桃红四物颗粒的初步药效学研究

郭栋栋，彭代银，李珊珊，韩　岚，张艳艳，王飞龙

(安徽中医药大学药学院 安徽省中药研究与开发重点实验室，安徽 合肥　230012)

◇药学研究◇

桃红四物颗粒的初步药效学研究

郭栋栋，彭代银，李珊珊，韩岚，张艳艳，王飞龙

(安徽中医药大学药学院 安徽省中药研究与开发重点实验室，安徽 合肥230012)

摘要：目的对复方桃红四物汤颗粒(TSG)的药效学作出初步评价并比较传统水煎液桃红四物汤(TSD)作用的差异。方法通过复制急性血瘀证大鼠模型，治疗组通过给予不同剂量的桃红四物颗粒和一定剂量的阳性对照药，观察模型建立的情况，检测相关血液流变学和生化指标，探究桃红四物颗粒的初步药效学情况。结果桃红四物颗粒能够降低模型大鼠的全血黏度和血浆黏度，有效改善其血流变的功能；有效降低模型大鼠血清中内皮素-1(ET-1)的水平,升高一氧化氮(NO)的水平。结论根据试验结果，桃红四物颗粒能够有效改善急性血瘀模型大鼠的血液流变功能，可能通过降低大鼠血清中ET-1、升高NO而发挥作用。

关键词：复合混合物;桃红四物汤;血瘀;治疗等效;血流动力学;医学,中国传统

桃红四物汤是调经的经典方之一，是《玉机微义》转引的《医垒元戎》中的方子，也称加味四物汤，桃红四物汤这一名称最早见于清·吴谦所著的《医宗金鉴》。该方由熟地、当归、白芍、川芎、桃仁、红花六味药组成，功效为养血活血[1]。桃红四物汤以祛瘀为核心，辅助养血、行气。方中以破血之药桃仁、红花为主，活血化瘀；以甘温之熟地、当归滋阴补肝、养血调经；白芍养血和血，增补血之力；川芎活血行气、调畅气血，辅助活血之功[2]。现代药理学研究已经表明，该方同时具有扩张血管抗血栓[3]、抗血小板[4]、抗疲劳、抗休克、调节免疫功能等作用，在妇科方面也有比较好的疗效[5]。

颗粒剂是有别于传统中药汤剂的新型制剂，通过现代化制药设备技术，将传统饮片经过提取、浓缩、分离、干燥、制粒、包装等环节后，而制成的中药颗粒制剂，与饮片相比具有一定的优势，如服用简便，便于携带储存，不易霉变，便于调配，工艺稳定，加入矫味剂提高患者依从性等[6]。虽然其仍存在着与传统饮片相比价格偏高，与西药相比质量评价标准不统一、产品规格不统一等不足，但临床已推广并使用。桃红四物汤目前主要以汤剂用于临床治疗，为了改善传统汤剂的缺点，扩大使用范围，课题组已将其改良成为颗粒剂，为了保障颗粒剂的质量及疗效，课题组前期对桃红四物汤的醇提取工艺[7]、水提取工艺[8]进行优选，尽量保证有效成分充分提取。实验通过建立急性血瘀证大鼠模型，实验组通过给予不同剂量的桃红四物颗粒和一定剂量的阳性对照药，观察模型建立的情况，检测相关血液流变学和生化指标，探究桃红四物颗粒的初步药效学情况为日后的开发和应用提供一定的实验基础和参考。

1实验材料与仪器

1.1实验动物健康SD大鼠70只，雌性，体质量180～220 g，购自常州卡文斯实验动物有限公司，合格证号：SCXK(苏)2011-0003。实验大鼠适应性饲养3 d后用于实验。

1.2药品及试剂桃红四物颗粒、桃红四物汤水煎剂，实验室自制；复方丹参片(批号：20140316)，华佗国药股份有限公司；盐酸肾上腺素注射液，批号：10140902，上海禾丰制药有限公司；NO试剂盒，批号：20141217，南京建成生物工程研究所；ET-1试剂盒，批号：E-30589，上海源叶生物技术有限公司。

1.3实验仪器RT-6000型酶标仪，深圳雷杜生命科学股份有限公司；JW-3021HR型高速冷冻离心机，安徽嘉文仪器装备有限公司；RT-3100型洗板机，深圳雷杜生命科学股份有限公司；DNP-9052BS-Ⅲ型电热恒温箱，上海三发科学仪器有限公司；UV-1800型紫外分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司；GL-88B漩涡混合器，其林贝尔仪器制造有限公司；LG-R-80B型全自动血液黏度仪,北京中勤世帝科学仪器有限公司。

2实验方法

2.1受试药物的制备桃红四物颗粒，实验室自制；桃红四物汤水煎剂，按处方比例桃仁∶当归∶红花∶川芎∶白芍∶熟地黄(3∶3∶2∶2∶3∶4)进行煎煮，即得。

2.2动物分组及给药将适应性饲养后的大鼠，随机分为对照组、模型对照组、桃红四物颗粒的高、中、低(18、9、4.5 g·kg-1)剂量组、复方丹参片阳性对照组(0.4 g·kg-1)、桃红四物汤水煎剂组(9 g·kg-1)，每组10只。连续灌胃给药14 d，每天1次，空白组、模型组以等量的生理盐水。末次灌胃给药1 h后，除正常对照组外，各试验组大鼠皮下注射盐酸肾上腺素注射液(0.8 mg·kg-1)，共2次，两次注射时间间隔为4 h。首次注射后2 h，将各组大鼠置于0～2℃冰水浴4 min，建立急性血瘀证大鼠模型[9]。

2.3样品的采集与处理急性血瘀证大鼠模型建立成功12 h后，3.5%水合氯醛麻醉，经腹主动脉取血。取上述各组大鼠肝素抗凝后的全血，每只5 mL，进行全血黏度(低切1/s、低切5/s、中切30/s、高切200/s)和血浆黏度的测定。取每只全血2 mL，以3 500 r·min-1离心10 min后吸取上层血清，保存待用。采用ELISA法测定大鼠血清中的ET-1含量，采用化学法测定血清中的NO含量，实验操作分别按ET-1、NO试剂盒的说明书进行。

3结果

3.1大鼠血液流变学由表1可知，造模后模型对照组大鼠的全血黏度较空白对照组均明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)，血浆黏度较空白对照组明显升高，存在显著性差异(P<0.01)，说明大鼠的急性血瘀证模型建立成功。与模型对照组相比，桃红四物颗粒的高、中、低剂量组、桃红四物汤水煎剂组及复方丹参片组大鼠的全血低切黏度均显著降低(P<0.01或P<0.05)，桃红四物颗粒高、中、低剂量组及复方丹参片组大鼠的全血中切和高切黏度均显著降低(P<0.01或P<0.05)，表明桃红四物颗粒能够降低模型大鼠的全血黏度；桃红四物颗粒高、中、低剂量组、桃红四物汤水煎剂组及复方丹参片组大鼠的血浆黏度均明显降低，差异有统计学意义(P<0.01)，说明桃红四物颗粒能够降低模型大鼠的血浆黏度。实验结果说明桃红四物颗粒有效改善其血流变的功能。

表1　桃红四物颗粒对大鼠全血黏度、血浆黏度的影响(n=10)

注：与空白对照组比较，aP<0.01；与模型对照组比较,bP<0.01,cP<0.05。

3.2大鼠血清ET-1、NO由表2可知，造模后模型对照组大鼠的血清ET-1的浓度较空白对照组明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；血清NO的浓度明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)，也说明大鼠的急性血瘀证模型建立成功。与模型对照组相比，桃红四物颗粒高、中、低剂量组、桃红四物汤水煎剂组及复方丹参片组大鼠的血清ET-1的浓度均明显降低，差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结果显示，桃红四物颗粒能有效降低模型大鼠血清中ET-1的水平。桃红四物颗粒高、中剂量组、及复方丹参片组大鼠的血清NO的浓度均明显升高，差异有统计学意义(P<0.01，或P<0.05)。结果提示，桃红四物颗粒能够有效升高模型大鼠血清中NO的水平。

表2　桃红四物颗粒对大鼠血清ET-1、NO的

注：与空白对照组比较，aP<0.05；与模型对照组比较，cP<0.05；bP<0.01。

4讨论

血瘀证是一类与血液、血液循环有关的病理过程。中医学对于血瘀证的研究认识较早，《黄帝内经》等经典中虽没有明确提出 “血瘀证”这一概念，但已有血瘀证的相关描述，如《素问·至真要大论》中的 “血脉凝泣”，《素问·调经论》中的“血凝泣”，《素问·五脏生成》中的“衃血”等[10]。活血化瘀中药在治疗血瘀证方面具有悠久的历史，常用的活血化瘀中药有上百种。中医将活血化瘀中药大致分为以下几类[11]:和血药(如丹参、生地黄、当归、赤芍等)、活血药(如川芎、红花、益母草、三七等)及破血药(如水蛭、三棱、莪术、桃仁等)。现代医药学研究发现，活血化瘀中药通过改善血流动力学、血液流变学、抑制血栓形成、抗动脉粥样硬化及心肌缺血、抑制炎症等过程发挥其活血化瘀作用[12]。

血液流变学是研究关于血液及其相关成分流动性和流变性的学科，许多临床上的主要疾病的发生和发展往往存在着血液流变学的异常，因此，在临床的鉴别诊断和药物研究中血液流变学的检测具有十分重要的意义[13]。临床上血液流变学的常用检测指标主要包括全血和血浆黏度、红细胞压积、血沉等，其中全血黏度和血浆黏度是最常用的反映血液黏滞性的指标[14]。血瘀证的发生和发展与血管内皮功能的改变有着密切联系。其中，ET和NO是较常用也是研究较多的一对调控血管功能的活性物质[15]。ET存在于血管内皮以及各种组织和细胞中，是调节心血管功能的重要因子，对维持基础血管张力与心血管系统稳态起重要作用。ET能够表现出很强的缩血管功能，缺氧缺血或者理化等因素的刺激下能够促进ET-1的释放，进一步促进血管收缩从而增加血栓形成的风险；在血管内皮细胞里产生的NO气体，由于其脂溶性的性质，将很快渗透出细胞膜向下扩散进入平滑肌细胞，从而作用于平滑肌细胞，使其松弛，扩张血管，调节血流状态。同时也会渗透出细胞膜向上扩散进入血液，进入血小板细胞，降低血小板活性，抑制其凝集和向血管内皮的黏附，从而防止血栓的形成，预防动脉粥样硬化的发生[16]。ET和NO相互调控着彼此的合成与释放，从而调节血管平滑肌的收缩和舒张[17]。

通过对桃红四物颗粒的初步药效学评价，实验结果显示，桃红四物颗粒能够调节急性血瘀证模型大鼠血液的高黏滞状态，降低大鼠的全血黏度和血浆黏度，使血液流变学功能恢复到正常水平，改善血瘀的相关症状，发挥对急性血瘀证模型大鼠的治疗作用。试验中也发现，桃红四物颗粒能显著上调模型大鼠血清中NO的水平，下调ET-1的表达，桃红四物颗粒的养血活血、去瘀生新的作用可能与调节内皮功能中NO和ET-1的表达有关。与传统汤剂相比，由于提取工艺的优化，由于各种有效成分充分浸出，结果差异无统计学意义，因此桃红四物颗粒药效与传统汤剂基本一致，但制备的颗粒剂具有服用简便，便于携带储存，不易霉变等优势。下一步将进一步评价桃红四物颗粒在妇科、内科等疾病方面的药效，为进一步开发成为院内制剂提供理论基础，同时为今后的应用提供一定的参考。

参考文献

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Pharmacodynamic evaluation of Taohong Siwu Granules

GUO Dong-dong,PENG Dai-yin,LI Shan-shan,et al

(AnhuiKeyLaboratoryofModernizedChineseMaterial,CollegeofPharmacy，AnhuiUniversityofChineseMedicine,Hefei,Anhui230012,China)

Abstract:ObjectiveTo evaluate the pharmacodynamic effect of Taohong Siwu Granules and compare its difference from the traditional Taohongsiwu Decoction.MethodsBy copying the acute blood stasis model rats,the treatment group was given different doses of Taohong Siwu granule and a certain dose of positive control drug.Observation model was established,and the related blood rheology and biochemical indicators were detected to explore the primary pharmacodynamics effect of Taohong Siwu granule.ResultsTaohong Siwu granule could decrease the whole blood viscosity and plasma viscosity of model rats,improve the function of the level of blood rheology,effectively reduced the model rats’ serum endothelin-1 (ET-1) levels,and elevated the levels of nitric oxide (NO).ConclusionsAccording to the test results,Taohong Siwu granule can effectively improve the function of hemorrheology in acute blood stasis model rats,and may play the role by reducing the rat serum ET-1 and increasing nitric oxide.

Key words:Complex Mixtures;Taohong Siwu Decoction;Blood Stasis;Therapeutic Equivalency;Hemodynamics;Medicine,Chinese Traditional

基金项目:国家自然科学基金项目(No 81473387) ；国家自然科学基金青年项目(No 81503291)；安徽省自然科学基金项目(No 1408085QH163)

通信作者：彭代银，男，教授，博士生导师，研究方向：药理学，E-mail:pengdy@antcm.edu.cn

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.05.004

(收稿日期：2016-02-18，修回日期：2016-03-12)