不同激素配比对两个蓝莓品种组织培养的影响

陈原国，马鹏，王语，高月

(枣庄学院生命科学学院，山东枣庄　277100)



不同激素配比对两个蓝莓品种组织培养的影响

陈原国，马鹏，王语，高月

(枣庄学院生命科学学院，山东枣庄277100)

[摘要]以两个蓝莓品种的茎段外植体为材料，探索不同的激素配比对粉蓝和奥尼尔外植体伸长以及继代培养的影响.结果显示：粉蓝外植体在WPM+IBA0.75mg/L+6-BA3.00 mg/L +ZT2.00 mg/L条件下生长较好；粉蓝继代培养在WPM+IBA1.50 mg/L +6-BA0.50 mg/L +ZT3.00 mg/L条件下可形成较多丛生芽；粉蓝生根培养在WPM+IBA1.00 mg/L条件下生根率高，生根质量好.奥尼尔外植体在WPM+IBA1.00 mg/L +ZT2.00 mg/L 条件下诱导出芽率较高；奥尼尔继代培养在IBA1.50 mg/L +ZT2.00 mg/L条件下生长较好，可形成较多愈伤组织，奥尼尔生根培养在WPM+IBA1.50 mg/L条件下生根率高，生根质量好.

[关键词]蓝莓；组织培养；激素配比

0引言

蓝莓(Vaccinium spp.)又名越橘，属于杜鹃花科(Ericaceae)越桔属(Vaccinium)原产北美，多年生落叶或常绿果树，分为高丛蓝莓、矮丛蓝莓、半高丛蓝莓和兔眼蓝莓.果实深蓝色，甜酸适度，富含氨基酸，抗氧化能力列所有果品之首，堪称“世界水果之王”被国际粮农组织列为五大健康食品之一[1].

近年来，人们对于蓝莓的需求量增大，常规繁殖方法用播种、嫁接和扦插法，但播种繁殖发芽率低和嫁接繁殖成活率低，扦插繁殖的繁殖系数小，周期长，均难以满足市场对种苗的需求[2].探讨优良的蓝莓快速繁殖方式成为了必要.组织培养作为一个高效蓝莓繁殖方式得到了人们的重视，而不同品种蓝莓的组织培养条件差别较大，目前对于优良蓝莓品种粉蓝和奥尼尔的组培方法仍没有得到有效解决.为此，本文开展对蓝莓组织培养的初步试验研究.

1材料与方法

1.1材料来源

选取3～4年生蓝莓的半木质化嫩茎作为试验材料，由枣庄市薛城区沙沟镇界沟蓝莓种植合作社提供粉蓝蓝莓和杭州佑国生物科技有限公司提供奥尼尔蓝莓.

1.2外植体处理

将取自上述两个蓝莓品种材料的幼嫩茎段，用0.5%洗衣粉溶液清洗两次后，流水冲洗6～8次，除去泡沫，再流水冲洗30分钟后放入100mL的烧杯中，然后置超净工作台进行外植体表面消毒.75%酒精灭菌15～30秒后0.1%升汞溶液浸泡7～8分钟最后用无菌水冲洗4～6次(每次一分钟左右)，最后剪成1.5cm长带腋芽的茎段[3].

1.3诱导分化培养

粉蓝外植体诱导培养基采用1/2MS、MS和WPM为基本培养基，添加IBA(0.75 mg/L和1.50 mg/L)、6-BA(1.00 mg/L和3.00 mg/L)和2.00 mg/L ZT.奥尼尔外植体诱导培养基采用WPM为基本培养基，添加IBA(0.50 mg/L、1.00 mg/L和1.50 mg/L、2.00 mg/L)和2.00 mg/L ZT.蔗糖2%，琼脂0.7%，pH 5.8，在115MPa气压下灭菌20min.

1.4继代增殖培养

粉蓝继代培养基采用WPM为基本培养基，添加IBA(1.50mg/L、2.50 mg/L和3.50 mg/L)、6-BA(0.50 mg/L、1.00mg/L和1.50 mg/L)和ZT(1.00mg/L、2.00 mg/L和3.00 mg/L).奥尼尔继代培养基采用WPM为基本培养基，添加IBA(0.05mg/L、0.10mg/L、0.20 mg/L和0.50mg/L)和2.00 mg/L ZT.

1.5培养条件

培养温度23～25℃，光强2000lx，每天光照16h[4].

2结果与分析

2.1诱导分化培养

2.1.1不同激素配比对粉蓝蓝莓外植体生长的影响

由表1可得出，对于粉蓝蓝莓外植体的培养，在IBA 0.75mg/L+6-BA 3.00mg/L+ZT 2.00mg/L条件下可得到较理想的效果，茎呈绿色且粗壮，叶色为正常的淡绿色.该激素配比较其他配比更适宜粉蓝蓝莓外植体的诱导培养.(见图1)

图1　IBA 0.75mg/L+6-BA 3.00mg/L+ZT 2.00mg/L蓝莓诱导培养

处理条件平均长度(cm)茎质量11.84淡绿色,较粗壮22.30绿色,粗壮31.83绿色,较细42.15淡绿色,粗壮

注：1.IBA 0.75mg/L+6-BA 1.00mg/L+ZT 2.00mg/L.

2.IBA 0.75mg/L+6-BA 3.00mg/L+ZT 2.00mg/L.

3.IBA 1.50mg/L+6-BA 1.00mg/L+ZT 2.00mg/L.

4.IBA 1.50mg/L+6-BA 3.00mg/L+ZT 2.00mg/L.

2.1.3 不同激素配比对奥尼尔蓝莓外植体生长的影响

由图2可以得出，在奥尼尔蓝莓外植体的培养中激素配比IBA1.50 mg/L +ZT2.00 mg/L显著优于其他配比的激素.培养30天后诱导的腋芽茎杆粗壮，叶片淡绿色且大小正常，未出现发红现象.

图2　激素配比对奥尼尔蓝莓外植体生长的影响

2.2继代增殖培养

2.2.1不同激素配比对粉蓝继代培养增殖生长的影响

试验结果表明，当采用IBA1.50 mg/L +6-BA0.50 mg/L +ZT3.00 mg/L的激素配比时，30天可生长4cm以上且诱导出较多丛生芽(见图3).采用IBA3.50 mg/L +6-BA1.00 mg/L +ZT2.00 mg/L能诱导产生较多的愈伤组织且无褐变现象生长状态良好(见图4).

图3　IBA1.50 mg/L +6-BA0.50 mg/L +ZT3.00 mg/L蓝莓诱导培养

图4　IBA3.50 mg/L +6-BA1.00 mg/L +ZT2.00 mg/L蓝莓诱导培养

2.2.2不同激素配比对奥尼尔继代培养增殖生长的影响

表2　激素配比对奥尼尔继代培养增殖生长的影响

由表2可以得出在奥尼尔蓝莓的继代培养中采用激素配比IBA0.20 mg/L +ZT2.00 mg/L进行培养时能有效促进枝条的生长，并且生长状态良好，叶色嫩绿叶片大小正常.培养30天后枝条底部能诱导形成愈伤组织.

2.3瓶内生根培养

2.3.1不同浓度IBA对粉蓝蓝莓苗生根的影响

表3　培养基中不同浓度IBA对粉蓝蓝莓苗生根情况

由表3可以得出在粉蓝蓝莓的生根培养中采用激素配比IBA1.0mg/L能诱导分化出更多的根，60天后观察结果显示生长出的根粗壮，长度较长，分支多.并且根系的生长并不影响植株叶片及枝条的正常生长，叶色嫩绿叶片，大小正常.

2.3.2不同浓度IBA对奥尼尔蓝莓苗生根的影响

表4　培养基中不同浓度IBA对奥尼尔蓝莓苗生根情况

由表4可以得出在奥尼尔蓝莓的生根培养中采用激素配比IBA1.5mg/L能诱导分化出更多的根，根为白色且柔嫩，茎杆及叶片嫩绿.(见图5)

3结论

通过试验得到：粉蓝外植体在WPM+IBA0.75mg/L+6-BA3.00 mg/L +ZT2.00 mg/L条件下生长较好，粉蓝继代培养在WPM+IBA1.50+6-BA0.50+ZT3.00条件下可形成较多丛生芽，粉蓝生根培养在WPM+IBA1.00 mg/L条件下生根率高，根的质量好.奥尼尔外植体在WPM+IBA1.00+ZT2.00条件下诱导出芽率较高，奥尼尔继代培养在IBA1.5 mg/L +ZT2.0 mg/L条件下生长较好，可形成较多愈伤组织，奥尼尔生根培养在WPM+IBA1.50 mg/L条件下生根率高，根的质量好.

图5　IBA1.5mg/L蓝莓诱导培养

对与蓝莓外植体的培养，防止各种内生真菌、细菌的污染是成功的关键.可以通过在3～4月份采取幼嫩的枝条，以及在培养基中加入一定量的青霉素来降低染菌率.对与继代培养，最好采取逐代减少激素用量的方法进行培养，以避免激素用量过大给植株造成不良的影响.生根培养时，培养时间不可超过80天，否则会造成植株发育不良，茎尖有白化现象.另外，培养过程中应控制好光照，避免应光照不良引起植株发红的症状.一旦出现植株发红，可放置散射的自然光下恢复.

参考文献

[1]姜冬,张丽萍.蓝莓的组织培养及快速繁殖[J].中国林副特产,2012,8(4):12-14.

[2]李丽容,金开正.兔眼蓝莓组织快繁试验[J].中国南方果树,2010(4):71-72.

[3]茨韦特科夫·约旦, 赵燕丽. 引进国外蓝莓品种的组织培养及快繁技术研究[J].黑龙江农业科技,2011(6): 6-8.

[4]梁文卫.蓝莓最佳继代培养基的筛选试验 [J].黑龙江农业科技,2.14,(8):32-34.

[责任编辑：闫昕]

Effect of Different Phytohormone Combinations on Tissue Culture of Two Varieties of Blueberries

CHEN Yuan-guo, MA Peng, WANG Yu, GAO Yue

(College of Life Sciences, Zaozhuang of University, Zaozhuang 277160, China)

Abstract:To explore the effect of different phytohormone combinations on Powderblue and O'neal explants elongation and subculture with the stem of the two varieties of blueberry plants as materials. The results showed that Powderblue explants which cultivated in the WPM medium with 0.75 mg/L IBA,3.00mg/L 6-BA and 2.00mg/L ZT growed better. In Powderblue subculture, it developed more multiple adventitious bud in the condition of the WPM medium with 1.50mg/L IBA,0.50mg/L 6-BA and 3.00mg/L ZT. In Powderblue rooting culture, it gained higher rooting rate even better quality on the ground of the WPM medium with 1.00mg/L IBA. Similarly, O'neal explants which cultivated in the WPM medium with 1.00mg/L IBA and 2.0mg/L ZT reached higher shoot induction rate. In subculture, it vegetated better in the condition of the WPM medium with 1.50mg/L IBA and 2.00mg/L ZT, even developed more callus tissue. In rooting culture, while cultivated in the WPM medium with 1.50mg/L IBA, the roots improved better with handsome rooting rate.

Key words:vaccinium spp.; tissue culture; phytohormone combinations

[中图分类号]Q943.1

[文献标识码]A

[文章编号]1004-7077(2016)02-0087-05

[作者简介]陈原国(1972-)，男，陕西三原人，枣庄学院生命科学学院讲师，理学博士，主要从事植物学、细胞生物学研究.

[收稿日期]2016-02-02