HPLC法测定甲硝唑氯化钠注射液中甲硝唑含量的仪器比对实验

卢　丹　王　冬　贾瑞波

(大连市药品检验所，大连 116021)

HPLC法测定甲硝唑氯化钠注射液中甲硝唑含量的仪器比对实验

卢丹王冬贾瑞波

(大连市药品检验所，大连 116021)

摘要：建立了高效液相色谱法测定甲硝唑氯化钠注射液中甲硝唑含量的仪器比对方法，并用Z比分数统计法对35台仪器的实验结果进行了统计分析，有效评价了不同高效液相色谱仪之间的差异。

关键词：高效液相色谱仪器比对Z比分数

高效液相色谱仪是目前分析领域应用较多的分析仪器之一，以此建立的高效液相色谱分析方法也成为仪器分析领域最为广泛使用的方法。目前，高效液相色谱仪需要按照《JJG705-2014液相色谱仪检定规程》进行检定，检定合格后才能确保出具数据的准确和可靠，检定周期为2年。使用部门按需求进行期间核查，根据期间核查结果评价仪器在检定周期内的持续符合性。而在实际分析工作中，虽然高效液相色谱仪均检定合格，且期间核查符合要求，但由于仪器品牌不同，使用年限不同，应用领域不同等原因，造成实验数据的漂移，从而引起实验结果的偏差，虽然这种偏差在误差允许范围内，但有必要建立一种评价方法，用来评估不同高效液相色谱仪之间的差异，进一步确保分析结果的准确和可靠。

1仪器比对方法的建立

1.1实验方法

仪器比对使用的实验方法应为国家法定标准，且在本实验室进行过方法学确认并确认合格。本次实验方法依据《中国药典》2010年版二部[1]中“甲硝唑氯化钠注射液”的质量标准。

1.2实验人员

高效液相色谱仪的操作人员均经过相应培训，并取得高效液相色谱仪上岗证。本次比对实验参与操作的人员为5人，每人负责操作7台高效液相色谱仪，并计算实验结果。对照品溶液的配制、供试品溶液的配制、比对样品的分装和发放均由具备相应资质的同一名人员完成，由2名具备数理统计学知识的人员对比对结果进行统计学分析。

1.3仪器设备

高效液相色谱仪均检定合格并在检定有效期内，经过日常维护保养，运行状态良好。所使用的其他仪器设备均应检定或校准合格。

1.4试剂试药

比对过程中所使用的试剂、试药均应来源可靠，并在使用有效期内使用。

1.5环境要求

比对过程中应保证实验环境温度及湿度的稳定，本次实验环境温度控制在25℃±2℃，相对湿度控制在50%±10%。

1.6测定要求

比对实验应按照实验室相应程序文件的要求进行，并符合实验室质量管理体系。

2仪器比对方法应用

2.1仪器

参加此次仪器比对的高效液相色谱仪共有35台。按仪器品牌划分：沃特斯24台，安捷伦6台，岛津4台，热电1台。所配检测器均为紫外检测器，泵系统均为低压四元梯度，均配备自动脱气机和柱温箱，进样方式均为自动进样器进样，均配备色谱工作站；天平(型号：BP211D，赛多利斯)。

2.2耗材与试药

色谱柱为Kromasil C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；甲醇(色谱纯，批号013980，MREDA)；水为超纯水(超纯水机，赛多利斯)；甲硝唑对照品(批号100191-201507，中国食品药品检定研究院)；甲硝唑氯化钠注射液(规格250mL：甲硝唑1.25g，批号20140811，辽宁民康制药有限公司)。

2.3方法与结果2.3.1色谱条件

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(20∶80)为流动相；流速1.0mL/min；检测波长为320nm；进样量20μL；理论板数按甲硝唑峰计算不低于2000。

2.3.2溶液制备

精密量取甲硝唑氯化钠注射液1 mL至100mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，含甲硝唑标示浓度为50.00μg/mL，作为供试品溶液。另取甲硝唑对照品10.00mg，至200mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，含甲硝唑浓度为50.00μg/mL，作为对照品溶液。

2.3.3含量测定

按外标法以峰面积计算甲硝唑的标示含量。对照品溶液与供试品溶液分别进样6次，计算甲硝唑的含量(结果保留到小数点后两位XX.XX%)，并计算含量RSD%(结果保留到小数点后两位X.XX%)。

3结果统计

本方法以甲硝唑的含量测定结果评价各高效液相色谱仪之间的差异，35台仪器比对结果经Grubbs检验[2]，在95%置信水平，数据均有效，无异常值。再通过Z比分数[3]对数据进行统计分析，若│Z│≤2，为满意结果；2<│Z│<3，为可疑结果，应引起注意；│Z│≥3，为不满意结果(离群)。其中31台仪器的检测结果为满意结果；1台仪器出现可疑结果；3台仪器检测结果离群。结果见图1及表1。

图1　甲硝唑氯化钠注射液中甲硝唑含量比对实验Z比分数图

代码结果(%)Z值仪器型号代码结果(%)Z值仪器型号197.84-3.53Waters2695/29981998.470.51岛津LC-2010CHT298.20-1.22Waters2695/24892099.074.37Agilent1200397.62-4.95Waters2695/29962198.16-1.48Waters2695/2489498.35-0.26Waters2695/24892298.30-0.58Agilent1100598.420.19Agilent11002398.21-1.16Waters2695/2489698.13-1.67Waters2695/24892498.16-1.48WatersAcquity798.09-1.93Waters2695/24892598.35-0.26Waters2695/2489898.33-0.39Waters2695/24892698.28-0.71Waters2695/2998998.490.64热电SUMMITP680A2798.490.64Waters2695/24891098.510.77Waters2695/24892898.641.61Waters2695/24891198.450.39Agilent12602998.460.45Waters2695/29961298.430.26Waters2695/29983098.430.26Waters2695/24871398.420.19岛津LC20AD/SPD20A3198.571.16LC20AD/SPD20A1498.38-0.06Waters2695/24893298.591.28Waters2695/24891598.37-0.13Waters2695/29983398.390.00Waters2695/24891698.681.86岛津LC-12603498.33-0.39Waters2695/24891798.792.57Agilent12603598.661.73Agilent12601898.28-0.71Waters2695/2487中位值98.39四分位间距IQR0.21低四分位数98.28高四分位数98.49标准化IQR0.155673稳健CV(%)0.16极小值97.62极大值99.27极差1.65

4讨论

(1) 本方法为常量分析方法，如果使用高效液相色谱仪从事微量或痕量分析，应将本方法中甲硝唑的含量水平设置为方法定量限水平，重新进行比对。

(2)仪器比对实验要求测试样品、实验环境及操作过程的一致性，因此测定用样品为同一样品，由同一人员进行配制和分装；对照品溶液和供试品溶液均配制一份，以减小称量和配制过程的误差；实验环境和仪器操作过程均按相应操作规程进行。

(3) Z比分数统计法用于评价单个样本在整体样本中的离散程度，是当前国际上实验室能力验证及比对实验对结果进行评价的常用方法。

(4) 参加本次比对实验的仪器中，88.6%的仪器达到满意结果，可疑结果占2.9%，不满意结果占8.5%。实验室可以充分利用仪器比对结果，在从事能力验证活动、限度边缘样品检测、不合格样品复试等实验活动中，选择偏离较小(即Z比分数较小)的仪器进行分析；对于比对中出现可疑结果的仪器，在日常使用中应加以注意；对于比对中出现不满意结果的仪器，应查找原因，采取有效的纠正措施。

参考文献

[1]中国药典2010年版．二部[S] ．2010：156-157.

[2]孙毓庆．分析化学[M]．4版．北京：人民卫生出版社，2000：28-29.

[3]徐枫，周艳茁．Excel在稳健统计Z比分数计算中的应用[J] ．中国卫生检验杂质，2008，18(8)：1668-1669.

Comparison of different HPLC assay for determination of metronidazole in metronidazole and sodium chloride injection.

Lu Dan, Wang Dong, Jia Ruibo

(DalianInstituteforDrugControl,Dalian116021,China)

Abstract：An inter-instrument comparison method for the determination of metronidazole in metronidazole and sodium chloride injection by HPLC was established. Z-score was used to analyze the determination results of 35 instruments. This method can evaluate their measurement differences effectively.

Key words：HPLC；inter-instrument comparison；Z-score

作者简介：卢丹，本科，2005年毕业于沈阳药科大学，现工作于大连市药品检验所。

DOI:10.3936/j.issn.1001-232x.2016.03.019

收稿日期：2015-11-26