柿叶黄酮对肾性高血压大鼠血管紧张素、醛固酮、降钙素基因相关肽的影响

2016-04-06邓海英赖为国钦州市第二人民医院药剂科广西钦州535099

中成药 2016年3期

邓海英，赖为国（钦州市第二人民医院药剂科，广西钦州535099）

邓海英，赖为国
（钦州市第二人民医院药剂科，广西钦州535099）

摘要：目的对柿叶黄酮对肾性高血压大鼠模型的作用机制进行探讨。方法 50只SD大鼠采用结扎左肾血管法进行肾性高血压大鼠模型造模。造模4周后测血压，将造模成功的大鼠随机分为模型组，卡托普利组，柿叶黄酮高（400 mg/kg）、中（200 mg/kg）、低剂量组（100 mg/kg），每组各10只大鼠。另设空白组大鼠10只。卡托普利组、柿叶黄酮组每天灌胃给药一次，连续给药12周，空白组和模型组给予等体积的生理盐水。末次给药2 h后，使用无创血压测量系统对各组大鼠血压进行测量，放射免疫法测大鼠血浆中血管紧张素Ⅰ（AngⅠ）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、醛固酮（ALD）、降钙素基因相关肽（CGIP）及主动脉组织中AngⅡ的含有量。称量左肾与右肾的总质量，计算左肾重与右肾重比值（LK/IK）。结果与空白组相比，模型组的血压显著升高（P＜0.05），AngⅠ、AngⅡ、ALD、CGIP的含有量也显著升高（P＜0.05），左肾重与右肾重的比值下降（P＜0.05）。与模型组相比，卡托普利组、柿叶黄酮组的大鼠的血压以及血浆中AngⅡ、ALD含有量较模型组低，AngⅠ和CGIP的含有量较模型组高（P＜0.05）。卡托普利组、柿叶黄酮组主动脉中AngⅡ的含有量较模型组低（P＜0.05），左肾重与右肾重的比重有所增加（P＜0.05）。结论柿叶黄酮具有良好的降血压效果，能通过增加血浆中AngⅠ、CGIP的含有量并降低AngⅡ、ALD和主动脉组织中的AngⅡ含有量，从而调节肾素-血管紧张素-醛固酮系统（IAAS），舒张血管平滑肌，使血管收缩力减弱而达到降压的效果。

关键词：柿叶黄酮；肾性高血压；血管紧张素；醛固酮；降钙素基因相关肽

肾性高血压是一种与肾脏实质性病以及肾动脉病变等其他多种因素所引起的患者血压升高的心血管疾病。肾性高血压属于继发性高血压，其病发人群多为30岁前或50岁后［1］。临床症状常表现为病程短、进展快舒张期常伴随腰酸背痛［2］。目前临床上治疗肾性高血压的手段以药物治疗为主。常用的治疗药物有钙离子通道阻滞剂、利尿剂、血管紧张素转换酶抑制、β受体阻滞剂、α受体阻滞剂、硝酸脂类降压药［3］。

经广西中医药研究院鉴定柿叶为柿树科（Ebenaceae）柿树属（Diospyros）植物柿（Diospyros kaki L.f.）的新鲜或干燥叶［4］。其味苦、性寒。柿叶含有黄酮甙、鞣质、酚类、多糖、挥发油、有机酸等物质。具有抗菌消炎、生津止渴、清热解毒、润肺强心、镇咳止血、抗癌防癌等多种功能［5］。本研究主要研究探讨柿叶黄酮对肾性高血压大鼠模型的作用机制，为柿叶黄酮的研究开发提供科学的基础数据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SD大鼠，SPF级，雌雄各半，体质量（200±20）kg，由广西医科大学实验动物中心提供，试验动物生产许可证号SCXK（桂）2009-0002，试验动物合格证号SCXK（桂）2009-0005。

1.2 仪器与试剂 Ge1 doc 2000低温高速离心机（德国西门子公司）；BL-420生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司）；-40℃低温冰箱（青岛海尔股份有限公司）；DFM-96众成γ计数仪；卡托普利片（汕头金石制药总厂，批号140617）；血管紧张素Ⅰ（北京北方生物技术研究所，批号20140705）；血管紧张素Ⅱ（北京北方生物技术研究所，批号20140709）；醛固酮（北京北方生物技术研究所，批号20140628）；降钙素基因相关肽放射免疫试剂盒（北京北方生物技术研究所，批号20140704）。

1.3 实验方法

1.3.1 肾性高血压大鼠模型建立［6］3%戊巴比妥钠（45 mg/kg）腹腔注射到SD大鼠体内，用75%酒精对大鼠腹部左侧皮肤消毒，切口，沿左季肋下1.5～2.0 cm，距脊柱约1.0 cm处用玻璃棒小心分离左肾动脉，用缝线对左肾动脉进行结扎，对肌肉及皮肤逐层缝合。缝合后腹腔注射青霉素钠2×105U预防术后伤口感染。空白组10只SD大鼠进行不结扎左肾动脉的假手术操作。术后4周测定手术大鼠尾动脉收缩压，高于160 mmHg的大鼠可视为肾性高血压模型成功。

1.3.2 柿叶黄酮提取［7］新鲜柿叶用80%乙醇在80℃下回流提取2 h，乙酸乙酯将乙醇对提取液萃取分离后用聚酰胺树脂将乙酸乙酯萃取液吸附分离出柿叶黄酮，含有量达73%。

1.3.3 给药及给药方法将50只肾性高血压大鼠随机分为5组，即模型组，卡托普利组（40 mg/kg），柿叶黄酮

高、中、低剂量组（400、200、100 mg/kg），每组10只。另设空白组大鼠10只。灌胃给药，每天1次，连续给药12周。空白组与模型组每天灌胃给予等体积的生理盐水。

1.3.4 观察指标末次给药2 h后，对各组大鼠血压进行测量，颈椎脱臼处死大鼠。取血，分离血浆。放射免疫法测大鼠血浆中血管紧张素Ⅰ（AngⅠ）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、醛固酮（ALD）、降钙素基因相关肽（CGIP）的含有量。切取0.1 g胸主动脉组织，匀浆后测定AngⅡ的含有量。

1.3.5 统计学方法本研究数据应用SPSS 18.0软件进行统计学数据分析。数据以（±s）表示，多样本均数间比较采用one-way ANOVA分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对肾性高血压大鼠血压的影响与空白组比较，模型组的血压明显升比空白组高，证明造模成功（P＜0.05）；与模型组比较，各治疗组大鼠的血压均有所下降（P＜0.05）。见表1。

表1 柿叶黄酮对肾性高血压大鼠血压的影响（±s，n＝10，1 mm Hg＝0.133 kPa）

注：与空白组比较，1）P＜0.01；与术前比较，2）P＜0.01；与术后4周比较，3）P＜0.05，4）P＜0.01

组别　　剂量/（mg·kg-1）　　血压/mmHg术前　　术后4周　　给药6周空白组120.42±15.72　118.96±16.88　118.85±17.46模型组　-　119.83±17.31　169.42±24.271）2）　170.35±23.411）卡托普利组　40　120.25±15.56　170.33±20.142）　129.87±22.764）柿叶黄酮组　400　119.87±19.97　170.07±19.322）　140.24±21.894）柿叶黄酮组　200　120.12±15.42　168.42±17.962）　148.73±22.724）柿叶黄酮组　100　119.94±16.85　169.38±19.222）　155.61±20.873）-

2.2 柿叶黄酮对肾性高血压大鼠血浆中AngⅠ、AngⅡ、ALD、CGIP的影响与空白组相比，模型组血浆中AngⅠ、AngⅡ、ALD、CGIP的含有量显著升高（P＜0.05）；与模型组相比，各给药治疗组大鼠的血浆中AngⅡ、ALD含有量有所降低，AngⅠ、CGIP的含有量增加（P＜0.05）。见表2。

表2 柿叶黄酮对肾性高血压大鼠血浆中AngⅠ、AngⅡ、ALD、CGRP的影响（±s，n＝10）

注：与空白组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.01；与模型组比较，3）P＜0.05，4）P＜0.01

组别　　剂量/（mg·kg-1）　AngⅠ/（ng·L-1）　AngⅡ/（ng·L-1）　ALD/（μg·L-1）　CGIP/（pg·mL-1）空白组10.53±2.26　390.28±38.56　0.21±0.02　82.76±20.54模型组　-　14.35±3.041）　1 292.11±37.952）　0.30±0.031）　115.16±37.862）卡托普利组　40　15.74±2.651）3）　356.81±40.754）　0.16±0.031）3）　126.83±26.972）3）柿叶黄酮高剂量组　400　15.65±3.432）3）　368.43±36.524）　0.22±0.023）　153.51±24.182）4）柿叶黄酮中剂量组　200　15.14±2.811）3）　429.65±34.931）4）　0.23±0.043）　140.72±23.512）3）柿叶黄酮低剂量组　100　14.75±2.961）3）　573.74±48.592）4）　0.25±0.021）　133.68±23.892）3）-

2.3 柿叶黄酮对肾性高血压大鼠主动脉组织中AngⅡ的影响与空白组相比，模型组主动脉组织中AngⅡ的含有量显著升高（P＜0.05）；与模型组相比，各给药治疗组大鼠的主动脉组织中AngⅡ的含有量均下降（P＜0.05）。见表3。

2.4 柿叶黄酮对肾性高血压大鼠左肾重与右肾重比值的影响与空白组相比，模型组左肾重与右肾重比值明显降低（P＜0.01）；与模型组相比，各给药治疗组左肾重与右肾重比值均有增加（P＜0.05）。见表4。

表3 柿叶黄酮对肾性高血压大鼠主动脉组织中AngⅡ的影响（±s，n＝10）

注：与空白组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.01；与模型组比较，3）P＜0.05，4）P＜0.01

组别　　剂量/（mg·kg-1）　AngⅡ/（ng·L-1）空白组538.82±58.54模型组　-　1 027.91±72.862）卡托普利组　40　602.68±66.794）柿叶黄酮高剂量组　400　650.43±57.431）4）柿叶黄酮中剂量组　200　721.85±68.161）4）柿叶黄酮低剂量组　100　826.37±73.982）3）-

表4 柿叶黄酮对肾性高血压大鼠左肾重与右肾重比值的影响（±s，n＝10）

注：与空白组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.01；与模型组比较，3）P＜0.05

-1左肾重与右肾重比值空白组组别　　剂量/（mg·kg）　　左肾/mg　　右肾/mg 1 435.86±68.40　1 439.95±72.47　0.99±0.01模型组　-　902.41±65.522）　1 526.83±70.83　0.59±0.022）卡托普利组　40　1 035.37±52.471）3）　1 560.87±65.81　0.66±0.031）3）柿叶黄酮高剂量组　400　1 006.82±56.311）3）　1 549.04±79.84　0.64±0.021）3）柿叶黄酮中剂量组　200　987.43±69.572）　1 558.49±81.67　0.63±0.022）柿叶黄酮低剂量组　100　942.75±57.792）　1 551.78±60.75　0.60±0.032）-

3 讨论

造模后的大鼠左肾重量和左肾重与右肾重比值较空白组明显降低，而右肾的重量则明显高于空白术组，证明造模术后的大鼠左肾明显萎缩，右肾出现了代偿性肥大说明动物模型复制成功。

通过对大鼠左肾动脉进行结扎，肾动脉血流量减少，激活肾素-血管紧张素-醛固酮系统（IAAS）。IAAS失去平衡后，由肝脏产生的血管紧张素原被释入静脉血中的肾素水解为AngⅠ，再经肺循环中血管紧张素转化酶（ACE）的催化转化为AngⅡ。AngⅡ含有量增加，小动脉平滑肌收缩，外周阻力增加。同时刺激肾上腺皮质球状带，使ALD分泌增加，从而使肾小管远端集合管钠再吸收增强，导致体内水与钠潴留，引起血压升高［6，8-9］。

AngⅠ在正常的血浆浓度下无生理活性，只作为转换酶的底物，的含有量能够反映生成底物的含有量［10］。AngⅠ需通ACE的催化才能转化成AngⅡ。由于卡托普利是一种血管紧张素转化酶抑制剂，抑制ACE的活性，因此AngⅠ向AngⅡ的转换受阻，血浆中剩余AngⅠ增多，故卡托普利组血浆AngⅠ含有量比模型组的高，AngⅡ含有量降低。实验检测结果显示柿叶黄酮组的AngⅠ含有量也比模型组高，AngⅡ含有量低于模型组。推测柿叶黄酮通过抑制血管紧张素转化酶，减少AngⅠ向AngⅡ的转换，使血管收缩力减弱而使血压下降。ALD的生成主要受AngⅡ、促肾上腺皮质激素以及体液中Na＋、K＋水平调节［11］。AngⅡ的含有量下降ALD的含有量也随之降低，故卡托普利组与柿叶黄酮组中ALD的含有量较模型组低。CGIP是一种具有强大生理活性的舒血管因子。CGIP的含有量上升可使肾动脉舒张、外周阻力降低，血压下降。实验结果显示，柿叶黄酮组CGIP的含有量比模型组高，推测柿叶黄酮提高血浆CGIP的含有量，舒张血管平滑肌使血压下降。

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作者简介：邓海英（1970—），女，主管药师，从事肾性高血压基础研究工作。Te1：13977776009，E-mai1：denghaiying2012@163.com

基金项目：广西高校科学技术研究项目（LX2014085）