XPD基因多态性与广西壮族人群肝癌家族聚集性的关系

胡洪波,唐超莉,李永标,覃文办,陆文西 (崇左市人民医院，广西崇左532200)



·临床研究·

XPD基因多态性与广西壮族人群肝癌家族聚集性的关系

胡洪波,唐超莉,李永标,覃文办,陆文西 (崇左市人民医院，广西崇左532200)

摘要：目的研究着色性干皮病基因D(XPD基因)基因多态性与壮族人群肝癌家族聚集性的关系。方法 于广西肝癌高发区选取18个肝癌高发家族成员178例(高发组)及相对应的18个无肿瘤家族成员178例(对照组)为研究对象，用流行病学问卷调查的方法收集肝癌相关因素，同时现场采集空腹外周血10 mL，用PCR-RFLP法检测XPD基因。结果高发组与对照组在性别、年龄构成、吸烟、主食玉米方面比较差异无统计学意义(P均>0.05)。高发组HBsAg阳性携带者74例，HBsAg阳性率为41.6%，对照组HBsAg阳性携带者31例，HBsAg阳性率为17.4%，两组HBsAg阳性携带者差异有统计学意义(χ2=3.374，P<0.001)。高发组TG基因型的分布与对照组比较有统计学差异(P<0.05)。高发组G等位基因的分布与对照组比较有统计学差异(P<0.05)。结论 XPD751基因多态性与壮族人群肝癌家族聚集性密切相关。

关键词：原发性肝癌；着色性干皮病基因D；易感性

原发性肝癌是世界第六位最常见的癌症[1],在中国,肝癌是癌症死亡的第二大原因，占所有癌症的19.33%[2]。广西是我国主要的肝癌高发地区，肝癌病死率一直位居各种恶性肿瘤的首位[3,4]，是国内肝癌高发的几个省(区、直辖市)之一，崇左市扶绥县是广西乃至全国的肝癌高发地区，所居住人群多数为壮族人群。诸多危险因素可诱发肝癌的发生，如乙型肝炎病毒感染、黄曲霉毒素感染、吸烟、大量饮酒[5]。此外，基因多态性在肝癌遗传易感性中扮演重要角色。DNA修复系统对于维持机体的遗传稳定有关键作用，其可逆转由内外环境因素导致的DNA突变。某些修复基因位点的多态性可能导致DNA修复能力的改变，从而使恶性肿瘤如肝癌发生的危险性增加。NER是主要的DNA修复系统，而XRCC1和XPD基因是NER系统中2个主要修复基因，它们的基因多态性与DNA损伤修复改变密切相关，可导致多种癌症的发生，如肺癌、肠癌、食管癌等[6]。2012年研究表明着色性干皮病基因D(XPD基因)与原发性肝癌的易感性密切相关[7]。本研究选取肝癌高发家族成员及相对应的无肿瘤对照家族成员为研究对象，分析XPD基因型及等位基因的分布频率与肝癌易感性的关系，探讨个体遗传因素与肝癌家族聚集性发生的关系。

1资料与方法

1.1临床资料肝癌家族病例组及对照组选择标准：本研究中的肝癌家族定义是指在研究对象的血缘直系亲属成员中，至少有1例(或1例以上)肝癌患者，要求肝癌患者均分布在三代之内。本研究中的对照组是指与肝癌家族组生长环境相似，未出现过癌症死亡或癌症现症病例，调查范围不小于三代。研究对象按上述肝癌家族病例组及对照组的标准，于2010年5月～2011年11月在广西崇左市江州区及扶绥县肝癌高发现场，首先对筛查对象进行知情同意签字及流行病学问卷调查。共选取肝癌高发家系18个178例(高发组)，HBsAg阳性74例，阴性104例。按照对照组的标准在每个肝癌家族所在的自然村(街道)对应选取1个无肿瘤家族作为对照组，要求其家庭成员构成与高发组相似，共选取及相应对照无癌家系18个178例，HBsAg阳性31例，阴性147例。研究对象均要求为壮族人口，在当地居住时间不少于10年。高发组和对照组在性别、年龄构成、吸烟、主食玉米方面比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2XPD基因分型检测检测技术为北京博奥生物有限公司Sequenom Mass ARRAY SNP基因型分析技术。芯片点样使用SEQUENOM公司MassARRAY Nanodispenser RS1000点样仪；质谱检测及分析采用SEQUENOM公司MassARRAY Analyzer Compact系统。SNP分型检测的主要试剂均购自SEQUENOM公司。采用Promega公司DNA提取试剂盒进行DNA模板的提取。XPD基因引物为F:5′-ACGTTGGATGCACCAGGAACCGTTTATGGC-3′，R:5′-ACGTTGGATGAGCCTGGAGCAGCTAGAATC-3′，扩增引物长度为 200 bp。PCR的反应体积为10 μL，反应步骤及条件：94 ℃预变性15 min;94 ℃变性20 s, 56 ℃退火30 s, 72 ℃延伸1 min, 进行30个循环; 最后72 ℃延伸3 min。对PCR产物进行纯化，SAP纯化体积为7 μL，37 ℃中反应40 min，85 ℃中反应5 min。然后进行单碱基的延伸，延伸反应体积为9 μL。单碱基延伸分2阶段双循环，每40个周期为一个大循环，52 ℃退火5 s及80 ℃扩展5 s进行5个小循环，然后返回94 ℃变性5 s后进入下一大循环。总循环数为5×40=200循环。每个延伸反应产物采用6mg Clean Resin树脂纯化。将纯化产物移至384孔Spectro CHIP 芯片上，然后上机测定。Spectro CHIP芯片使用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)分析，检测结果采用TYPER4.0软件分型并进行输出结果。

1.3统计学方法采用SPSS13.0统计软件。高发组和对照组的XPD基因型和等位基因分布比较采用χ2检验进行分析，计算相对危险度(OR)及其95%可信区间(95%CI)。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

高发组TG和TG+GG基因型的分布与对照组比较有统计学差异(P均<0.05)。高发组G等位基因的分布与对照组比较有统计学差异(P<0.05)。见表1。

表1　两组rs13181位点多态性分布比较[例(%)]

3讨论

XPD是一种ATP依赖的DNA解螺旋酶，是NER修复系统中关键基因，同时还参与组成Ⅱ型转录因子H( TFⅡH)复合物及p53介导的凋亡反应，是一个多功能的基因。XPD多态性的功能意义可能是影响其蛋白的合成，从而影响后者与p44 (TFIIH的另一个亚单位)的交互作用，降低解旋酶活性；NER功能缺陷，导致DNA修复能力下降而增加肿瘤的易感性。研究[8]发现，XPD较常见的多态性突变发生在密码子156、312、711、751上。其中XPD751的Lys→Gln是XPD基因SNP中研究较多的一个，该位点多态性来源于35931位点嘌呤A到嘧啶C的核苷酸突变。多数研究[9,10]认为，XPD751与癌症的易感性有关。最近的Meta分析显示XPDlys751Gln基因多态性可能是潜在肝癌易感性的一种标志物，XPDlys751Gln和Asp312Asn基因多态性可能是亚洲人群肝癌易感性的危险因子[11]。Wu等[12]对218例肝癌和277例健康对照组的观察研究发现，携带XPD751GG基因型人群有更高患肝癌的风险(OR=2.97,95%CI=1.26～7.38)。COX回归分析发现携带XPD751Gln/Gln基因型有0.3倍患肝癌风险。

本研究在广西肝癌高发区选择肝癌高发家族178例家族成员和无瘤对照组家族178例家庭成员，研究对象均为壮族人群，广西肝癌高发组和对照组在一般人口学特征上有良好的均衡性，而XPD751基因型及等位基因的构成分布上存在差异。高发组和对照组家族在TG基因型上差异有统计学意义(P<0.05)；且在G等位基因上差异亦有统计学意义(P<0.05)。个体携带XPD751TG基因型患肝癌风险性更高(OR=2.325, 95%CI=1.206-4.481)。这与Wu等[12]得出的XPD基因多态性与肝癌易感性相关一致，但与在基因型的表达差异上有不同，可能与本研究为壮族人群有关，其机制还有待进一步研究。XPD基因致肝癌易感性增加的机制可能为XPD 基因多态性使解螺旋酶的活性下降，会导致核苷酸修复功能缺陷、DNA 修复能力下降，从而使肝癌的发生风险增加。壮族人群肝癌高发人群较对照组人群较易发生肝癌与XPD751基因多态性密切相关。

本实验通过对XPD基因与肝癌的遗传易感性关系的研究，发现壮族人群肝癌的易感性与XPD基因多态性密切相关。在肝癌高发地区，肝癌的发生与基因的多态性密切相关，为民族地区肝癌高发的发病原因及原发性肝癌的防治提供相关理论依据。

参考文献：

[1] Bray F, Jemal A, Grey N, et al. Global cancer transitions according to the Human Development Index (2008-2030): a population-based study[J]. Lancet Oncol, 2012,13(8):790-801.

[2] Chen J, Zhang S, Chen W. Analysis of liver cancer mortality in the national retrospective sampling survey of death causes in China 2004-2005[J]. Chin J Pre Med, 2010,44(5):282-289.

[3] Zhang CY, Huang TR, Yu JH, et al. Epidemiological analysis of primary liver cancer in the early 21st century in Guangxi province of China[J]. Chin J Cancer, 2010,29(5):545-550.

[4] He Y, Zhang H, Yin J, et al. IkappaBalpha gene promoter polymorphisms are associated with hepatocarcinogenesis in patients infected with hepatitis B virus genotype C[J]. Carcinogenesis, 2009,30(11):1916-1922.

[5] Gao J, Xie L, Yang WS, et al. Risk factors of hepatocellular carcinoma-current status and perspectives[J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2012,13(3):743-752.

[6] Yue AM, Xie ZB, Guo SP, et al. Implication of polymorphisms in DNA repair genes in prognosis of hepatocellular carcinoma[J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2013,14(1):355-358.

[7] Yuan T, Deng S, Liu H, et al. Relationship between XRCC1 and XPD polymorphisms and the risk of the development of hepatocellular carcinoma: A case-control study[J]. Exp Ther Med, 2012,4(2):285-290.

[8] Amal F, Gharib AF, Sherif A, et al. Polymorphisms of DNA repair genes OGG1and XPDand the risk of age-related cataract in Egyptians[J]. Molecular Vision, 2014,20(5):661-669.

[9] Peng Q, Li S, Lao X, et al. Association between XPD Lys751Gln and Asp312Asn polymorphisms and hepatocellular carcinoma risk: A systematic review and meta-analysis[J]. Medicine, 2014,93(29):330.

[10] Zhang RC, Mou SH. Polymorphisms of excision repair gene XPD Lys751Gln and hOGG1 Ser326Cys might not be associated with hepatocellular carcinoma risk: a meta-analysis[J]. Tumor Biol, 2013,34(2):901-907.

[11] Yang QI, Wei YF, Zhang Y, et al. XPD Lys751Gln and Asp312Asn polymorphisms and hepatocellular carcinoma susceptibility: A meta-analysis of 11 case-control studies in an Asian population[J]. Exp Ther Med, 2015,9(6):2406-2414.

[12] Wu JS, Chen YP, Wang LC, et al. Implication of polymorphisms in DNA repair genes with an increased risk of hepatocellular carcinoma[J]. Genet Mol Res, 2014,13(2):3812-3818.

(收稿日期：2015-10-24)

中图分类号：R735.7

文献标志码：B

文章编号：1002-266X(2016)13-0033-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.13.012

基金项目：广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题(Z2011093)；崇左市科学研究与技术开发计划项目(攻201210)。