猪瘟、蓝耳病及猪O型口蹄疫母源抗体消长规律

吴云飞 ，高寒松，邝从明，胡雪梅，谢良可，刘孟良，邹吉波，邓　芳，黄邦伟,*

(1.广汉市农业局，四川 广汉 618300；2. 资阳市雁江区畜牧食品局)

猪瘟、蓝耳病及猪O型口蹄疫母源抗体消长规律

吴云飞1，高寒松1，邝从明1，胡雪梅1，谢良可1，刘孟良2，邹吉波1，邓芳1，黄邦伟1,*

(1.广汉市农业局，四川 广汉 618300；2. 资阳市雁江区畜牧食品局)

摘要：为了研究猪瘟、猪高致病性蓝耳病和猪O型口蹄疫母源抗体的消长规律，制定科学合理的免疫程序。本试验利用ELISA抗体检测试剂盒，对仔猪0、7、14、21、28、35、42、49、56日龄的猪瘟、猪高致病性蓝耳和猪O型口蹄疫母源抗体分别进行检测。结果表明仔猪猪瘟、猪高致病性蓝耳病和猪O型口蹄疫哺乳前抗体水平均与阴性对照相当， 抗体为0，7日龄时各疾病抗体均达到最高水平；猪瘟抗体水平在28日龄时明显下降；猪高致病性蓝耳病35日龄时抗体水平明显下降；仔猪O型口蹄疫14日龄抗体明显下降。猪瘟、猪高致病性蓝耳和猪O型口蹄疫的母源抗体具有不同消长规律，为临床制定合理的首免日龄提供科学依据。

关键词：猪瘟；猪高致病性蓝耳病；猪O型口蹄疫；母源抗体；消长规律；ELISA

猪瘟( Classical swine fever，CSF)、猪高致病性蓝耳病(猪繁殖与呼吸障碍综合征，Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)和口蹄疫( Foot and mouth disease，FMD)分别由猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV )、猪繁殖和呼吸障碍综合症病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus，PRRSV)和口蹄疫病毒( Foot and mouth disease virus，FMD)引起的急性、高度接触传染病，是我国养猪业危害最大三种传染病，该三种疫病均被我国列为一类动物疫病。目前，世界范围内对该三种病主要采用强制免疫、禁运、扑杀、消毒、封锁等措施进行防制，英国、新西兰和澳大利亚等经济发达的岛国采用扑杀措施来彻底消灭疫病，我国则主要依靠疫苗强制免疫措施来防制。但由于基层养殖饲养环境和从业人员的业务知识参差不齐，导致免疫程序混乱，免疫效果不一，实际生产中三种疫病时有发生。很多学者认为仔猪发生疫病主要是由于该疫病的首免时间不当，母源抗体对接种疫苗的干扰作用造成免疫失败而引起的。因而本试验将利用ELISA法对不同日龄仔猪CSF、PRRS和O型口蹄疫(FMD-O)进行系统检测，进一步弄清母源抗体消长规律，了解幼畜免疫动态，以期选择合适的首免时间，为临床制定CSF、PRRS和FMD-O疫苗的合理免疫程序提供科学依据。

1材料与方法

1.1材 料

1.1.1试验动物四川某规模化猪场年龄、胎次、饲养状况、环境条件相近、同一天分娩的4头健康母猪(DLY三元杂交配套系种猪)及所产仔猪。

1.1.2试验疫苗猪瘟耐热保护剂活疫苗(兔源)，山西隆克尔生物制药有限公司生产(批号：2113029)；猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)，吉林和元生物工程有限公司生产(批号：20131202)；猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/GX/09-7株+ O/XJ/10-11株)，内蒙古金宇宝灵生物药品有限公司生产(批号：3136082)。

1.1.3检测试剂猪瘟病毒间接ELISA抗体检测试剂盒(批号：2014102310)和猪口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒(批号：2012021001)购自兰州兽医研究所；猪蓝耳病病毒抗体ELISA检测试剂盒(批号：20131203)购自洛阳莱普生信息科技公司。

1.2方 法

1.2.1试验动物处理4头母猪分娩前按照常规免疫程序进行CSF、PRRS和FMD-O免疫；分娩后分泵从每窝中随机抽取体况相近仔猪2头，分别编号1～8，共8头。仔猪21日龄断奶，试验期间弱仔、死猪及时淘汰。

1.2.2采血及血清制备仔猪分别于出生后0(哺乳前)、7、14、21、28、35、42、49、56日龄耳缘静脉采血，静置析出血清，将血清注入EP管内，-20℃保存待检。

1.2.3母源抗体检测按照CSF、PRRS和FMD-O抗体检测试剂盒说明操作，分别测定CSF、PRRS和FMD-O抗体OD值。

1.2.4结果判断根据阴、阳性对照检测值，确定CSF检测OD450值大于0.255为阳性，小于0.255为阴性，等于0.255需复检；PRRS检测OD450值大于等于Cut Off 值即0.193为阳性，小于0.193为阴性；FMD检测OD492临界值为1.512，小于或等于1.512为阳性孔，大于1.512为阴性，其中抗体效价大于或等于1∶64的血清为口蹄疫O型阳性，99%以上保护，小于1∶64则血清样品口蹄疫O型抗体为阴性。

2结果与分析

2.1不同日龄仔猪CSF母源抗体消长情况

分别测定各日龄段仔猪血清CSF的OD450值，计算8头仔猪各日龄抗体平均OD450值水平，CSF母源抗体消长规律见图1。由图可知，仔猪在哺乳前CSF抗体水平与阴性对照的OD值相当，则说明此时CSF抗体为0，吮乳后仔猪抗体迅速上升，7日龄时抗体水平达到最高，7至28日龄抗体缓慢下降， 28日龄时迅速下降，到49日龄时抗体水平与哺乳前相当。根据试剂盒判断标准，仔猪在7至28日龄期间抗体水平处于完全保护阶段，28至49日龄则不完全保护，49日龄后不受保护。

图1　CSF抗体平均水平消长规律

2.2不同日龄仔猪PRRS母源抗体消长情况

PRRS母源抗体平均水平消长规律见图2。由图可知，仔猪在哺乳前PRRS抗体水平与阴性对照的OD值相当，此时CSF抗体水平为0，吮乳后仔猪抗体迅速上升，7日龄时抗体水平达到最高，随后迅速下降，14至35日龄缓慢下降，35日龄后抗体水平再次迅速下降，到49日龄时抗体水平与哺乳前相当，抗体几乎为0。根据试剂盒判断标准，7至35日龄期间仔猪抗体水平处于完全保护阶段，35至49日龄不受完全保护，49日龄后不受保护。

图2　PRRS抗体平均水平消长规律

2.2不同日龄仔猪FMD-O阻断ELISA检测母源抗体消长情况

待检血清1∶64稀释的FMD-O母源抗体OD492平均值见图3。由图可知，仔猪在哺乳前FMD-O的抗体水平与阴性对照的OD值相当，说明此时FMD-O抗体为0，吮乳后仔猪抗体迅速上升(OD值越低抗体水平越高)，7日龄时抗体水平达到最高值，随后迅速下降，14至28日龄期间缓慢下降，28日龄后下降明显，到35日龄时抗体水平与哺乳前相当，抗体几乎为0。根据试剂盒判断标准，7至14日龄期间仔猪抗体水平处于完全保护阶段，14至28日龄不受完全保护，28日龄后不受保护。

图3　FMD-O抗体平均水平消长规律

3讨论

母源抗体对于提高仔猪抵抗力、抗感染能力起着决定性作用，仔猪出生后依赖于母猪体内的抗体获得被动免疫，然而仔猪获得母源抗体不是经过胎盘传递而是通过吮吸母乳获得的。因为母猪胎盘与胎儿血液循环之间隔着数层组织，阻断了抗体的运输；而仔猪通过吮吸母乳，母源抗体经过胃肠上皮细胞吸收而进入仔猪血液循环内。本试验中CSF、PRRS和FMD-O三种抗体在仔猪哺乳前的检测值与阴性对照相当，可见三种疫病并没有在母猪体内获得相应抗体，哺乳后三种疫病抗体迅速上升，试验结果与之前研究相同。因此,科学地做好母猪免疫工作，并保证新生仔猪能够及时足量吃好初乳对提高仔猪抵抗力尤为重要。

国内外学者研究表明，仔猪超前免疫能够有效降低仔猪发病率，提高仔猪成活率，保证仔猪在吮乳前产生主动免疫。 从本试验研究结果来看超前免疫可以避开母源抗体的干扰，科学可行。然而在实际应用中我国部分养殖场应用效果不理想，其原因可能是未能严格执行超前免疫后 2 h 内仔猪不能吃初乳，初乳中母源抗体干扰弱毒苗复制所致。

目前，许多规模场中时常有CSF、PRRS和FMD疾病发生，许多学者认为这与疫苗首免日龄有关。由于母源抗体具有两面性，若免疫时间过早，可能受到母源抗体的干扰导致免疫失败；若免疫时间过迟，母源抗体水平过低，易引发疾病，因此首免日龄的选择显得尤为重要。本试验中CSF、PRRS和FMD-O抗体水平均在7日龄时最高，随后下降，一些研究成果与本试验相似。林毅等应用猪瘟 Dot - ELISA 试剂盒检测仔猪母源抗体在第7天达到最高；李明义等采用 IHA 试验方法检测仔猪母源抗体在 7 日龄时达到高峰，随后仔猪的母源抗体水平迅速下降。母安雄等采用ELISA试剂盒检测发现仔猪PRRS母源抗体在10日龄时达到最高。高世杰等研究的猪口蹄疫10日龄达到峰值相当；吴在玉等研究也取得相似结果。从图中可以看出,仔猪在7至14日龄虽然仍在吮吸母乳，但CSF、PRRS和FMD三种抗体水平都迅速下降，推测这可能与仔猪生长速度过快有关。生产中，疫苗的抗体效价与保护关系一些学者以 3 个区带来表述，即敏感带 ( 易受感染滴度 ) 、 灰色带 ( 部分保护滴度 ) 和保护带 ( 完全保护带 ) 。本试验可得知,CSF的的保护带在7至28日龄，灰色带在28至49日龄，敏感带在49日龄以后，与张新成等研究相符；PRRS的的保护带在7至35日龄，灰色带在35至49日龄，敏感带在49日龄以后，与母安雄等研究基本吻合；FMD-O的的保护带在7至14日龄，灰色带在14至28日龄，敏感带在28日龄以后。

因此，考虑到仔猪免疫应答能力的发育，以及减少母源抗体的干扰，推荐临床上CSF的首免日龄在28日龄左右，PRRS首免日龄在35日龄左右， FMD-O首免日龄在21日龄左右；根据抗体半衰期长短，免疫顺序可以是先免FMD-O，然后是免PRRS，最后免CSF。本试验首次对母源抗体进行全面系统的检测，具有重要的生产指导意义。

参考文献:

[1]殷震, 刘景华. 动物病毒学(第二版)[M]. 北京: 科学出版社, 1997.

[2]邓广金.猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果试验[J].湖北畜牧兽医, 2009(7):28-29.

[3]杨先富, 王开功, 李毅, 等. 仔猪口蹄疫母源抗体消长规律监测[J]. 山地农业生物学报, 2007, 26(1): 26-29.

[4]邱伯根, 张强, 邱立新, 等. 母猪抗体对猪口蹄疫疫苗主动免疫应答的影响[J]. 中国兽医科学, 2006,36(S1):1-4.

[5]严达伟, 肖啸, 连林生, 等. 猪瘟超前免疫对仔猪生长及抗体水平的影响[J]. 动物医学与动物科学, 2004 , 21(7 ): 34 -36 .

[6]Corthier G, Charley B. Influence of colostral antibodies on pig immunization against hog cholera virus [J]. Ann Res Vet, 1978 , 9 (2) : 245 -253 .

[7]王波, 陈静，王敏, 等. 仔猪猪瘟母源抗体消长规律[J]. 中国兽医学报, 2010, 30(4):453-455.

[8]吴在玉, 张杰. 猪O型口蹄疫母源抗体消长规律及疫苗免疫的干扰作用[J]. 安徽农业科学, 2013, 41(14) :6292-6293.

[9]林毅, 冯金传, 张道永. 规模化猪场4种猪瘟免疫程序的免疫效果比较[J]. 中国兽医科技, 2000, 30 (4):20 -22.

[10]李明义, 白志娟, 王莉娟, 等. 猪瘟灭活疫苗抗体消长规律动态研究[J]. 中国预防兽医学报, 2005, 27 (5):385 -387 .

[11]母安雄, 杨宗照, 严惠群, 等. 仔猪 PRRS 母源抗体消长规律及疫苗免疫效果观察。浙江农业科学，2008(1)：110-112

[12]高世杰,窦永喜,程爱华,等.母源抗体对猪口蹄疫疫苗免疫应答的影响[J]. 中国兽医学报, 2011, 31(1):45-48.

[13]张新成, 李官兵, 史子学, 等. 猪瘟母源抗体在仔猪体内持续时间的研究[J]. 养猪, 2008 (1) : 46-48.

The Maternal Antibodies Dynamics Changes of CSF, PRRS and FMD-O

WU Yun-fei1, GAO Han-song1, KUANG Cong-ming1, HU Xue-mei1, XIE Liang-ke1,LIU Meng-liang2, ZOU Ji-bo1, DENG Fang1, HUANG Bang-wei1,*

(1.AgriculturalBureauofGuanghanCity,GuanghanSichuan618300;2.AnimalHusbandryandFoodBureauofYanjiangDistrict)

Abstract:In order to study the maternal antibodies dynamics changes of classical swine fever(CSF), porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS), and O type foot and mouth disease(FMD-O), the scientific and reasonable immune procedure was established.The maternal antibodies of CSF, PRRS and FMD-O in age 0, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 and 56 days were detected respectively by the ELISA in this experiment. The results showed that the antibodies levels of CSF, PRRS and FMD-O before sucking were commensurate with negative control, and it reached the top level at 0 and 7 days. The antibody levels of CSF, PRRS and FMD-O decreased obviously at 28 days, 35 days and 14 days, respectively. The maternal antibodies of CSF, PRRS and FMD-O have different dynamics changes, and it can supply a reference for establishing scientific and reasonable the date of initial immunity.

Key words:classical swine fever (CSF); porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS); O type foot and mouth disease (FMD-O); maternal antibody; dynamics ELISA

[收稿日期]2015-09-14

[作者简介]吴云飞(1986-)，男，重庆垫江人，硕士，在广汉市农业局主要从事动物疫病预防与控制工作。E-mail：wyf198674@163.com。 *[通讯简介]黄邦伟(1966-)男，四川广汉人，本科，高级兽医师，主要从事动物疫病防控工作。E-mail：121699381@qq.com

[中图分类号]S 852.43

[文献标识码]A

[文章编号]1004-6704(2016)01-0029-04