紫外分光光度法测定壮药上树虾的多糖含量

2016-04-14曾祥燕颜萍花唐玉荣广西中医药大学530001南宁市明秀东路179号

广西中医药 2016年1期

曾祥燕　颜萍花　唐玉荣　蔡　毅　广西中医药大学　530001　南宁市明秀东路179号

紫外分光光度法测定壮药上树虾的多糖含量

曾祥燕颜萍花唐玉荣蔡毅*
广西中医药大学530001南宁市明秀东路179号

摘要目的：建立壮药上树虾中多糖的含量测定方法，并对广西不同产地的11批上树虾样品中的多糖进行含量测定。方法：采用紫外-可见分光光度法，以D-无水葡萄糖为对照品，以苯酚-浓硫酸为显色系统，检测波长为485 nm。结果：D-无水葡萄糖溶液浓度在0.0126～0.2516 mg/ml范围内与吸光度呈良好线性关系，回归方程为：Y=11.172X（r=0.9997），11批上树虾样品中的多糖含量在2.21%～5.29%之间。结论：该方法灵敏，精密度高，重现性好，结果准确，可作为上树虾药材中多糖的含量测定方法。

关键词上树虾；多糖；紫外-可见分光光度法；含量测定

壮药上树虾为兰科植物聚石斛Dendrobium lindleyi Stend.的全草，又名木虾公、金黄泽、上树黄泽、鸡背石斛等，具有润肺止咳、滋阴养胃的功效，主治肺热咳嗽，肺结核，哮喘，痢疾，口腔炎，胃痛，小儿疳积等［1］。现代研究表明石斛属植物的化学成分主要有生物碱类、多糖类、苷类、黄酮类、倍半萜类、香豆素类以及甾体糖苷类化合物等［2］，其中多糖成分是石斛增强免疫、抗肿瘤［3］和降血糖［4］作用的主要活性成分。上树虾为常用壮药［5］，为完善其质量控制，本文采用紫外-可见分光光度法测定其多糖的含量，结果如下。

1　实验材料

1.1仪器Agilent8453紫外-可见分光光度仪（美国安捷伦科技公司）；HH-S6电热恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂）；FA1104电子分析天平（上海精科天平）；LD24-1.2离心机（北京医用离心厂）。

1.2试剂D-无水葡萄糖对照品（供含量测定用，中国食品药品检定研究院，批号：110833-201205）；其余试剂均为分析纯。

1.3药材上树虾药材采自广西各地，经广西中医药大学蔡毅教授鉴定为兰科植物聚石斛Dendrobium lindleyi Stend.的全草。

2　实验方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1供试品溶液的制备取上树虾粉末0.4 g（过40目筛），精密称定，精密加入蒸馏水120 ml，称定重量，加热回流1.5 h，提取3次，放至室温，用水补足减失的重量，摇匀，滤过即得。

2.1.2对照品溶液的制备精密称取D-无水葡萄糖对照品6.29 mg，置25 ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2检测条件的确定以D-无水葡萄糖为对照品，苯酚-硫酸为显色体系［6］，用紫外-可见分光光度计在400～800 nm进行扫描，D-无水葡萄糖对照品溶液和供试品溶液在485 nm波长均有最大吸收，故选定检测波长为485 nm。见图1。

2.3方法学考察

2.3.1线性关系考察分别精密量取对照品溶液0.5 ml、1 ml、2 ml、4 ml、8 ml、10 ml置于10 ml容量瓶中，加蒸馏水定容。然后取各浓度D-无水葡萄糖对照品溶液1 ml，加入5%苯酚1 ml，摇匀，再加浓硫酸5 ml，于100℃水浴中加热15 min，再置冰水浴中放置5 min，放至室温，于485 nm下进行测定，记录吸光度值。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明：当D-无水葡萄糖溶液浓度在0.0126～0.2516 mg/ml范围内时，浓度与吸光度呈良好线性关系，回归方程为：Y=11.172X，r=0.9997（n=6）。

2.3.2精密度试验取同一份D-无水葡萄糖对照品溶液1 ml（浓度为0.1006 mg/ml），按2.3.1项下“加入5%苯酚1 ml……于485 nm下进行测定”的测定条件，连续测定6次，D-无水葡萄糖吸光度平均值为1.1612，RSD＝0.11%（n=6）。结果表明精密度良好。

2.3.3重复性试验取同一批供试品（SSX-1）粉末约0.4 g，精密称定，先按2.1.1项方法制备供试品溶液，再按2.3.1项的方法平行测定6份，结果测出多糖含量的平均值为2.89%，RSD＝2.09%（n=6）。结果表明重复性良好。

2.3.4稳定性试验取同一供试品溶液，按2.3.1项的方法每间隔2 h（0 h，2 h，4 h，6 h，8 h，10 h）测定1次，共测定6次，记录多糖的吸光度，结果多糖含量的平均值为2.90%，RSD＝1.57%（n=6）。表明供试品溶液在10 h内稳定性良好。

2.3.5加样回收试验精密称取D-无水葡萄糖对照品58.40 mg，置10 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为5.84 mg/ml的对照品溶液。另精密称取已知含量的供试品（SSX-1）粉末约0.2 g，共6份，精密称定，按2.1.1项方法制备供试品溶液，再分别精密加入D-无水葡萄糖对照品贮备液1 ml（5.84 mg/ml），按2.3.1项下的方法提取、测定，计算加样回收率，结果多糖平均回收率为98.94%，RSD 为2.24%（n=6）。结果见表1。

2.4样品测定按以上拟定的含量测定方法，测定了广西不同产地11批上树虾中多糖的含量，见表2。

3　小结与讨论

现代药理研究表明，药用石斛多糖具有多种药理功效，可调节机体免疫力、抗肿瘤、抗氧化、降血糖等［7-9］。上树虾含有多糖成分，故本研究以其作为含量测定指标，为完善质量控制提供依据。在上树虾的多糖提取预试验中，本课题组曾考察了料液比、提取时间、提取次数等因素，确定提取方法为：取上树虾粉末0.4 g，精密称定，精密加入蒸馏水120 ml，称定重量，加热回流1.5 h，提取3次，放至室温，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液离心10 min（10 000 r/min）。

实验结果表明，广西不同产地11批上树虾中多糖的含量在2.21%～5.29%之间，由此看出产地和季节对多糖含量的影响不大，也与该药材传统的全年可采相符合。

本文采用紫外分光光度法对上树虾中多糖进行了含量测定，其方法简便、快捷、重复性好，可作为上树虾中多糖的含量测定方法。

参考文献

［1］国家中医药管理局《中华本草》编写委员会.中华本草（第五册）［M］.上海：上海科学技术出版社，1999：705.

［2］张光浓，毕志明，王峥涛，等.石斛属植物化学成分研究进展［J］.中草药，2003，34（6）：102.

［3］郭勇，程晓磊.石斛在恶性肿瘤治疗中的作用［J］.浙江中西医结合杂志，2007，17（7）：454.

［4］罗傲霜，淳泽，葛绍荣，等.迭鞘石斛多糖降血糖作用研究［J］.应用与环境生物学报，2006，12（3）：334-337.

［5］林春蕊，许为斌，刘演，等.广西靖西县端午药市常见药用植物［M］.南宁：广西科学技术出版社，2012：333.

［6］王建，陶靖，莫莹，等.广西不同产地马鞭石斛多糖含量的测定［J］.广西中医药大学学报，2013，16（2）：78-80.

［7］宋昕玥，李应东，师彦平，等.中药质量控制方法的进展（英文）［J］.中国天然药物，2013，11（6）：596-607.

［8］刁波，唐瑛，王晓琨，等.中药多糖研究新进展［J］.中国医药导报，2008，5（3）：21.

［9］王康正.石斛属药用植物研究进展［J］.中草药，1997，28（10）：633-635.