肺癌组织中胞浆型磷脂酶A2和前列腺素E2合酶-1的表达及其与临床病理参数的关系

2016-06-29肖秋香

中国老年学杂志 2016年10期

关键词：磷脂酶合酶前列腺素

帅　萍　肖秋香

(赣南医学院病理学教研室，江西　赣州　341000)

肺癌组织中胞浆型磷脂酶A2和前列腺素E2合酶-1的表达及其与临床病理参数的关系

帅萍肖秋香

(赣南医学院病理学教研室，江西赣州341000)

〔摘要〕目的探讨肺癌组织中胞浆型磷脂酶(cPL)A2和前列腺素E2合酶(mPGES)-1的表达及其与临床病理参数的关系。方法选择58份肺癌组织标本(肺癌组)及其周边正常组织(距离所切肺癌组织超过5 cm，癌旁组)，采用RT-PCR和免疫组化方法检测样本中cPLA2和mPGES-1 mRNA和蛋白的表达，分析其在肺癌组及不同临床病理参数中的差异。结果肺癌组mPGES-1 和cPLA2 mRNA表达水平显著高于癌旁组(P<0.05)；肺癌组mPGES-1和cPLA2蛋白的总表达阳性率，均显著高于癌旁组(P<0.05)。肿瘤分化程度较低、存在淋巴结转移以及临床分期越高，mPGES-1蛋白表达阳性率越高(P<0.05)，而不同肿瘤直径、病理类型、分化程度、临床分期以及是否存在淋巴结转移与肺癌组织的cPLA2蛋白的表达阳性率无统计学意义(P>0.05)。结论肺癌组织中cPLA2和mPGES-1呈现高表达，cPLA2表达与临床病理参数无关，而mPGES-1表达与分化程度、是否存在淋巴结转移以及不同临床分期有关，两者检测对肺癌的早期诊断和靶向治疗有一定的临床意义。

〔关键词〕肺癌；胞浆型磷脂酶A2；前列腺素E2合酶-1

目前肺癌的治疗主要采用手术切除为主、化疗为辅的综合治疗方法，但治疗效果较差。近年来随着肺癌分子学机制和靶向治疗研究的不断深入，寻找特异性的分子靶点开展靶向治疗成为肺癌治疗新的契机〔1〕。本研究探讨胞浆型磷脂酶(cPL)A2和前列腺素E2合酶(mPGES)-1在肺癌发生发展中的作用。

1资料和方法

1.1一般资料随机选取我院2013年1月至2014年12月58例肺癌患者手术切除的肺癌组织标本(肺癌组)及其周边正常组织(距离所切肺癌组织超过5 cm〔2〕，癌旁组)，所有肺癌组织均经病理学检查确诊，且组织切除前患者均未接受放疗和化疗等任何治疗。标本在手术切除后1 h内放置于液氮中保存待检。其中女21例，男37例，年龄34～76〔平均(57.62±10.47)〕岁；腺癌26例，鳞癌32例；低分化型28例，高-中分化型30例；TNM分期〔3〕：Ⅰ期12例、Ⅱ期25例、Ⅲ期21例；转移程度：局部淋巴结转移31例、无转移27例。

1.2指标检测

1.2.1mPGES-1和cPLA2的mRNA表达水平〔4〕参照RNA提取试剂盒的操作说明进行所有组织RNA提取，从所提取的RNA中提取一部分进行电泳，观察RNA的完整性(完整即出现5 s、18 s和28 s三条清晰条带)。随即通过反转录途径将所有样本的RNA反转录成cDNA，最后通过PCR方法将所有样本进行cDNA扩增，引物序列：mPGES-1：正义：5′-CTTCCCGATCAAACACATAAGG-3′；反义：5′-CAGTGGGCTCACATTTAACCT-3′；cPLA2：正义：5′-ACCTTGAAGGAGTCAGGCATGAG-3′；反义：5′-TGGAGACCATCTACCCCTT-3′；β-actin：正义：5′-CGTCATACTCCTGCTTGCTGATCCACATCTG-3′；反义：5′-ATCTGGCACCACACCTTCTACAATGAGCTGCG-3′。分别从每份肺癌组织和癌旁组织中获得mPGES-1、cPLA2和内参β-actin基因片段，序列长度分别为860 bp、620 bp和400 bp。所得基因片段置于1%琼脂糖凝胶内进行电泳，获得mPGES-1、cPLA2和内参β-actin电泳带。采用凝胶成像分析系统检测所有样本中三条条带的吸光度，最终以mPGES-1、cPLA2条带与内参β-actin吸光度值的比值作为mPGES-1、cPLA2的表达水平。

1.2.2mPGES-1和cPLA2蛋白表达水平采用免疫组化SP方法〔5〕对组织样本分别进行染色以检测其中mPGES-1和cPLA2蛋白的表达。每张切片中随机选取高倍镜下4个不同的视野，观察每个高倍视野内100个细胞，记录其中细胞质被染成棕黄色的阳性细胞数，取4次读数的平均值为最终值，最后计算阳性细胞百分比(阳性细胞数/细胞总数×100%)。

1.3临床资料收集分别收集并记录其一般资料(年龄、性别等)、肿瘤直径、病理类型、分化程度、是否存在淋巴结转移以及临床分期。

1.4统计学方法采用SPSS19.0统计学软件进行t检验、χ2检验。

2结果

2.1两组mPGES-1和cPLA2的mRNA表达水平对比肺癌组mPGES-1 和cPLA2 mRNA表达水平〔(0.81±0.23)和(0.56±0.08)〕显著高于癌旁组〔(0.07±0.02)和(0.09±0.02)〕(P<0.05)。

2.2mPGES-1和cPLA2蛋白表达水平与临床病理特征关系肺癌组mPGES-1和cPLA2蛋白的总表达阳性率〔67.24%(39/58)、79.31%(46/58)〕显著高于癌旁组〔8.62%(5/58)、0.00%(0/58)〕(P<0.05)。不同肿瘤直径和病理类型肺癌组织的mPGES-1蛋白表达阳性率差异无统计意义(P>0.05)，而不同分化程度、是否存在淋巴结转移以及不同临床分期的肺癌组织间mPGES-1蛋白表达阳性率差异显著(P<0.05)，而不同临床病理特征肺癌组织中的cPLA2蛋白的表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1　mPGES-1和cPLA2蛋白表达水平与

3讨论

Cox-2在肿瘤的发生发展中主要参与肿瘤血管的诱导产生、细胞凋亡和免疫功能的抑制以及肿瘤侵袭浸润过程〔6〕。在Cox-2介导产生前列腺素E2的过程中，需要上游cPLA2和下游mPGES-1的参与才能正常进行。其中cPLA2的主要作用是将胞膜磷脂转化为PEG E2合成所需的花生四烯酸，cPLA2的表达和活性可决定PEG E2合成的速率和利用率〔7〕。本研究提示肺癌中cPLA2呈现高表达。但是cPLA2表达与临床病理特征无相关性，对肺癌的发展无明显作用，可能是由于cPLA2在肺癌的发生发展机制中仅通过产生花生四烯酸提供给Cox-2，仅是与Cox-2协同作用，而无炎症因子刺激作用。Cox-2介导PEG E2合成的过程中也少不了下游mPGES-1的参与。在PEG E2的合成过程中，cPLA2介导合成花生四烯酸后，Cox-2将花生四烯酸催化并转化为PEGH2，PEGH2经mPGES-1催化最终生成PEG E2〔8〕。因此mPGES-1在PEG E2的合成过程中起着重要作用。本研究提示肺癌组织中存在mPGES-1高表达，与临床既往研究结果相似〔9〕。另外mPGES-1表达可预测肺癌的进展程度和后期预后情况。

4参考文献

1刘哲亮，肖高明，陈跃军，等.肺癌干细胞与肺癌的发生〔J〕.中国组织工程研究，2014；18(28)：4568-72.

2朱杏丽，陈诚文，杨秀方，等.基因芯片的Meta分析和组织芯片分析表明AXL在肺腺癌(LAD)癌旁组织中的表达高于肺腺癌组织〔J〕.复旦学报(医学版)，2014；41(4)：461-9.

3楼洋，陈献国，施亚明，等.周围型小肺癌198例TNM分期及临床意义〔J〕.中国老年学杂志，2014；34(24)：7094-5.

4陈旭，王琳，蒋敏，等.肺癌患者血清和单个核细胞9种miRNAs表达差异及其意义〔J〕.中华检验医学杂志，2013；36(2)：165-72.

5罗波，袁静萍，孔庆志，等.P63TTF-1及CD56联合相关免疫组化肺癌诊断中的意义〔J〕.西部医学，2013；25(1)：63-5.

6徐清华.COX-2抑制剂与肺癌治疗研究进展〔J〕.中国卫生产业，2013；10(7)：78-85.

7邹鑫，程少毅，李小飞，等.肺癌生存质量量表在晚期肺癌中使用的研究进展〔J〕.现代生物医学进展，2014；14(12)：2364-8，2382.

8张沿君.mPGES-1相关结直肠癌变机制的研究进展〔J〕.疑难病杂志，2013；12(8)：652-5.

9王静媛，贾海琴.肺癌中mPGES-1的表达及生物学意义〔J〕.内蒙古医学杂志，2014；46(1)：8-11.

〔2015-07-10修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)