氮酮对黄硝巴布剂中羟基红花黄色素A体外皮肤渗透性的影响

曾明辉，谭正怀，邱建平，黄 娟

(1.四川省邛崃市医疗中心医院药学部，四川 成都 611530；2 四川省中医药科学院，四川 成都 610041)

氮酮对黄硝巴布剂中羟基红花黄色素A体外皮肤渗透性的影响

曾明辉1，谭正怀2，邱建平1，黄 娟1

(1.四川省邛崃市医疗中心医院药学部，四川 成都 611530；2 四川省中医药科学院，四川 成都 610041)

目的 研究不同浓度氮酮对黄硝巴布剂中羟基红花黄色素A体外皮肤渗透性的影响。方法 采用改良的Franze扩散池，选用不同浓度氮酮(0%、1%、2%及5%)作黄硝巴布剂的透皮促渗剂，以HPLC法测定制剂中羟基红花黄色素A的累积释放量(Q)，计算稳态流量(J)。结果 黄硝巴布剂中羟基红花黄色素A的体外释放符合Higuchi方程；当氮酮浓度为0%、1%、2%和5%时，羟基红花黄色素A12 h内的累积释放量(Q)分别是0.533、0.913、1.313及0.953 μg/ml、稳态流量分别为0.4829、0.7657、1.0857及0.8114μg/ (cm2·h)。结论 氮酮可促进羟基红花黄色素A的透皮吸收，在实验浓度内，以2%氮酮的促渗效果最佳，可为黄硝巴布剂的制备提供参考。

氮酮；巴布剂；羟基红花黄色素A；裸鼠；透皮吸收

巴布剂系指药材提取物、药物与适宜的亲水性基质混匀后，涂布于裱背材料上制得的外用贴剂，具载药量大、药物释放性能好、剂量准确、使用方便等优点[1]。黄硝巴布剂处方来源于四川省医学科学院·四川省人民医院中医科临床验方，由红花、大黄等中药组成，具有活血化瘀、消肿止痛等功效[2，3]，笔者拟将其制成巴布剂，以便于患者用药。该制剂中红花为君药，其主要有效成分为羟基红花黄色素A[4](HSYA)，因此本文选择以HSYA为指标，采用裸鼠离体皮肤进行透皮吸收实验，考察该制剂中透皮促进剂氮酮(Azone)的含量对HSYA透皮性能的影响，为黄硝巴布剂的制备提供依据。

1 材料与方法

1.1 试药 黄硝巴布剂浸膏(四川省医学科学院四川省人民医院药学部提供)，HSYA对照品(购于中国食品药品检定研究院，批号：111637-200905)，Azone、丙二醇(成都科龙化化工试剂厂)为AR级，卡波姆981NF、聚丙烯酸钠7S(美国诺誉化工公司)，聚乙烯吡咯烷酮K30、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇(上海化学试剂公司)等均为药用规格。甲醇、乙腈为色谱级，水为纯净水，其它试剂为分析纯。

1.2 仪器 美国Waters 2690高效液相色谱系统，包括自动进样器，996二极管阵列检测器，Empower3色谱工作站(美国Waters公司)；沙多利斯BP211型电子天平；Genius3漩涡混合器(德国)；78-1型磁力搅拌器(杭州仪表厂)、CS501型超级恒温器(重庆试验设备厂)，320R型低温离心机(德国)。

1.3 供试品的制备 按配方量称取卡波姆981NF加适量的水分散过夜，另取配方量的聚乙烯吡咯烷酮K30、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇加适量的水浸泡，水浴50 ℃加热溶胀，混合以上两部分溶液，搅匀备用；再取配方量的聚丙烯酸钠7S、丙二醇以及Azone适量，搅匀后加入上述溶胀液中；然后依次配方量的黄硝巴布剂浸膏等成分，缓慢滴加适量三乙醇胺，控制pH6.0～7.0，保温50 ℃充分搅拌均匀，即可制成含红花生药质量为0.5∶1 g，Azone含量分别为 0%、1%、2%及5%的黄硝巴布剂供试品。

1.4 受试动物 Balb/c裸鼠，雌性，十周龄，体重(23±2)g，由成都中医药大学动物实验中心提供(川实动管质7号)。

1.5 方法

1.5.1 HSYA含量测定 ①色谱条件[5]：色谱柱：DiamonsilC18 (200x4.6 mm，5 μl)，柱温30 ℃；流动相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26：2：72)，流速1.0 ml/min；检测波长403 nm；进样量20 μl。②对照品溶液制备：精密称取HSYA对照品适量，加25%甲醇制成100 μg/ml的溶液，摇匀，即得HSYA储备液。③标准曲线的绘制：精密吸取HSYA储备液1.0 ml，加25%甲醇定溶至10 ml，摇匀，分别精密吸取该稀释液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5及2.0 ml，加25%甲醇定溶至10 ml，摇匀，制成含HSYA 0.1、0.2、0.5、1.0及2.0 μg/ml的系列标准溶液。分别取上述溶液20 μl进样，记录色谱图，以浓度C对其峰面积R进行线性回归，计算回归方程。

1.5.2 鼠皮制备 取裸鼠，于实验前12 h，脱颈处死，取背部皮肤，分离皮下组织及脂肪，选无破损皮肤浸于生理盐水中，置冰箱中低温保存，实验前用生理盐水洗净，滤纸吸干备用。

1.5.3 实验装置与方法 用改良的Franze扩散池[6，7]，将鼠皮固定在扩散池口，有效扩散面积为7.0 cm2，角质层面向供给室，真皮层面向接受室；称取供试品1.0 g，置供给室中，在鼠皮上涂匀，使之与皮肤密切接触，将上下两室固定，在接受室内注满生理盐水，驱除气泡；开启电磁搅拌器恒速搅拌，同时用外循环水恒温[(35±1)℃]，于1、2、4、6、8及12 h，从取样口用注射器抽取接受液5.0 ml，同时补充等体积生理盐水。

1.5.4 累积释放量等参数的计算 取接受液1.0 ml加入甲醇1.0 ml，经超声脱气后用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液20 μl进样，记录色谱峰面积，并代入标准曲线方程测定接受液中的浓度。精密量取接受室体积，按如下公式计算累积释放量等参数值[6，7]。累积释放量：Q=Cn+ (V0/V)ΣCPS；稳态流量：J=V/A·dQ/dt。 N=1 式中，Q为时间t的累积释放量；Cn为时间t的浓度值；V0为每次取样体积；CPS为时间t以前的浓度测量值；A为有效皮肤面积； dQ/dt为稳态时的斜率；J为稳态流量：指单位时间通过单位面积皮肤的药物量。

2 结果

2.1 回归方程 C=5.449×10-4·R-0.0189，r=0.9992。表明浓度在0.1～2.0 μg/ml，HSYA浓度与其峰面积线性关系良好(n=5)。保留时间t=11.0 min。

2.2 累积释放量与稳态流量 含不同浓度Azone的黄硝巴布剂，在不同时间HSYA的累积释放量见表1，稳态流量见表2。分别将HSYA的浓度C对t1/2进行回归处理，其相关系数均在0.98以上，说明HSYA从黄硝巴布剂基质向皮肤的渗透过程符合Higuchi方程。

表1 HSYA经离体鼠皮的累积释放量 (μg/ml，n=5)

表2 不同浓度Azone的黄硝巴布剂中HSYA的体外透皮吸收参数

3 讨论

外用贴膏剂在我国传统医学中被广泛使用，其不仅限于皮肤局部疾病的治疗，而且可以透过皮肤进入血液循环，达到内病外治的目的。内病外治法是是传统医学的精髓之一[8]，也是中药透皮制剂发展的理论基础。为了提高药物的透皮速率和透皮量在巴布剂等外敷贴剂的处分组成中常需加入一定量的透皮吸收促进剂[9]。Azone是一种新型经皮渗透促进剂，也是近年来国内外研究得较多的透皮吸收促进剂，其特点是它能使角质中类脂质生产不规则的排列同时能溶解皮肤的类脂来增加药物透皮吸收，对亲水性及亲油性药物均有促进作用[10]，其用量在1%～10%。

在药物透皮吸收研究中，实验用皮肤的性质及状态对药物的渗透影响较大。有文献报道[11，12]，药物透过裸鼠和乳猪皮肤的透皮吸收参数与透过人体皮肤的透皮吸收参数较为接近。从实验的可重复性来考虑，以使用裸鼠皮较好。对实验中HSYA测定方法，本研究参考中国药典2010年版一部中红花药材的HSYA测定方法制备HSYA含量测定的供试品溶液，并选用403 nm作为检查波长。实验表明，该方法准确性、精密性及稳定性均能满足实验的要求。

实验表明，Azone对黄硝巴布剂中HSYA存在明显的促进透皮扩散作用，但不同浓度的Azone对黄硝巴布剂中HSYA的透皮量存在明显差异，同时HSYA的累积释放量及稳态流量并不与Azone浓度成正相关，即浓度在1%～5%，当Azone的浓度达到一定值后其助渗作用不再随其浓度增加而增强，这与有关文献报道一致[13]。实验结果显示，含2%Azone的制剂于1 h开始显示助渗作用，稳态流量达1.0857，于12 h累积释放量较0%Azone增加了146.3%；故黄硝巴布剂中Azone的最佳使用量为2%。

HSYA的分子量为612.53，，为水溶性大分子化合物，不易透过皮肤。本研究结果显示，在有促进剂(2%氮酮)的条件下，其12 h内的累积透过率仅约1.7%。如何进一步提高其透皮扩散性能有待进一步研究。由于黄硝巴布剂是中药复方制剂，其疗效是多成分、多靶点整体作用的结果，在其处分组分优先过程中，若仅采用某单体处分为优化指标，不能真实的反映制剂的整体效应。笔者拟以其药理作用与有效成分含量相结合，进行多指标综合考察，优化黄硝巴布剂的处分组成。

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The effect of azone on percutaneous absorption of hydroxysafflof yellow A in huangxiao cataplasm

ZENG Ming-hui1，TAN Zheng-huai2，QIU Jian-ping1，HUANG Juan1

(1.Department of Pharmacy，Sichuan Qionglai Medical Center Hospital，Chengdu 611350，China；2.Sichuan Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 610041，China)

Objective To observe the effect of different concentrations of azone on transcutaneous permeation of hydroxysafflof yellow A in huangxiao cataplasm.Methods The improved Franze diffusion cell was used and different concentrations of azone (0%，1%，2% and 5%)were selected as penetration enhancer of huangxiao cataplasm.The accumulative permeation quantity (Q)was determined by HPLC and the steady percutaneous speed (J)were calculated.Results The release of hydroxysaffl of yellow A in vitro in huangxiao cataplasm was matched to Higuchi equation.When azone concentration was 0%，1%，2% and 5%，the Q values for 12 h was 0.533，0.913，1.313 and 0.953μg·mL/ml，and the J values was 0.4829，0.7657，1.0857 and 0.8114μg/cm2·h，respectively.Conclusion Azone can somewhat promote the percutaneous absorption of hydroxysafflof yellow A.Comparing to 0% azone，the promoting penetration effect of 2% azone is the best in the experimental concentration range.It may provide some information for preparation of huangxiao cataplasm.

Azone；Cataplasm；Hydroxysafflof yellow A；Nude mouse；Percutaneous absorption

四川省中医药管理局科研课题(编号：2010-G-093)

R917

A

1672-6170(2016)02-0066-03

2015-12-09；

2015-12-15)