重症急性胰腺炎大鼠血清白细胞介素-2、-8及-10的表达及临床意义

孙　胜

(新疆兵团农十师北屯医院普外科，新疆　阿勒泰　836000)

重症急性胰腺炎大鼠血清白细胞介素-2、-8及-10的表达及临床意义

孙胜

(新疆兵团农十师北屯医院普外科，新疆阿勒泰836000)

〔摘要〕目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠血清中白细胞介素(IL)-2、-8、-10的表达及临床意义。方法45只SD雄性大鼠，按照随机数字表法分为对照组、假手术组、SAP组各15只，SAP组切开大鼠腹部暴露胰腺，按照大鼠体重1 ml/kg剂量胆总管注入50 g/L牛磺胆酸钠制备SAP模型，假手术组手术相同但不注射药物，对照组正常饲养，光镜观察大鼠胰腺组织改变，酶联免疫吸附(ELISA)法在大鼠建模成功后12 h测定IL-2、IL-8及IL-10表达。结果光镜下观察SAP组胰腺组织严重水肿，细胞坏死，具有片状血斑或者胰腺出现局部皂化斑，其中SAP组胰腺组织病理为(9.45±1.45)分，SAP组评分明显高于对照组和假手术组(P<0.05)。大鼠建模成功后及对照组12 h后三组IL-2、IL-8及IL-10表达水平差异显著(P<0.05)，其中SAP组IL-2、IL-8水平高于假手术组和对照组，IL-10水平低于假手术组和对照组(P<0.05)。SAP组血清IL-2、IL-8水平与胰腺组织病理学评分呈明显正相关(r=0.567，0.675；P=0.012，0.004)，与IL-10呈负相关(r=-0.896，P=0.000)。结论IL-2、IL-8及IL-10等在SAP早期诊断中起着重要作用，并且可以作为疾病严重程度和治疗效果评价指标。

〔关键词〕重症急性胰腺炎；IL-2；IL-8；IL-10

重症急性胰腺炎(SAP)大部分由胆道疾病、酗酒以及暴饮暴食引起〔1〕，发病机制主要是胰腺自身消化和炎症细胞因子激活〔2〕，尤其是炎症因子相互作用和累计作用，这些炎症因子血管渗漏可能最终导致系统器官功能衰竭等。白细胞介素(IL)是由多种细胞产生的细胞因子，参与机体多种生理和病理反应〔3〕。本文旨在探讨IL-2、IL-8及IL-10在SAP大鼠血清中的表达和临床意义。

1资料与方法

1.1动物分组及试剂健康SD雄性大鼠45只，体重220～300 g，实验室按照正常温度(22℃～26℃)、正常湿度喂食、自由饮水饲养1 w，待大鼠适应后备用。将大鼠编号，按照随机数字表法分为对照组、假手术组、SAP组，各15只，对照组正常饲养，假手术组和SAP组均麻醉开腹暴露胰腺，SAP组注入牛磺胆酸钠，假手术组除不注入药物外其余与SAP组相同。试剂：大鼠IL-2、IL-8、IL-10检测试剂盒均购自上海酶联生物科技有限公司。牛磺胆酸钠购自武汉佰兴生物科技有限公司、戊巴比妥钠溶液购自上海西塘生物科技有限公司

1.2研究方法

1.2.1SAP模型制备建模前大鼠禁食12 h，自由饮水，按照3 ml/kg给予大鼠腹腔注射10 g/L戊巴比妥钠溶液，麻醉大鼠，然后将大鼠按照仰卧势固定在手术台上，大鼠腹壁消毒后，沿着腹壁正中线行切口打开腹腔，暴露胰腺，识别胆总管和十二指肠，观察胰管和胆管方向，夹闭胆总管胆汁流向十二指肠方向夹闭，阻碍胆汁流出，然后在相反方向穿刺胆总管，按照大鼠体重1 ml/kg剂量注入50 g/L牛磺胆酸钠，注射完毕后，缝合穿刺孔，等待60 s左右，取代血管夹，然后逐层关闭腹部，整个过程均为无菌操作，术后大鼠禁食，可适量饮水，12 h左右建模成功；假手术组除了未注入牛磺胆酸钠外，其他手术方式同SAP组，对照组正常饲养。

1.2.2血清中IL-2、IL-8及IL-10检测大鼠均在建模成功后12 h，对照组经过相同时间，按照3 ml/kg大鼠腹腔注射10 g/L戊巴比妥钠溶液进行麻醉，开腹，抽取大鼠腹腔静脉血4 ml置于离心管中，3 000 r/min离心5 min，收取血清，-20℃保存备用，应用酶链免疫吸附法(ELISA)测定大鼠建模成功后12 h IL-2、IL-8及IL-10表达，严格按照试剂盒要求步骤进行检测。

1.2.3胰腺标本制定大鼠开腹后，取适量胰腺组织，按照正常甲醛固定，石蜡包埋，切片，苏木精-伊红(HE)染色，光镜下观察组织水肿情况，并且进行胰腺组织病理评分，每个切片随机选择5个高倍视野(200倍)，观察胰腺组织变化，从炎症细胞浸润、出血、水肿、坏死及4个方面评分，分值越高胰腺组织变化越大。

1.3统计学方法应用SPSS13.0软件因素行方差分析、LSD-t检验、Pearson相关或者Spearman相关分析。

2结果

2.1病理观察和评分光镜下观察大鼠胰腺组织，对照组胰腺细胞分布正常，核圆形、胞质丰富、结构清楚、无水肿或者坏死情况；假手术组胰腺组织恢复正常，或者轻微水肿，无明显异常现象；SAP组胰腺组织严重水肿，细胞坏死，具有片状血斑或者胰腺出现局部皂化斑。

通过胰腺组织病理评分显示对照组为(1.32±0.37)分，假手术组为(1.54±0.37)分，SAP组为(9.45±1.45)分，差异显著(F=6.231，P=0.008)，其中SAP组评分明显高于对照组和假手术组(t=5.324、6.124，P=0.012、0.024)，对照组与假手术组无统计学意义(t=0.563，P=0.231)。

2.2三组血清IL-2、IL-8及IL-10表达比较大鼠建模成功后及对照组12 h后三组IL-2、IL-8及IL-10表达水平差异显著(P<0.05)，其中SAP组IL-2、IL-8水平高于假手术组和对照组，IL-10低于假手术组和对照组(P<0.05)，假手术组表达水平高于对照组，但差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

与SAP组比较：1)P<0.05

2.3血清IL-2、IL-8及IL-10表达与病理评分相关性分析SAP组血清IL-2、IL-8水平与胰腺组织病理学评分呈明显正相关(r=0.567，0.675，P=0.012，0.004)，与IL-10呈负相关关系(r=-0.896，P=0.000)。

3讨论

胰腺炎是临床常见疾病，主要表现为胰腺有水肿、充血，或出血、坏死，临床上出现腹痛、腹胀、恶心、呕吐、发热等症状〔4〕，其中AP为胰酶消化胰腺及其周围组织所引起的急性炎症，主要表现为胰腺呈水肿、出血及坏死〔5〕，根据流行病学研究显示〔6〕其中AP发病率呈明显上升趋势，AP是常见急腹症，大部分患者病情较轻，大约10%患者发展为SAP〔7〕。

功能复杂，成网络，复杂重叠，在免疫细胞的成熟、活化、增殖和免疫调节等一系列过程中均发挥重要作用。此外，还参与机体的多种生理及病理反应等，其中IL-2分子量为15 kD，是含有113个氨基酸残基的糖蛋白，具有活化T细胞，促进细胞因子产生，刺激自然杀伤(NK)细胞增殖，增强NK杀伤活性及产生细胞因子等，IL-8分子量为8 kD，活性形式为72个氨基酸，主要的生物学活性是吸引和激活中性粒细胞，其与IL-8接触后发生形态变化，释放一系列活性产物，诱发炎症反应等。IL-10分子量为35～40 kD，主要由Th2细胞产生，能够抑制前炎症细胞因子产生等〔8,9〕。

本文研究提示IL-2、IL-8随着炎症严重表达量逐渐升高，这可能与炎症发展程度密切相关。当炎症程度重时，抗感染因子和炎症因子均会不同程度增加或者减少。本研究还说明临床上可以通过检测IL-2、IL-8表达量衡量疾病严重程度，且IL-10表达量说明抗感染治疗的效果。

4参考文献

1金牡丹,周智林,傅志泉,等.重症急性胰腺炎大鼠IL-8、IL-10及NF-κB的表达〔J〕.浙江临床医学,2008;10(6):724-5.

2Han T,Li X,Cai D,etal.Effect of glutamine on apoptosis of intestinal epithelial cells of severe acute pancreatitis rats receiving nutritional support in different ways〔J〕.Int J Clin Exp Pathol,2013;6(3):503-9.

3杜章,吴昊,吴伟林,等.不同严重程度急性胰腺炎大鼠IL-17、IL-23的表达及其相关性〔J〕.肝胆胰外科杂志,2010;22(5):395-7,401.

4袁建国,周明明,蒋正英,等.IL-10联合生长抑素对大鼠重症急性胰腺炎炎症相关细胞因子的抑制作用〔J〕.医学综述,2014;20(23):4360-1.

5朱敏,袁昌琼,杨慧英,等.尿淀粉酶检测对急性胰腺炎临床诊断的意义〔J〕.现代生物医学进展,2014;14(10):1904-6.

6夏芹,张恒超,李渲,等.急性胰腺炎大鼠血清IL-32变化及意义〔J〕.同济大学学报(医学版),2011;32(1):14-7.

7Gorsky VA,Agapov MA,Khoreva MV,etal.The effect of lornoxicam on TLR2 and TLR4 messenger RNA expression and tumor necrosis factor-α,interleukin-6,and interleukin-8 secretion in patients with systemic complications of acute pancreatitis〔J〕.Pancreas,2015;44(5):824-30.

8Vasseur P,Devaure I,Sellier J,etal.High plasma levels of the pro-inflammatory cytokine IL-22 and the anti-inflammatory cytokines IL-10 and IL-1ra in acute pancreatitis〔J〕.Pancreatology,2014;14(6):465-9.

9Zhang J,Niu J,Yang J.Interleukin-6,interleukin-8 and interleukin-10 in estimating the severity of acute pancreatitis:an updated meta-analysis〔J〕.Hepatogastroenterology,2014;61(129):215-20.

〔2015-07-19修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)

〔中图分类号〕R57

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)10-2352-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.10.017

第一作者：孙胜(1961-)，男，副主任医师，主要从事临床医学研究。