北京地区2131例胃镜活检人群幽门螺杆菌感染分析

李彦玮　于玮　滕飞　韩丽媛　陈东　王伟

(首都医科大学附属北京安贞医院病理科, 北京　100029)



·论著·

北京地区2131例胃镜活检人群幽门螺杆菌感染分析

李彦玮于玮滕飞韩丽媛陈东王伟

(首都医科大学附属北京安贞医院病理科, 北京100029)

摘要目的： 探讨幽门螺杆菌(helicobacter pylori, Hp)感染在不同年龄、性别、取材部位的阳性检出率。方法： 采用EnVision法对北京地区2131例门诊患者的胃镜活检标本进行免疫组化染色，按性别、年龄、取材部位不同分别计算阳性检出率。结果： 采用免疫组化EnVision法检测胃镜活检组织Hp感染，其染色背景清晰、质量稳定、流程标准化。北京地区2131例胃镜活检人群Hp感染阳性检出率为35.6%，男性患者Hp感染阳性检出率为40.9%，女性患者为30.5%。男性患者各年龄组Hp阳性检出率差异有统计学意义，以30岁以下男性感染率最高(60.86%, P<0.05)；女性各年龄组阳性检出率差异无统计学意义。各年龄组内，男性患者阳性检出率均高于女性(P<0.05)。胃小弯中部Hp感染阳性检出率最高(36.0%)，胃窦大弯侧最低(24.0%)，差异有统计学意义(P<0.05)。结论： 北京地区胃镜活检人群中男性Hp感染患者多于女性，以30岁以下男性感染率最高；且Hp感染好发于胃小弯中部。

关键词EnVision两步法;免疫组化;幽门螺杆菌;阳性检出率

EnVision System for Detecting Helicobacter Pylori Infection in 2131 Gastroscopic Biopsy Cases in Beijing

LIYanweiYUWeiTENGFeiHANLiyuanCHENDongWANGWei

DepartmentofPathology,BeijingAnzhenHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100029,China

AbstractObjective： To explore the positive rate of detectinghelicobacterpylori(Hp) infection in different groups regarding gender, age and site of biopsy.Methods： Immunohistochemistry staining was conducted by EnVision two-step method for biopsy specimens from 2131 clinical patients in Beijing, and the positive rate of detectingHpinfection was evaluated regarding gender, age and site of biopsy, respectively.Results： The method of immunohistochemistry EnVision showed characteristics including clear background, stable quality and standard procedure for detectingHpinfection in gastroscopic biopsy. In 2131 patients, the overall positive rate of detectingHpinfection in 2131 gastroscopic biopsy cases in Beijing was 35.6%. The positive rate was 40.9% in male group while it was 30.5% in female group. There were significant differences regardingHpinfection positive rate of males among groups with different age level, and the infection rate in males younger than 30 years was the highest (60.86%,P<0.05). There was no significant difference regarding positive rate of females among groups with different age level (P>0.05). On each age level, the positive rate in males was higher than that in females (P<0.05). The positive rate ofHpinfection in the middle site of lesser curvature of stomach was the highest(36.0%), while that in greater curvature of gastric antrum was the lowest(24.0%), and the difference was significant(P<0.05).Conclusions： Among the gastroscopic biopsy in Beijing, theHpinfection positive rate in males was higher than that in females. And the peak positive rate of infection occurred in male younger than 30 years. Furthermore,Hpinfection was more common in the middle site of lesser curvature of stomach.

Key WordsEnVision two-step method;Immunohistochemistry;HelicobacterPylori;Positive rate

幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，Hp)，属弯曲杆菌目螺旋杆菌科螺旋杆菌属，是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的细菌。1994年世界卫生组织癌症研究机构(IARC)将Hp定为Ⅰ类致癌原[1]。大量研究资料[2-4]表明：Hp与消化道疾病密切相关, 是慢性活动性胃炎和十二指肠溃疡的致病因素，与胃溃疡密切相关，与浅表萎缩性胃炎、肠上皮化生、胃增生性息肉和胃十二指肠的黏膜相关性淋巴样组织(MALT) 淋巴瘤的发生有关，与胃癌可能有关。因此，Hp感染的快速、准确的诊断对于临床治疗有着重要的意义。目前，有多种方法可以检测Hp感染[5-7]，而使用全自动免疫组化染色胃镜活检组织中的Hp感染少有报道。本研究利用免疫组化EnVision两步法检测2131例门诊患者胃镜活检组织的Hp感染结果，分析了Hp感染在不同性别、年龄段及取材部位的阳性检出率差异，为Hp感染的治疗提供诊断依据。

1资料与方法

1.1一般资料2014年6月-2015年6月我院病理科接收的门诊胃镜检查的活体组织共2131例，其中男性945例，年龄24~89岁，平均58.7岁；女性1186 例，年龄22~86 岁，平均59.6岁。其中30岁以下41例，男性23例，女性18例；30~49 岁96 例，男性53 例，女性43例；40~49 岁252例，男性131例，女性121例；50~59 岁673例，男性276例，女性397 例；60~69岁634例，男性258例，女性376例；70~79岁360例，男性159例，女性201例；80~89 岁75例，男性45例，女性30例。不同年龄段的男、女性两组人群的年龄、性别构成差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。所有标本均经10%中性甲醛固定、石蜡包埋。

1.2试剂与仪器HpRTU一抗(兔多抗)、辣根过氧化物酶(HRP)标记RTU二抗、脱蜡修复一体液、DAB显色剂、苏木素、冲洗缓冲液(20×)均购于丹麦Dako公司；GS-无苯封片胶(格林,黑龙江)；组织切片机(Leica RM223,德国)；全自动免疫组化染色机(Dako Autostainer Link48,丹麦)；多头显微镜(Leica Microsystems DM2500,德国)；显微照相机(Leica Microsystems DM3000,德国)；烤片机(SAKURA, PS-52,日本)。

1.3免疫组化染色将甲醛固定、石蜡包埋的活检胃镜组织块制成厚4 μm切片，60℃烤片30 min。由Dako Autostainer Link48全自动免疫组化染色机完成染色。免疫组化染色方法是EnVision两步法。

组织脱蜡、修复程序：脱蜡修复一体液预热至65℃，将切片置片架上，放入PT Link修复仪中。升温至95℃，修复20 min，逐步降温至65℃，完成脱蜡及修复。EnVision两步法染色程序：清洗缓冲液冲洗；FLEX过氧化物酶封闭试剂封闭5 min；清洗缓冲液冲洗；Hp一抗孵育20 min；清洗缓冲液冲洗；FLEX/ HRP标记二抗孵育20 min；清洗缓冲液冲洗5 min；DAB显色10 min；清洗缓冲液冲洗；苏木素复染5 min；蒸馏水冲洗；清洗缓冲液冲洗浸泡5 min；蒸馏水冲洗。

染色完成后，梯度乙醇脱水、透明、中性树胶封片。以清洗缓冲液分别代替一抗和二抗作为染色的阴性对照。

1.4结果判读标准高倍镜下，以在胃黏膜上皮细胞表面或胞浆中找到散在或簇状分布的弯曲短杆状、逗点状、“S”形或“C”形的棕黄色颗粒作为免疫组化染色阳性的判读标准，结果由两名病理医师采用双盲法独立判读，结果取平均值。

1.5统计学处理采用SPSS 17.0统计软件，依据数据类型的不同分别采取χ2检验、t检验、方差分析。检验水平α=0.05。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1活检组织Hp感染镜下表现如图1示，HE染色(图1A)镜下观察Hp感染需要高倍镜下仔细查找。而免疫组化染色(图1C)清晰地显示出Hp感染的部位，能够协助判断感染的阳性程度。与阴性结果(图1B)相比，阳性染色结果的显色与非阳性部位对比明显，易于观察。

A: Hp感染的HE染色结果(×400)；B: Hp感染的免疫组化染色结果，阴性(Envision两步法，×400)；C: Hp感染的免疫组化染色结果，阳性(Envision两步法，×400)图1　胃镜活检组织Hp感染染色结果

2.2男女性Hp阳性检出率的比较2131例患者中共检出Hp感染623例，阳性检出率为29.24%。其中945例男性患者中检出Hp感染291例，阳性检出率为30.79%。男性中，除30岁以下的阳性检出率为60.86%，其他年龄组的阳性检出率均不超过40%；男性各年龄组间阳性检出率差异有统计学意义(P<0.05)。1186例女性患者中检出Hp感染332例，阳性检出率为27.99%，阳性检出率最高的是30~39岁组。女性各年龄组间阳性检出率差异无统计学意义。各年龄组内，男性患者Hp阳性检出率高于女性(P<0.05)。见表1。

表1　不同年龄段男女性Hp感染阳性检出率情况

2.3不同胃镜活检部位Hp感染阳性检出率的对比按照悉尼标准[8]，本研究分析了2131例胃镜活检组织的胃窦大弯侧、胃窦小弯侧、胃体大弯侧、胃体小弯中部、胃角5个部位的Hp阳性检出率。其中，Hp感染阳性检出率最高值在胃体小弯中部为36.0%，在胃窦大弯侧最低为24.0%。胃体小弯中部的阳性检出率明显高于胃窦大弯侧的阳性检出率(P<0.05)。见表2。

图2　不同取材部位Hp感染阳性检出率

3讨论

本研究挑选2014年6月—2015年6月在我院进行胃镜活检的患者，均为北京市自然居民。研究结果显示，在北京地区人群中，从2131例病例中检出Hp感染623例，阳性检出率为29.24%，明显低于中国自然人群Hp的感染率(54.76%)[9]。其中，945例男性患者检出Hp感染291例，阳性检出率为30.79%。除30岁以下的阳性检出率为60.86%，其他年龄组的阳性检出率均不超过40%；男性各年龄组阳性检出率差异明显(P<0.05)。1186例女性患者检出Hp感染332例，阳性检出率为27.99%，阳性检出率最高的是30~39岁组。女性各年龄组阳性检出率差异不明显(P>0.05)。在7个年龄组中，男性的阳性检出率明显高于女性的阳性检出率(P<0.05)。2131例病例Hp感染的阳性检出率为29.24%，与王其国[10]报道的感染率(56.84%)相比较低，与其男性Hp感染率显著高于女性的结果一致。综上所述，Hp感染存在着年龄及性别差异，男性感染率高于女性。

确定是否存在Hp感染，病理实验室常常首先对患者标本进行HE染色。HE染色结果需要在高倍镜下仔细观察，Hp感染部位可能有染色过程中的杂质混在一起，引起识别困难。而在免疫组化染色法中，Hp感染的部位大多为深棕色，胞核为蓝色，两种颜色对比度大，更有利于观察组织中的Hp感染[11]。本研究利用Dako Link48全自动免疫组化染色机按照EnVision两步法[12-13]染色流程，检测胃镜活检组织中的Hp感染，具有灵敏度高、背景清晰、质量稳定、染色结果可靠、流程标准化的优点。在EnVision两步法中，多聚葡聚糖骨架将第二抗体和辣根过氧化物酶(HRP)联接成一个多聚体(即EnVision)。多聚葡聚糖骨架相当于信号扩大系统，可同时连接更多的鼠、兔来源的免疫球蛋白，因此提高了染色的敏感性。同时，EnVision 两步法将传统的第二抗体与第三抗体分别孵育优化为1次孵育，既避免了内源性生物素干扰，使得染色背景清晰，又极大地缩短了染色时间。

免疫组化染色法显示有的菌体粗大成团、成片或颗粒状，并不像典型的单个弯曲短杆状、逗点状、“S”形或“C”形的棕黄色颗粒，可能由于Hp表面有许多种抗原物质，如尿素酶、黏附素、鞭毛外鞘、Hsp60、Cag A和空包毒素等物质，以及兔源抗Hp多克隆抗体识别并显示出球形Hp而形成。免疫组化染色不仅可证实Hp感染, 还能检测出球形Hp感染。因此，全自动免疫组化染色机EnVision两步法检测胃镜活检组织中Hp感染是病理实验室适用的检测手段。

内镜检查时，根据悉尼标准[8]，通常要包含5个部位，分别在胃窦距幽门2~ 3 cm 处选取胃窦大弯侧和胃窦小弯侧，距胃角大约4 cm处选取胃体大弯侧，距贲门大约8 cm选取胃体小弯中部，胃角切迹及病变部位。从Hp感染阳性检出率的分布来看，最高值在胃体小弯中部(36.0%)，其次为胃体大弯侧(34.0%)，胃窦小弯侧为(26.0%)，胃窦大弯侧最低(24.0%)。胃体小弯中部的阳性检出率明显高于胃窦大弯侧的阳性检出率(P<0.05), 这与国外报道的Hp在胃内分布胃窦较多而胃底、胃体较少的结果不大一致[14-15]，其原因尚不清楚。Hp感染在不同部位的分布差异，可能与宿主免疫反应的多样性、菌种类型有关，需进一步研究来阐明。

综上所述，北京地区胃镜活检人群中男性Hp感染患者多于女性，以30岁以下男性感染率最高，且Hp感染好发于胃小弯中部。

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中图分类号R446.6

文献标志码A

通讯作者王伟，E-mail: azwangwei6323@163.com