高效液相色谱梯度洗脱法测定十味蒂达胶囊中的松果菊苷和木香烃内酯的含量

顾 玉吴春园



高效液相色谱梯度洗脱法测定十味蒂达胶囊中的松果菊苷和木香烃内酯的含量

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【摘要】目的 采用高效液相色谱（HPLC）梯度洗脱法建立同时测定十味蒂达胶囊中松果菊苷和木香烃内酯含量的方法。方法 采用C(18)色谱柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流速：1.2 ml/min；以乙腈-甲醇（2:3）作为流动相A，以1%冰醋酸溶液作为流动相B，按规定程序进行梯度洗脱；检测波长：松果菊苷为334 nm，木香烃内酯为225 nm，柱温为25 ℃。结果 松果菊苷和木香烃内酯质量浓度分别在23.24～464.80 μg/ml（r=0.9994）、19.47～389.40 μg/ml（r=0.9998）时与其峰面积呈良好的线性关系；松果菊苷和木香烃内酯的平均加样回收率分别为99.27%、96.85%，RSD（n=6）分别为1.08%、0.59%。结论 该方法快速、灵敏、准确，可作为十味蒂达胶囊的含量测定控制方法。

【关键词】高效液相色谱；梯度洗脱法；十味蒂达胶囊；松果菊苷；木香烃内酯；洪连；木香

1无锡市精神卫生中心，江苏无锡 214151

2常州市新北区三井人民医院，江苏常州 213022

十味蒂达胶囊是由洪连、木香、蒂达、榜嘎、波棱瓜子、角茴香、苦卖菜、金腰草、小檗皮和熊胆粉等10味药物加工而成的中药复方制剂，具有疏肝理气、清热解毒、利胆溶石的作用，是治疗肝胆湿热所致肋痛，症见右上腹钝痛或绞痛，口苦，恶心，嗳气，泛酸，腹胀，慢性胆囊炎或胆石症见上述症候的首选药物[1]。本研究采用高效液相色谱（HPLC）梯度洗脱法对十味蒂达胶囊中洪连[2]中松果菊苷和木香[2]所含木香烃内酯进行定量检测，为进一步控制十味蒂达胶囊的质量提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 安捷伦Agilent 1200型高效液相色谱仪，Chemstation色谱工作站；依利特C18柱（200 mm× 4.6 mm，5 μm）；松果菊苷对照品（111670-201304，含量以97.1%计）、木香烃内酯（111524-201208，含量以99.5%计）均购于中国食品药品检定研究院；十味蒂达胶囊（每粒装0.45g；批号为140503、141203、150202）购于西藏诺迪康药业股份有限公司；甲醇、乙腈为色谱纯，冰醋酸为分析纯。

1.2 色谱条件 试验过程中以乙腈-甲醇（2:3）作为流动相A，以1%冰醋酸溶液作为流动相B[2-3]，按照规定程序进行梯度洗脱（0～8 min，20.0%A；9～20 min，20.0%升至35.0%A；21～35 min，35.0%A升至50.0%A；36～40 min，50.0%A降至20.0%A）；所测组分检测波长为：0～20 min，λ1=334 nm[3-4]；21～40 min，λ2=225 nm[5-7]；流速为1.2 ml/min；柱温25 ℃；进样量为20 μl。此系统条件下松果菊苷、木香烃内酯与其他组分分离效果较好，理论塔板数按照松果菊苷、木香烃内酯计均应不得低于2500，分离度均应大于1.5。

1.3 混合对照品溶液的配制 分别精密称取松果菊苷对照品和木香烃内酯对照品适量，加80%甲醇制成质量浓度分别为2.324、1.947 mg/ml的对照品储备液。再精密吸取配制成的对照品储备液，加80%甲醇制成松果菊苷和木香烃内酯质量浓度分别为0.1162、0.1947 mg/ml的混合对照品溶液。

1.4 供试品溶液的制备 取十味蒂达胶囊适量，取出其内容物，研磨成细粉，取约1.0 g，对其精密称定，置50 ml量瓶中，加80%甲醇稀释至刻度，超声处理30 min，放冷，采用80%甲醇补充至刻度，振摇均匀，过滤，即得续滤液作为供试品溶液。

1.5 阴性样品溶液的制备 按照十味蒂达胶囊的处方要求，分别称取除洪连的其余药味和除木香的其余药味各1份，参照十味蒂达胶囊的制备工艺方法，分别制成洪连空白样品和木香空白样品，按照1.4项下所描述的供试品溶液制备方法制成洪连空白溶液和木香空白溶液。

2 结果

2.1 专属性实验 分别精密吸取供试品溶液、混合对照品溶液、洪连空白溶液及木香空白溶液，进样量为20 μl，依法测定，结果显示：在与所测组分对照品色谱图相应的保留时间，样品色谱图中有对应吸收峰；而洪连空白溶液图谱上未显示松果菊苷的吸收峰；木香空白溶液图谱上未显示木香烃内酯的吸收峰，见图1。实验结果表明，处方中其他药味对检测结果无影响。

图1 松果菊苷和木香烃内酯的HPLC图注：1松果菊苷;2木香烃内酯;A对照品;B样品;C阴性对照品

2.2 线性关系考察 精密量取松果菊苷储备液、木香烃内酯储备液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 ml，分别置于5个10 ml的容量瓶中，加80%甲醇制成系列浓度的混合对照品溶液，依法测定，以峰面积A与对照品质量浓度C，得松果菊苷回归方程为：A= 3.1057×106C+315.8，r=0.9994，线性范围为23.24～464.80 μg/ml；木香烃内酯A=5.9516×106C+265.8，r=0.9998，线性范围为19.47～389.40 μg/ml。结果表明：松果菊苷和木香烃内酯在各自的线性范围内，呈良好线性关系。

2.3 精密度实验 精密吸取松果菊苷0.1162 mg/ml、木香烃内酯0.1947 mg/ml的混合对照品溶液20 μl，连续6次注入高效液相色谱仪中，测得松果菊苷和木香烃内酯峰面积的相对标准偏差分别为1.29%、0.87%。

2.4 重复性实验 取同一批号的十味蒂达胶囊，按1.4项下方法制成6份供试品溶液，在上述条件依法进样测定，计算各成分含量和相对标准偏差，松果菊苷和木香烃内酯的RSD分别为0.96%、1.05%。

表1 松果菊苷和木香烃内酯回收率试验

2.5 稳定性实验 精密吸取同一批号十味蒂达胶囊的供试品溶液，分别于即刻、2、4、8、12、24 h进样20 μl测定，测得松果菊苷和木香烃内酯的RSD分别为1.31%、0.75%。

2.6 加样回收率试验 取十味蒂达胶囊（松果菊苷为6.48 mg/g，木香烃内酯为9.56 mg/g）适量，取出其内容物，研磨成细粉，取约0.5 g，对其精密称定，置50 ml量瓶中，加入混合对照品溶液25 ml，采用80%甲醇稀释至刻度，采用超声波超声提取30 min，放冷，采用80%甲醇补充至刻度，振摇均匀，过滤，取续滤液作为加样供试品试液。依法进样测定，平均加样回收率及RSD见表1。

2.7 样品的含量测定 取3个批号的样品，按供试品制备方法，在上述色谱条件下测定本品中松果菊苷和木香烃内酯的含量，结果见表2。

表2 3个批号样品含量测定结果(n=3)

3 讨论

洪连系藏族习用药材，为玄参科植物短筒兔耳草的干燥全草，具有清热、解毒、利湿、平肝、行血、调经的功效；木香为菊科植物木香的干燥根，具有行气止痛，健脾消食的功效。松果菊苷为洪连的主要成分，木香烃内酯为木香的主要成分。本研究采用HPLC梯度洗脱法对十味蒂达胶囊中松果菊苷和木香烃内酯进行定量控制研究，实验结果表明本方法快速、灵敏、准确，可作为十味蒂达胶囊中松果菊苷和木香烃内酯的控制方法。

参考文献

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[2] 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典2010年版二部[S].北京:人民卫生出版社,2010:57-58,249-250.

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作者简介：顾玉（1981.11-），主管药师。主要从事医院药学研究工作。Email：guyuxueshu@163.com

【中图分类号】R927.2

【文献标志码】A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.03.005