HPLC法测定北败酱中绿原酸含量

姜茁松,李井涛

(吉林省药品检验所,长春 130033)



HPLC法测定北败酱中绿原酸含量

姜茁松,李井涛*

(吉林省药品检验所,长春 130033)

摘要：目的建立HPLC法测定北败酱中绿原酸含量的方法。方法采用色谱柱Diamonsil(5 μm，4.6 mm×250 mm)；流动相乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)；检测波长327 nm；流速1.0 mL/min；柱温35 ℃。结果绿原酸在0.04～0.36 μg(r=0.999 5)范围内，线性关系良好，加样回收率(n=6)为99.27%(RSD=1.03%)。结论本法简便，准确，重现性好，可作为评价北败酱的质控方法。

关键词：北败酱；绿原酸；高效液相色谱；绿原酸

北败酱BeibaijiangIxerischinensis(Thunb Nakai)，别名中华苦菜，山苦菜，属菊科植物。全草入药，性寒味苦，既可药用又可食用。在我国北方地区常作“败酱草”使用，因此称北败酱。据报道[1-5]，北败酱全草含有多种有机酸类和黄酮类化合物，其中黄酮类分离的有槲皮素、异鼠李素。而绿原酸成分多存在于叶类植物中，有清热解毒、祛瘀排脓的功效。目前对其有效成分研究的报道鲜见，本研究对吉林省道地药材北败酱进行了检测，建立了北败酱中绿原酸成分的鉴别、测定方法，从而为其质量标准的拟定提供了依据。

1材料

Agilent 1200型高效液相色谱仪，DAD检测器；岛津UV-2550型紫外-可见分光光度计；AL204-IC型电子分析天平(十万分之一)。对照品：绿原酸(110753-200413)，购自中国药品生物制品检定所；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。北败酱购自吉林省北药药材公司(采自吉林省通化市)，经鉴定，为菊科植物北败酱干燥全草。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)；检测波长327 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃；进样量：5 μL。

2.2测定波长的选择 对绿原酸对照品最大吸收进行光谱扫描，结果显示溶液在326 nm处有最大吸收。综合参考《中国药典》2010年版金银花项下绿原酸含量测定的方法，故确定327 nm为本法的测定波长。

2.3溶液的制备

2.3.1对照品溶液的制备 取绿原酸对照品10 mg，用70%甲醇溶解到25 mL容量瓶中，并稀释至刻度，再取1 mL溶液用70%甲醇稀释到10 mL，摇匀，过0.45 μm滤膜，即得。

2.3.2 供试品溶液的制备 取药材粉末2.5 g，加70%甲醇50 mL，超声处理40 min，滤过，于沸水浴锅上蒸干，转移至25 mL容量瓶中，用70%甲醇定容，取续滤液，摇匀，过0.45 μm滤膜，即得。2.4线性关系考察 分别精密吸取绿原酸对照品溶液(0.04 mg/mL)1、3、5、7、9 μL，注入液相色谱仪，以进样量为横坐标，以峰面积值为纵坐标绘制标准曲线。计算回归方程：A=1 616.1X+19.905，r=0.999 5。结果表明：绿原酸在0.04～0.36 μg范围内，标准曲线线性关系良好。

2.5精密度试验精密吸取供试品溶液5 μL,注入液相色谱仪，重复5次，测定其峰面积(RSD=0.96%)。表明精密度良好。

2.6稳定性实验取供试品溶液，分别在0、1、2、8、24 h进样，记录色谱峰的峰面积。结果RSD为0.26%。表明在24 h内，供试品溶液中绿原酸的含量比较稳定。

2.7重复性试验取供试品粉末，以2.3.2方法独立测定6次，结果RSD为1.10%。表明该方法重现性好。

2.8回收率实验精密称取同法测定已知含量的供试品6份，加70%甲醇50 mL，超声处理40 min，滤过，蒸干，转移至25 mL容量瓶中，分别加入绿原酸对照品0.20、0.40 mg，用70%甲醇定容，取续滤液进样。结果回收率为99.54%(RSD=0.96%)。表明本法回收率较好，准确度高。

2.9样品测定[6-8]取不同产地的药材粉末，依2.3.2 方法测定，用外标法测定峰面积。结果表明，不同产地药材中绿原酸的含量无统计学意义，见表1。

表1　 绿原酸的含量测定(n=4) 　mg/g

3结论

通过对乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)和甲醇- 0.4%磷酸溶液(13∶87)不同流动相的研究比较，结果显示前者峰型和分离均比较好；对乙腈-0.4%磷酸溶液的不同比例考察结果表明：乙腈-0.4%磷酸溶液比例为13∶87时基线分离彻底，理论版数较高。故选用乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)作为流动相。

对样品分别进行了超声20、30、40 min的提取，结果表明超声40 min时提取比较完全，因此，选择40 min作为提取处理时间。

本研究还分别对高效液相色谱仪(Agilent1200、岛津2010CHT)和Alttima、Diamonsil、Appllo的C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱进行了耐用性试验的考察，结果表明，选用的两个厂家的仪器和3种色谱柱均达到系统适用性的要求。

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Determination of chlorogenic acid in ixeris chinensis by HPLC

JIANG Zhuosong,LI Jingtao*

(Drug Determination Department In JiLin,ChangChun 130033,China)

Abstract：ObjectiveTo establish a method for determination of chlorogenic acid in Ixeris Chinensis by HPLC.MethodsA column of Diamonsil (5 μm，4.6 mm ×250 mm) was adopted,and the mobile phase was the mixture of acetonitrile-0.4% phosphoric acd and water(13∶87)at a flow rate of 1.0 mL/min;The wavelength was set at 327nm.ResultsThere was a good linear relationship in the concentration range of 0.04～0.36 μg(r=0.999 5)of chlorogenic acid;The average recovery (n=6) was 99.27%(RSD=1.03%).ConclusionThe method is simple，accurate，and can be used for the quantitative analysis of Ixeris Chinensis.

Keywords：ixeris chinensis;chlorogenic acid;HPLC;DAD

(收稿日期:2015-12-30)

文章编号：2095-6258(2016)02-0259-02

中图分类号：R284.1

文献标志码：A

*通信作者：李井涛,电话-17790006880,电子信箱-13514472003@126.com

作者简介：姜茁松(1967-)，女，主管药师，主要从事药品检验研究。

DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2016.02.013