495例血小板相关免疫球蛋白检测结果的临床资料分析

甘慧泉,欧阳维富,刘惠兰,林　婷,罗燕飞,冼璐桦,周茂华

(广东省人民医院、广东省医学科学院 病理医学部 检验科，广东 广州510000)



495例血小板相关免疫球蛋白检测结果的临床资料分析

甘慧泉,欧阳维富,刘惠兰,林婷,罗燕飞,冼璐桦,周茂华*

(广东省人民医院、广东省医学科学院 病理医学部 检验科，广东 广州510000)

血小板自身抗体可导致血小板破坏增加或生成障碍，导致患者发生出血性疾病。血小板自身抗体可分为特异性糖蛋白自身抗体、药物相关自身抗体、抗同种血小板抗体和血小板相关免疫球蛋白(platelet associated immunoglobulin，PAIg)等。PAIg包括PAIgG、PAIgM、PAIgA[1]。流式细胞术(Flow Cytometry，FCM)检测PAIg具有快速、灵敏、 重复性好的特点。本文就495例用FCM检测的PAIg结果的相关资料进行分析。

1对象与方法

1.1对象2012年1月至2013年9月来广东省人民医院就诊，行PAIg检测的门诊及住院病人495例，其中男245例，女250例。年龄0-85岁，平均年龄37±29岁。

1.2仪器与试剂

1.2.1主要仪器FACScalibur 流式细胞仪(购自美国BD公司)。

1.2.2主要试剂PE-CD41(购自美国BECKMAN COULTER公司)；Goat F(ab，)2 IgG-FITC、 Goat F(ab，)2 Anti-human IgG-FITC、 Goat F(ab，)2 Anti-human IgM-FITC鼠IgG、Goat F(ab，)2 Anti-human IgA-FITC(均为美国Southern Biotech 公司产品)。

1.3方法

1.3.1样本制备留取清晨空腹静脉血3 mL于乙二胺四乙酸( EDTA-K2 )抗凝管中,用150 g 离心力离心5 min,分离富含血小板血浆(PRP),取PRP 50-200 μL(根据血小板多少取适量，调整细胞浓度为106/mL)，置于管A中，加入2 mL 含小牛血清磷酸盐缓冲液(PBS-BSA)2 100 g离心5 min，洗3次。去上清液后，加 400 μL PBS-BSA重悬。在管 A 中加入20 μL CD41-PE，充分混匀。另取4支试管，分别加入Goat F(ab，)2 IgG-FITC、Goat F(ab，)2 Anti-human IgG-FITC、Goat F(ab，)2 Anti-human IgM-FITC鼠IgG、Goat F(ab，)2 Anti-human IgA-FITC 4 种单抗试剂 10 μL，再在各试管中分别加入管A中的血小板悬液 100 μL，室温避光孵育15 min。再加入 PBS-BSA 2 mL，2100g 离心5 min洗涤1次，去上清后加0.5 mL固定液(4%甲醛溶液)。

1.3.2流式分析根据 CD41/SSC 设置血小板门，以同型对照管调整电压及荧光补偿，检测标本 PAIgG、PAIgM、PAIgA 阳性百分率。PAIgG>2.0%，PAIgA>2.0%，PAIgM>3.5%，该项结果即判为阳性。

1.4统计与分析采用SPSS 16.0 软件进行数据处理，计数资料用率表示，率的比较采用χ2检验，以P<0.05 表示有统计学差异。

2结果

PAIg检测，PAIgG、PAIgM、PAIgA三项中只要有一项结果阳性，则计PAIg结果为阳性。

2.1性别495例PAIg检测，男女检测结果见表1。Pearson Chi-Square检验，χ2=0.41，P=0.52。PAIg阳性率在性别上没有差异。

2.2年龄年龄分组检测结果见表2。Pearson Chi-Square检验，χ2=6.99，P=0.07。PAIg阳性率在不同年龄分组之间没有差异。

表1495例患者PAIg检测结果

性别PAIg阳性PAIg阴性例数男101144245女96154250共计197298495

表2495例不同年龄组患者PAIg检测结果

年龄(岁)PAIg阳性PAIg阴性例数0-16(少年组)688014817-30(青年组)28639131-59(中年组)536912260岁-85(老年组)4886134共计197298495

2.3不同抗体197例PAIg阳性标本中，有178例次PAIgM阳性(90.36%)、89例次PAIgG阳性(45.18%)，19例次PAIgA阳性(9.64%)。PAIgM的检出率明显高于另外两种抗体。

2.4其他相关资料495例患者检测PAIg的同时，还有部分病例进行了血清降钙素原(PCT)、直接/间接抗人球蛋白(coombs-D/coombs-I)和幽门螺旋杆菌(HP)的检测，结果整理如下。2.4.1PCT183例患者同时检测PAIg和PCT，结果见表3。PCT>0.05 ng/ml为阳性界值。Pearson Chi-Square检验，χ2=11.38，P=0.00。PAIg阳性率在不同的PCT结果之间具有统计学差异。

表3183例同时检测PAIg和PCT患者的结果

PCT>0.05ng/mlPCT≤0.05ng/mlPAIg阳性5925PAIg阴性4554共计10479

2.4.2Coombs-D 198例患者同时检测PAIg和coombs-D，结果见表4。Pearson Chi-Square检验，χ2=8.41，P=0.00。PAIg阳性率在不同的coombs-D结果之间具有统计学差异。

表4198例同时检测PAIg和coombs-D患者的结果

coombs-D阳性coombs-D阴性PAIg阳性4145PAIg阴性3181共计72126

2.4.3Coombs-I 196例患者同时检测PAIg和coombs-I，结果见表5。Pearson Chi-Square检验，χ2=0.11，P=0.74。PAIg阳性率在不同的coombs-I结果之间没有统计学差异。

表5196例同时检测PAIg和coombs-I患者的结果

coombs-I阳性coombs-I阴性PAIg阳性482PAIg阴性3107共计7189

2.4.4HP47例患者同时检测PAIg和HP，结果见表6。Pearson Chi-Square检验，χ2=1.40，P=0.24。PAIg阳性率在不同的 HP结果之间没有统计学差异。

表647例同时检测PAIg和HP患者的结果

HP+HP-PAIg阳性1011PAIg阴性818共计1829

3讨论

PAIg可能来源于机体免疫系统针对血小板骨架蛋白或膜糖蛋白产生的自身抗体而结合在血小板膜上，也可能是血清中抗体分子或抗原抗体复合物在血小板表面的粘附或覆盖。此外，血小板激活时，α颗粒可释放IgG分子至血小板表面。因此PAIg测定的特异性并不高，但具有较高的灵敏度[2]。

本文就FCM检测PAIg的结果，结合相关的其他临床资料分析显示，年龄、性别与PAIg阳性结果没有相关性。

PCT是近年研究较多的用于监测感染的指标，尤其对诊断细菌性感染有着较高的特异性及敏感性。正常人PCT在血清中含量<0.05 ng/ml(荧光定量法)，而当机体受到细菌感染后PCT含量明显升高，在感染得到控制后，PCT可迅速降至正常。而在病毒感染，自身免疫性疾病及肿瘤等疾病时PCT水平可轻微升高或维持正常[3，4]。本文资料统计结果显示，PCT阳性与否和PAIg阳性结果之间具有统计学差异。即细菌感染患者更易PAIg阳性。推测其机制可能是：某些菌体成分与血小板抗原成分交叉，导致机体产生抗血小板抗体；细菌产生的毒素直接或间接激活了免疫系统，打破了机体的免疫平衡状态。细菌感染诱导血小板表面某些抗原改变，被机体免疫系统识别，产生相关抗体等。这也提示，在诊断患者血小板减少的病因时，应该排除细菌感染的影响。

Coombs-I是检查血清中游离的不完全抗体。本室采用的FCM法检测PAIg时，中间有3次洗涤PRP的步骤，即使标本coombs-I阳性，血浆中游离的不完全抗体也被洗掉了。所以理论上Coombs-I结果不会影响PAIg，本文资料统计的结果也印证了这一点。Coombs-D是检查被检红细胞上有无不完全抗体。其结果阳性是由于患者自身红细胞被致敏或有异常蛋白附着所致。本文统计资料结果显示，coombs-D阳性结果与PAIg结果之间有相关性，说明致敏红细胞的不完全抗体或异常蛋白也可能会粘附或覆盖在血小板表面。红细胞致敏的患者主要见于：自身免疫性贫血；输血史；药物诱发的免疫性溶血性贫血；自身免疫性疾病等。提示临床，治疗coombs-D阳性患者血小板减少时，治本还是关键。

特发性血小板减少性紫癜(ITP)主要是由于抗血小板自身抗体引起的血小板减少，并导致出血倾向的一种自身免疫性疾病。Gasbarrini等[5]于1998年提出，幽门螺杆菌(HP)感染与ITP的发病有关。国内饶燕飞等[6]，李霞等[7]的报道也验证了这一点。目前，国内外多数研究表明，根除HP后部分ITP患者的血小板计数明显增多，并伴随血清血小板相关抗体水平的下降，提示HP可能是部分ITP的致病因子之一。但也有报道认为HP感染与ITP发病的关系仍有争论[8，9]。本文结果显示，HP感染与否与PAIg之间没有关联。考虑原因有两点：①统计例数少，本文仅47例患者做HP检测；②感染HP的毒力亚株不同。临床HP菌株分为高毒力株(表达CagA蛋白)和低毒力株(不表达CagA蛋白)。Takahashi等[10]认为，HP的CagA蛋白具有和人类血小板抗原相同或相似的抗原表位，感染HP后机体免疫应答通过分子模拟产生抗血小板自身抗体从而引发ITP。提示由于HP菌株的毒力亚株不同结果相异的可能性。

参考文献：

[1]刘艳荣.实用流式细胞术[M].1版，北京：北京大学医学出版社，2013:321.

[2]刘艳荣.实用流式细胞术[M].1版，北京：北京大学医学出版社，2013:323.

[3]杨玉敏，王文统，章华萍，等.综合干预措施对重症监护病房中心静脉导管相关感染的影响[J].中华临床感染病杂志，2012，5(3)：177.

[4]陈鸿恩，黄丽辉.血清降钙素原测定在感染性疾病中的诊断价值[J].检验医学与临床，2008,5(1)：20.

[5]Gasbarrini A，Franceschi F，Tartaglione R，et al.Regreession of autoimmune thrombocytopenia after eradication of helicobacter pylori[J].Lancet，1998,352(9):878.

[6]饶燕飞，严志民，杨桂珍，等．幽门螺杆菌感染在特发性血小板减少性紫癜中的临床意义[J].重庆医学，2012，41(2)：113.

[7]李霞，任增苏．ITP患者血清幽门螺杆菌及人细小病毒B19抗体检测的临床分析[J].山东医学高等专科学校学报，2011,33(5):343.

[8]Jarque I，Andreu R.Absence of Platelet response after eradication Helicobacter pylori in patients with chronic idiopathic thrombocytopenic purpura[J].Br J Haematol，2001，115(4):1002.

[9]Michel M，Khellaf M，Desforges L，et al.Autoimmune thrombocytopenic purpura and Helicobacter pylori infection[J].Arch Intern Med，2002，162(9):1033.

[10]Takahashi T，Yujiri T，Shinohara K，et al.Molecular mimicry by Helicobacter pylori CagA protein may be involved in the pathogenesis of H.pylori associated chronic idiopathic thrombocytopenic purpura[J].Br J Haematol，2004，124(1)：91.

(收稿日期：2014-12-10)

作者简介：甘慧泉(1978-)，女，湖北黄石人，主管技师，硕士，主要从事流式细胞术在临床血液病方面的诊断工作。

*通讯作者

文章编号：1007-4287(2016)04-0662-03