鹿花盘粉对四氯化碳诱导大鼠急性肝损伤的保护作用

2016-06-03黄彬彬南璐璐陈思瑶

中国老年学杂志 2016年8期

关键词：四氯化碳抗氧化

黄彬彬　南璐璐　赵　越　陈思瑶　杨　柳　徐　峰　刘　磊　周　涌

(吉林医药学院护理学院，吉林　吉林　132013)

鹿花盘粉对四氯化碳诱导大鼠急性肝损伤的保护作用

黄彬彬南璐璐赵越陈思瑶1杨柳徐峰刘磊1周涌2

(吉林医药学院护理学院，吉林吉林132013)

〔摘要〕目的研究鹿花盘粉对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠急性肝损伤的保护作用。方法Wistar大鼠60只，雌雄各半，随机分为空白对照组、CCl4模型组、阳性药物组(联苯双酯50 mg/kg)、鹿花盘粉低(0.75 g/kg)、中(1.50 g/kg)和高(3.00 g/kg)剂量组，每组10只，连续灌胃给药20 d。末次给药12 h后,各组大鼠腹腔注射60%CCl4花生油，雌性4.00 ml/kg、雄性3.50 ml/kg，空白对照组给予等量花生油。24 h后处死大鼠，取肝组织苏木素-伊红(HE)染色观察病理改变；取血液分光光度法测定血清谷氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性；取肝组织制备匀浆，测定其中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力及丙二醛(MDA)含量。结果与CCl4模型组比较，鹿花盘粉中剂量组大鼠血清ALT、AST活性明显降低，肝脏组织中MDA含量明显降低，GSH-PX活力明显升高(P<0.05)；鹿花盘粉高剂量组肝脏组织中SOD活力较CCl4模型组明显升高(P<0.05)。HE染色结果显示，鹿花盘粉中剂量组肝内病灶发生率下降，脂肪变性、坏死程度及炎性浸润均明显减轻。结论鹿花盘粉对CCl4诱导的大鼠急性肝损伤有一定的保护作用。

〔关键词〕鹿花盘粉;四氯化碳;急性肝损伤;抗氧化

鹿花盘别名角盘、鹿角盘、珍珠盘、花盘〔1〕，是鹿科动物据茸后残留的角根于第二年新茸萌发时脱落的部分，已知化学成分主要为蛋白质、多肽、氨基酸、脂类及钙、磷等矿物质。据《神农本草经》记载，鹿花盘具有强筋壮骨，温补肝肾，活血消肿，治乳痈初起，阴症疮疡等功效。现代医学对鹿花盘药理作用的研究主要集中在其抗氧化、治疗乳腺增生、抗疲劳、抑菌、免疫作用及抗癌等方面〔2～8〕，但有关鹿花盘肝脏保护方面的研究少见报道。本实验探讨鹿花盘粉对大鼠急性肝损伤的保护作用。

1材料与方法

1.1实验动物Wistar大鼠60只，雌雄各半，6～8周龄,体重(210±20)g，购自吉林大学实验动物中心，使用许可证号：SYXK(吉)2008/0010。

1.2仪器、材料和试剂722可见分光光度计(上海菁华科技仪器有限公司)；TD5A台式离心机(湖南凯达科学仪器有限公司)；DY89-Ⅱ型电动玻璃匀浆机(宁波新芝生物科技股份有限公司)、DM1000显微镜(德国莱卡)；DP71图像分析系统(日本奥林巴斯)。鹿花盘粉(购于吉林市龙潭山鹿场)；联苯双酯滴丸(浙江万邦药业股份有限公司)；四氯化碳(CCl4)(天津市永大化学试剂有限公司)；丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷氨酸氨基转移酶(ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

1.3动物分组及模型建立将实验动物随机分为空白对照组、CCl4模型组、阳性药物组和鹿花盘粉低、中、高剂量组，每组10只。阳性药物组按50 mg/kg联苯双酯灌胃给药，实验组分别按0.75 g/kg、1.50 g/kg和3.00 g/kg鹿花盘粉灌胃给药,空白对照组和CCl4模型组给予等量生理盐水，连续20 d。末次给药12 h后,除空白对照组外，各组大鼠分别腹腔注射60% CCl4花生油，雌性4.00 ml/kg、雄性3.50 ml/kg，空白对照组给予等量花生油。

1.4生化指标检测24 h后处死大鼠，腹主动脉取血，分离血清，按试剂盒说明检测血清中ALT 和AST 活力；取肝脏组织于生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，加预冷生理盐水于冰浴中制成10%匀浆，4℃离心(4 000 r/min，10 min)，分离上清，按试剂盒说明测定肝组织匀浆MDA含量和SOD、GSH-PX活力。

1.5肝脏病理切片制备取各组大鼠肝右叶相同位置肝组织，用预冷生理盐水漂洗，滤纸拭干，4%福尔马林固定，脱水透明，石蜡包埋，切片，贴片，苏木素-伊红(HE)染色并封片，光镜下(200倍)观察各组大鼠肝脏组织病理学变化并拍照。

1.6统计学分析采用SPSS17.0软件行单因素方差分析、最小显著差数法(LSD)检测。

2结果

2.1鹿花盘粉对CCl4所致急性肝损伤大鼠血清ALT、AST 的影响CCl4模型组与空白对照组比较，血清ALT和AST活力显著升高(P<0.01)，说明CCl4致大鼠急性肝损伤造模成功。与CCl4模型组比较，阳性药物组和鹿花盘粉中剂量组血清ALT和AST活力均明显降低(P<0.05，P<0.01)。见表1。

2.2鹿花盘粉对CCl4致急性肝损伤大鼠肝脏MDA、SOD和GSH-PX的影响CCl4模型组与空白对照组比较，大鼠肝脏组织SOD和GSH-PX活力明显下降，MDA含量明显升高(P<0.01)，说明CCl4致大鼠急性肝损伤造模成功。阳性药物组和鹿花盘粉中剂量组肝脏组织中MDA含量与CCl4模型组比较明显降低(P<0.05)；阳性药物组和鹿花盘粉高剂量组肝脏组织中SOD活力与CCl4模型组比较明显升高(P<0.05)；阳性药物组和鹿花盘粉中剂量组大鼠肝脏组织中GSH-PX活力与CCl4模型组比较显著升高(P<0.01)。见表2。

表1各组血清ALT、AST水平比较(x±s,n=10,U/L)

组别ALTAST空白对照组22.1±5.361.8±7.5CCl4模型组118.3±28.52)237.0±20.82)阳性药物组75.1±14.62)150.0±11.93)鹿花盘粉低剂量组93.8±15.5228.4±23.8鹿花盘粉中剂量组91.5±11.42)167.3±13.33)鹿花盘粉高剂量组110.6±29.8196.9±18.3

与空白对照组比较：1)P<0.01；与CCl4模型组比较：2)P<0.05，3)P<0.01，下表同

2.3鹿花盘粉对CCl4致急性肝损伤大鼠肝脏病理改变的影响空白对照组大鼠肝小叶以中央静脉为中心呈放射状排列,肝细胞索排列整齐,肝细胞呈多边形,核大而圆,细胞分界清楚；CCl4模型组大鼠肝组织结构被严重破坏,肝实质少量的纤维组织增生,汇管区炎性细胞浸润,肝细胞胞发生了脂肪变性，周边区可见坏死细胞，肝静脉淤血；阳性药物组大鼠肝组织切片中肝细胞脂肪变性、炎细胞浸润均较CCl4模型组明显减轻，且肝组织中无明显纤维增生，提示联苯双酯对CCL4性肝损害有显著的保护作用；鹿花盘粉中剂量组、情况较CCl4模型组有所改善，肝内病灶发生率下降，脂肪变性、坏死程度及炎性浸润均明显减轻,仅见少量肝细胞变性和点状坏死，肝小叶轮廓较清晰。鹿花盘粉末低剂量组和高剂量组情况较中剂量组效果不理想。综上所述,鹿花盘粉中剂量组的效果优于低剂量组和高剂量组,但不如阳性药物组。见图1。

表2鹿花盘粉对CCl4致急性肝损伤大鼠肝脏MDA、SOD和GSH-PX的影响(x±s,n=10)

组别MDA(nmol/mgprot)SOD(U/mgprot)GSH-PX(U/mgprot)空白对照组1.14±0.19108.42±15.96283.96±30.86CCl4模型组1.82±0.261)80.36±8.831)151.93±23.91)阳性药物组1.05±0.152)98.72±19.772)226.76±14.893)鹿花盘粉低剂量组1.71±0.2188.03±12.56186.46±16.14鹿花盘粉中剂量组1.13±0.182)83.36±14.06231.65±19.933)鹿花盘粉高剂量组1.42±0.1998.03±11.762)198.56±18.76

图1　大鼠肝脏组织病理变化(HE，×200)

3讨论

各种有害因素引起的肝损伤都会导致肝细胞变性、坏死或凋亡，而这又引发后续的炎症和纤维化病变，表现为脂肪肝、肝纤维化、肝坏死、胆汁淤积、肝硬化及肝癌等严重威胁人类健康的病变〔9，10〕，因此目前对肝损伤的防治成为一个全球性的严峻课题。CCl4诱导的急性肝损伤模型是最经典的肝损伤模型，被广泛应用于肝损伤及再生的机制研究〔11，12〕。有研究发现，CCl4在体内代谢生成CCl3·自由基,后者可与氧发生反应生成CCl3OO·，此种自由基在体内可通过两种方式损伤细胞：一种为直接途径,与膜蛋白或脂质结合,尤其是内质网系统,造成烷化反应以及酶的失活；另一种为间接途径,通过与细胞膜及不饱和脂肪酸的相互作用从而增强脂质过氧化反应〔13〕。MDA是体内自由基攻击脂质产生脂质过氧化物的代谢终产物〔14〕,是反映脂质过氧化的敏感指标，其含量的高低还可间接地反映肝损伤的程度〔15〕，脂质过氧化物增多可使MDA含量升高。脂质过氧化反应还可导致细胞膜完整性损伤，使肝细胞质内ALT、AST释放入血，血清AST、ALT活性升高〔16〕。另一方面SOD和GSH-Px活性反映机体清除活性氧自由基的能力〔17，18〕。SOD可清除自由基，起到保护细胞膜结构与功能的作用。GSH-PX可阻断自由基对机体的进一步损伤〔19〕。当机体产生过多自由基时，引起抗氧化体系的耗竭及氧化物和抗氧化物的动态失衡，使SOD和GSH-PX水平下降〔20〕。本实验结果显示使用鹿花盘粉对实验动物进行干预后，可使急性肝损伤大鼠肝内病灶发生率降低，脂肪变性、坏死程度及炎性浸润均明显减轻，提示鹿花盘粉对肝脏具有一定的保护作用，其保护机制可能与其抗氧化作用有关。且有研究表明氨基酸及某些微量元素对肝脏有保护作用〔21〕，因鹿花盘中含有丰富的蛋白质、氨基酸和少量脂类,并含大量的钙、磷及锌、铁、锰、锶等微量元素〔1，22〕，故猜测鹿花盘粉中起肝保护作用的成分可能是蛋白质和氨基酸，某些微量元素也可能对肝脏起到保护作用，其具体机制有待进一步研究。

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〔2014-11-04修回〕

(编辑安冉冉/曹梦园)

〔中图分类号〕R285.5

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)08-1817-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.08.012

通讯作者：周涌(1963-)，男，教授，主要从事营养与慢性病研究。