SPARCL1在肝癌中的表达及其临床意义

欧阳晗月　乐　勇　张永法　郭荣平　石　明

510060 中山大学肿瘤防治中心



SPARCL1在肝癌中的表达及其临床意义

欧阳晗月乐勇张永法郭荣平石明

510060 中山大学肿瘤防治中心

【摘要】目的探讨SPARCL1表达与肝癌患者术后预后的关系。方法收集154例肝癌患者的术后石蜡切片标本、临床病理资料及随访资料，采用免疫组化染色方法对石蜡切片组织中SPARCL1进行检测。结果不同肝癌组织中SPARCL1的水平具有差异;SPARCL1表达下调与门脉癌栓、病理分化差、TNM分期晚和BCLC分期晚等恶性指标显著相关;SPARCL1表达下调的肝癌患者其中位生存时间显著缩短(40.6个月vs118.7个月，P=0.002)。结论SPARCL1在肝癌中表达下调，提示肝癌患者的预后不良。

【关键词】肝癌；SPARCL1；预后

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:701～703)

SPARCL1(SPARC-like 1)是1种分泌至细胞外基质的多功能糖蛋白,其与SPARC、SMOC-2等成员共同组成SPARC家族[1]。目前人类多种肿瘤组织中发现SPARCL1水平下调，并预示着肿瘤进展，其中前列腺癌、肠癌组织的SPARCL1下调提示患者的不良预后[2-4]。目前国内尚无SPARCL1在肝癌的研究报道。本研究旨在探讨肝癌组织中SPARCL1水平与临床病理资料相关性和其对肝癌患者预后的影响。

1材料与方法

1.1研究对象

收集2001年至2005年间本院肝胆科行手术治疗的原发性肝癌确诊病例154例的临床病理资料。入组标准：①首次就诊诊断为原发性肝癌并未接受任何治疗；②无腹腔积液及肝性脑病；③肝功能分级为Child-Pugh A级。临床分期采用第七版TNM和巴塞罗那BCLC分期系统，病理分级则采用Edmondson-Steiner分级法。随访资料均来自于本院随访科，截止到2014年11月1日止，死亡87例，所有入组患者中位总生存时间为 49.9个月。入组患者的详细资料见表1。

1.2主要试剂和仪器

免疫组化用SPARCL1兔抗人多克隆抗体一抗，购自美国abcam公司；免疫组化用鼠/兔通用二抗及DAB显色系统等均购自丹麦Dako公司。

1.3主要步骤及结果判定

免疫组化主要步骤：脱蜡和水化后，依次经3%过氧化氢10 min、柠檬酸缓冲液高压修复抗原10 min。滴加SPARCL1一抗4 ℃过夜，室温平衡至少1 h。滴加二抗后于37 ℃孵育30 min。PBS漂洗后经DAB显色约3 min。双蒸水漂洗4次后苏木精复染1 min，风干后封片。

表1　SPARCL1表达水平与肝癌临床病理资料的相关性/例

结果判定：为了避免人为偏倚，我们采用Vectra-Inform分析系统对免疫组化染色结果进行自动标准化评分。具体如下：完成染色后的免疫组化片首先用Nuance VIS-FL多谱成像系统进行拍照和储存，然后用InForm 2.0.1软件进行分析，经过预先训练的InForm 2.0.1软件不仅可以准确区分肿瘤组织、癌旁组织和空白等不同组织，而且可以区分细胞质和细胞核。选取肿瘤癌巢区域的细胞质为目的检测范围，应用InForm 2.0.1软件对目的区域每百万像素上的DAB染色进行强度计算并打分，求和，可得到每张免疫组化染色片上的DAB染色总分，根据软件计算结果，以中位数为分界点，将肝癌患者分为SPARCL1阴性表达和阳性表达两组。

1.4统计学处理

全部数据应用SPSS 19.0软件进行分析，χ2检验分析SPARCL1表达水平与肝癌患者临床病理资料的相关性；不同SPARCL1水平肝癌患者的生存曲线采用Kaplan-Meier方法绘制，Log-Rank检验用于比较生存曲线间的差异。P<0.05认为有统计学意义。

2结果

2.1SPARCL1在肝癌组织的表达情况

免疫组化的结果显示，肝癌组织中的SPARCL1信号均定位于细胞质，而且其在不同肝癌组织中的表达水平存在差异，根据上述结果判定方法及InForm软件评分可将患者分为阴性表达组和阳性表达组。

2.2SPARCL1表达水平与肝癌患者临床病理资料的关系

根据上述分组方法将患者分为阴性组和阳性组，用卡方检验方法分析肝癌组织标本SPARCL1的表达水平与患者各项临床病理指标的关系。结果显示SPARCL1低表达与门脉癌栓、病理分化差、BCLC分期晚、TNM分期晚等恶性指标存在显著负相关关系，而与性别、年龄及肝功能等指标无明显相关性。

2.3肝癌组织SPARCL1表达水平与肝癌预后的关系

生存分析显示，SPARCL1 阳性表达的肝癌患者其中位生存时间为118.7个月，而阴性表达患者仅为40.6个月，两者之间差异具有统计学意义(图1，P=0.002)。

图1　SPARCL1表达水平与肝癌患者生存曲线图

3讨论

肝细胞癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率呈逐年上升趋势[5]。近年来，尽管肝癌的诊疗手段已取得巨大进展，仍有超过一半的患者就诊时已处于肝癌晚期而无法接受根治性治疗，有机会行手术切除和肝移植治疗的初诊患者仅占30%左右。对于接受根治性手术治疗的肝癌患者，由于复发和肿瘤转移率高，其术后5年生存率也仅为50%左右[6-7]。因此深入探讨肝癌发病机制，寻找与肝癌患者预后密切相关的分子标志物，对临床工作中判断肝癌患者的预后和进一步完善肝癌的治疗将具有十分重要的意义。

SPARCL1是1个单拷贝基因,定位于人类染色体4q22-25区段，该区段已被发现在人类多种肿瘤中发生缺失，提示SPARCL1可能是该区段的重要抑癌基因之一[8-10]。Bendik等学者最早在非小细胞肺癌和肠癌肿瘤组织发现SPARCL1水平发生下调[11]；Hu等学者通过体外、体内实验发现SPARCL1能抑制肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭，并促进肠癌细胞发生间质-上皮转化,并进一步地通过多中心的研究显示SPARCL1与肠癌患者的良好预后有关[3]；Hurley等学者研究发现SPARCL1可通过与Ⅰ型胶原结合，阻断RHOC途径，从而抑制前列腺癌细胞的转移，其表达水平与前列腺癌患者预后相关[4]。也有少量文献报道SPARCL1可作为肿瘤相关的血管内皮细胞的一种标记物[12]。总之，SPARCL1在人类肿瘤中的作用尚有待进一步的研究。

我们通过免疫组化染色的方法发现在肝癌组织中，SPARCL1的信号均定位于胞质，而且，其水平在不同的肝癌组织中具有差异。根据InForm软件评分进行分组和分析发现，SPARCL1的下调与门脉癌栓、病理分级高、BCLC分期晚、TNM分期晚等恶性临床病理指标密切相关。进一步生存分析结果显示SPARCL1阴性的肝癌患者，其生存时间显著地低于SPARCL1阳性的患者(118.7个月vs 40.6个月;P=0.002)。本研究表明SPARCL1参与了肝癌的发生和发展，其表达水平发生下调与肝癌的侵袭性和恶性程度增加显著相关，提示其具有肿瘤抑制的功能。同时，SPARCL1也是提示肝癌患者预后的标志物。

参考文献

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[3]Hu H,Zhang H,Ge W,et al.Secreted protein acidic and rich in cysteines-like 1 suppresses aggressiveness and predicts better survival in colorectal cancers〔J〕.Clin Cancer Res,2012,18(19):5438-5448.

[4]Hurley PJ,Marchionni L,Simons BW,et al.Secreted protein,acidic and rich in cysteine-like 1(SPARCL1)is down regulated in aggressive prostate cancers and is prognostic for poor clinical outcome〔J〕.Proc Natl Acad Sci U S A,2012,109(37):14977-14982.

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[11]Bendik I,Schraml P,Ludwig CU.Characterization of MAS-

T9/Hevin,a SPARC-like protein,that is down-regulated in non-small cell lung cancer〔J〕.Cancer Res,1998,58(4):626-629.

[12]St Croix B,Rago C,Velculescu V,et al.Genes expressed in human tumor endothelium〔J〕.Science,2000,289(5482):1197-1202.

(编辑：吴小红)

Expression of SPARCL1 in Primary Hepatocellular Carcinoma and Its Clinical Significance

OUYANGHanyue,LEYong,ZHANGYongfa,etal.

CancerCenterofSunYat-senUniversity,Guangzhou,510060

【Abstract】ObjectiveTo explore the expression of SPARCL1 in resectable human hepatocellular carcinoma(HCC)and investigate the clinical role of SPARCL1 in HCC.Methods154 specimens of HCC patients after resection and their clinicopathological data were collected.The expression levels of SPARCL1 in tumor were detected by immunohistochemistry(IHC)method.ResultsThe expression level of SPARCL1 in different HCC tissues had difference,and negative expression level of SPARCL1 was closely correlated with portal vein tumor invasion,pathological differentiation,BCLC staging and TNM staging.The overall survival of patients with SPARCL1 negative expression was significantly shorter(40.6 months vs 118.7 months,P=0.002).ConclusionNegative expression of SPARCL1 predicts bad prognosis in HCC patients.

【Key words】SPARCL1;Hepatocellular Carcinoma;Prognosis

基金项目：国家自然科学基金项目(81272639)；高校基本科研基金项目(13ykzd24)；中山大学5010计划项目(2007043)

通讯作者：石明

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.05.002

中图分类号：R735.7

文献标识码：A

文章编号：1001-5930(2016)05-0701-03

(收稿日期2015-04-07修回日期 2016-03-15)