帚梗柱孢霉属真菌Cyllndrocladium sp.YMF1.03662的化学成分研究

刘　瑞,周　亮,李国红

(云南大学 云南省生物资源保护与利用重点实验室，云南 昆明 650091)



帚梗柱孢霉属真菌Cyllndrocladiumsp.YMF1.03662的化学成分研究

刘瑞,周亮,李国红

(云南大学 云南省生物资源保护与利用重点实验室，云南 昆明 650091)

摘要：通过对帚梗柱孢霉属真菌Cyllndrocladium sp. YMF1.03662发酵液的乙酸乙酯提取物及菌丝体的甲醇提取物进行化学成分研究，分离得到2个化合物，经波谱分析，鉴定为citrantifidiol和1-monoacylglycerol。

关键词：帚梗柱孢霉属；发酵液；菌丝体；化学成分

帚梗柱孢霉属(Cyllndrocladium)是半知菌类、丛梗孢目、丛梗孢科、双孢亚科真菌[1]。目前，该属报道了22个种和1个变种。据报道[2-3]，帚梗柱孢霉属真菌能侵染观赏植物鸡冠花，使其患上严重的褐腐病；对鹤望兰的叶片也有侵染性，使其患上叶斑病。目前还未见关于其次生代谢产物的研究报道。为了对帚梗柱孢霉属真菌的化学成分进行比较全面的了解，作者在此对该属真菌Cyllndrocladiumsp.YMF1.03662的化学成分进行了研究，分离得到2个化合物，并对其结构进行了鉴定。

1实验

1.1菌株与培养基

菌株Cyllndrocladiumsp.YMF1.03662，保存于西南野生种质资源库微生物库。

马铃薯葡萄糖培养基(PDA)：马铃薯 200g，葡萄糖 20g，琼脂 15g，蒸馏水1 000mL，pH值自然。

马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)：PDA培养基中不添加琼脂。

1.2材料、试剂与仪器

SephadexLH-20凝胶，Pharmacia公司；硅胶(200～300目)、薄层层析用硅胶G板，青岛海洋化工厂。

所用有机溶剂均为重蒸工业纯试剂。

DRX-500型核磁共振仪，Bruker公司；LCQ-Advantage型质谱仪，Finnigan公司。

1.3菌株的扩大发酵培养

挑取Cyllndrocladiumsp.YMF1.03662菌株的菌丝块于PDA培养基上，于28 ℃恒温培养10d；将培养在平板上的菌丝和培养基一起接种于装有100mLPDB培养基的250mL三角瓶中，于28 ℃、180r·min-1恒温培养10d；再按5%的接种量接种于PDB培养基上，共发酵20L，于28 ℃、180r·min-1摇床培养10d。

1.4菌株代谢产物的初步分离

将上述培养物用8层纱布过滤，分开菌丝体和发酵液。

发酵液浓缩至1L，用乙酸乙酯反复萃取，浓缩得乙酸乙酯提取物0.376g。经甲醇凝胶粗分，得到A1～A7共7个组分；组分A2(112mg)经拌样，用正相硅胶柱纯化，石油醚装柱，石油醚-丙酮(20∶1～2∶1)梯度洗脱，得到5个组分(A2-1～A2-5)；组分A2-3(23mg)用丙酮凝胶纯化，得到化合物Ⅰ(6mg)。

菌丝体用甲醇浸泡多次，得甲醇提取物8.891g。经甲醇凝胶粗分，得到B1～B6共6个组分；组分B2(214mg)用丙酮凝胶纯化，得到3个组分(B2-1～B2-3)；B2-2(153mg)用丙酮凝胶纯化，得到3个组分(B2-2-1～B2-2-3)；组分B2-2-2(67mg)用正相硅胶柱纯化，石油醚-丙酮(20∶1)洗脱，得到3个组分(B2-2-2-1～B2-2-2-3)；组分B2-2-2-2(29mg)继续用正相硅胶柱纯化，石油醚-丙酮(40∶1)洗脱，得到化合物Ⅱ(4mg)。

2结果与讨论

化合物Ⅰ为无色油状。1HNMR(500 MHz,CDCl3)，δ：5.16(1H,brs),2.10(2H,m),1.88(2H,m),1.71(3H,s),1.65(3H,s),1.28(3H,s),1.24(3H,s),1.07(3H,d,J=6.8 Hz)；13CNMR(125 MHz,CDCl3)，δ：132.2(s),124.9(d),81.7(s),75.3(s),54.7(d),44.6(t),40.8(t),26.5(q),26.1(q),25.5(q),24.7(t),23.1(t),18.1(q),15.9(q)；ESI-MS：481[2M+1]+。与文献报道[4]相比较，确定化合物Ⅰ为citrantifidiol(图1)。

图1　从帚梗柱孢霉属真菌Cyllndrocladium sp.

化合物Ⅱ为无色固体。1HNMR(500 MHz,CDCl3)，δ：5.36(2H,m),4.22(2H,m),3.94(1H,m),3.71(1H,m),3.62(1H,m),2.36(2H,m),2.03(2H,m),1.64(2H,m),1.27～1.31(22H,m),0.90(3H,d,J=6.8 Hz)；13CNMR(125 MHz,CDCl3)，δ：174.5(s),130.5(d),130.1(d),70.7(d),65.6(t),63.8(t),34.6(t),32.3(t),30.2～29.5(t),27.6(t),25.2(t),23.0(t),14.5(q)；ESI-MS：379[M+Na]+。与文献报道[5]相比较，确定化合物Ⅱ为1-monoacylglycerol[5](图2)。

图2　从帚梗柱孢霉属真菌Cyllndrocladium sp.

3结论

从菌株帚梗柱孢霉属真菌Cyllndrocladiumsp. YMF1.03662中分离得到2个化合物，分别鉴定为citrantifidiol和1-monoacylglycerol。

参考文献：

[1]魏景超.真菌鉴定手册[M].上海：上海科学技术出版社，1979：521.

[2]刘云龙，何永宏，魏正，等.鸡冠花褐腐病病原鉴定[J].植物检疫，2001，15(2):79-80.

[3]谢昌平，洪玉凤.鹤望兰叶斑病菌的鉴定及生物学特性[J].热带作物学报，2005，26(3):91-95.

[4]EVIDENTE A,RICCIARDIELLO G,ANDOLFI A,et al.Citrantifidiene and citrantifidiol:Bioactive metabolites produced byTrichodermacitrinoviridewith potential antifeedant activity toward aphids[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,2008,56(10):3569-3573.

[5]COLEMAN B E,CWYNAR V,HART D J,et al.Modular approach to the synthesis of unstaurated 1-monoacyl glycerols[J].Synlett,2004,40(8):1339-1342.

Chemical Constituents ofCyllndrocladiumsp. YMF1.03662

LIU Rui,ZHOU Liang,LI Guo-hong

(KeyLaboratoryforConservationandUtilizationofBio-Resource,YunnanUniversity,Kunming650091,China)

Abstract：The chemical constituents of Cyllndrocladium sp. YMF1.03662 were studied.Two compounds were separated from ethyl acetate extract of fermentation broth and methanol extract of mycelia,which were identified as citrantifidiolere and 1-monoacylglycerol by spectral analysis.

Keywords：Cyllndrocladium sp.;fermentation broth;mycelia;chemical constituent

中图分类号：O 621.2R 284.1

文献标识码：A

文章编号：1672-5425(2016)04-0026-02

doi：10.3969/j.issn.1672-5425.2016.04.007

作者简介：刘瑞(1991-)，女，河南周口人，硕士研究生，研究方向：微生物次生代谢产物，E-mail:373664517@qq.com；通讯作者：李国红，副研究员，E-mail:ligh@ynu.edu.cn。

收稿日期：2016-01-06

基金项目：国家973计划资助项目(2013CB127505)，云南省应用基础研究计划项目(2013FB003)