.文心兰种苗生产的研究进展[J].云南农业， 2006（08）.

[6] 王蒂.细胞工程学[M].北京：中国农业出版社，2007.

[7] 潘永飞，戴忠良，潘叶飛等.不同播种期对波斯菊观赏价值的影响[J].江西农业学报，2009（4）.

[8] 金研铭，徐惠风，李艳等.阿特拉津和汞胁迫对波斯菊种子萌发及生长的影响[J].安徽农业科学，2010（7）.