蛤蚧肽溶液对非酒精性脂肪肝小鼠脂代谢、肝功能及炎性因子的影响*

潘　磊　崔荣岗　赵保辉　李　华　张忠勇　王旭初

河北省沧州中西医结合医院(沧州 061001)



蛤蚧肽溶液对非酒精性脂肪肝小鼠脂代谢、肝功能及炎性因子的影响*

潘磊崔荣岗赵保辉李华△张忠勇王旭初

河北省沧州中西医结合医院(沧州 061001)

摘要目的：探讨蛤蚧对非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠脂代谢、肝功能及炎性因子的影响。方法：高脂饲料法复制NAFLD小鼠模型，以灌服复方蛋氨酸胆碱溶液为对照药，蛤蚧组小鼠各亚组分别灌服高中低剂量蛤蚧肽溶液。以8周为观察期，记录各组小鼠干预前后脂代谢、肝功能及炎性因子指标变化差异。结果: 干预8周后，各组小鼠MDA水平均同干预前对比无统计学意义；除空白对照组及模型组小鼠各检验指标较干预前无明显变化外，其余组小鼠TG、TC等脂代谢指标，ALT、AST等肝功能指标及IL-6、TNF-α等炎性因子指标均较干预前显著降低，SOD水平则显著提升；低剂量组各指标变化幅度均小于中、高剂量组和阳性对照组小鼠；中、高剂量组和阳性对照组小鼠组间对比无统计学意义。结论: 中药蛤蚧具有良好的抗炎、调节脂质代谢功效，将其应用于NAFLD小鼠的临床治疗中，能有效改善其肝功能，减轻炎性反应，保肝效果较为突出。

主题词 非酒精性脂肪肝@蛤蚧肽溶液脂类代谢肝功能炎性因子

非酒精性脂肪肝(NAFLD)是一种以肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的病理综合征，可大致分为原发性NAFLD和继发性NAFLD两种，原发性NAFLD的发生同遗传易感性或胰岛素抵抗等因素相关，继发性NAFLD则是肥胖、合并糖尿病、高血脂症、营养过剩等因素共同作用的结果[1-2]。当前临床对西药治疗NAFLD的研究报道较多，但鲜有就中药蛤蚧在NAFLD患者中的临床应用价值展开分析[3]。对此，本次研究对50只小鼠中的24例予以灌服不同剂量蛤蚧溶液的方式，以为探讨蛤蚧对NAFLD小鼠脂代谢、肝功能及炎性因子的影响，现报告如下。

1材料1.1实验动物随机选取50只健康雄性BALB/c小鼠，鼠龄6～8周，平均(7.2±0.6)周；体重(200～230)g,平均(217.3±3.9)g；饲养温度温度(22±2)℃，湿度(55±5)%，12h循环照明。所有受试小鼠均在入组前3d内常规条件下适应性饲养，自由饮食、饮水。

1.2材料及仪器高脂饲料(Research Diets公司生产,规格12.5kg/箱，产品编码ys000495),复方蛋氨酸胆碱片(规格：48s,国药准字H22025488),复方蛋氨酸胆碱溶液为1片复方蛋氨酸胆碱片混合10mL生理盐水制备。蛤蚧肽溶液由我院制剂室制备，鲜活蛤蚧去头与内脏，低温反复冻融3个周期，0.3%氯化钠提取可溶性蛋白质，过筛后滤液离心，再使用超滤膜过滤，去除大分子物后滤液行冷冻干燥，电泳鉴定纯度，制成相对分子质量为3000～20000的多肽制品；总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)等试剂盒均购于上海岚派生物科技有限公司；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等试剂盒购于上海常斤生物科技有限公司；AU5800全自动生化分析仪由美国贝克曼库尔特公司生产。

2实验方法2.1模型建立及分组将适应性喂养3d的50只小鼠随机分为空白对照组(n=8)、模型组(n=8)、阳性对照组(n=10)和蛤蚧组(n=24)四组，再将蛤蚧组小鼠随机分为高、中、低剂量等3个亚组，各8只。除空白对照组小鼠喂饲普通饲料外，模型组、阳性对照组、蛤蚧组小鼠均喂饲高脂饲料法复制NAFLD小鼠模型，4组小鼠均正常饮水。

2.2给药方法空白对照组及模型组小鼠每日灌服生理盐水，阳性对照组小鼠灌服复方蛋氨酸胆碱溶液，蛤蚧组小鼠则灌服蛤蚧肽溶液，低剂量组灌服100mg/kg，中剂量组灌服200mg/kg，高剂量组灌服400mg/kg，1d1次。持续干预8周后观察各指标差异。

2.3指标检测及方法ALT、AST等肝功能指标由全自动生化仪测定；TG、TC等血脂指标由全自动生化仪测定；SOD、MDA等氧化指标均采用比色法测定；IL-6、TNF-α等炎性因子水平则由双抗体夹心法测定。

2.4统计学方法 有关实验数据都用均数±标准差来表示，组间比较采用方差分析，用SPSS16.0统计软件分析。

3结果3.1脂代谢指标干预前，空白对照组小鼠TG、TC、MDA等脂代谢指标均显著低于其他五组小鼠，且SOD水平显著高于其他三组小鼠(P<0.05)；干预8周后，各组小鼠MDA水平均同干预前对比无统计学意义(P>0.05)；除空白对照组及模型组小鼠各脂代谢指标较干预前无明显变化外，其余组小鼠TG、TC等脂代谢指标均较干预前显著降低，SOD水平则显著提升(P<0.05)；其中低剂量组各指标变化幅度小于中、高剂量组和阳性对照组小鼠(P<0.05)，中、高剂量组和阳性对照组小鼠组间对比无统计学意义(P>0.05)，见表1。

3.2肝功能指标见表2，干预前，空白对照组小鼠ALT、AST等肝功能指标均显著低于其他5组小鼠(P<0.05)；干预8周后，除空白对照组及模型组小鼠各肝功能指标较干预前无明显变化外，其余组小鼠ALT、AST等肝功能指标均较干预前显著降低(P<0.05)；其中低剂量组各肝功能指标降幅均小于中、高剂量组和阳性对照组小鼠(P<0.05)，中、高剂量组和阳性对照组小鼠组间对比无统计学意义(P>0.05)。

3.3炎性因子见表3，干预前，空白对照组小鼠IL-6、TNF-α等炎性因子指标均显著低于其他5组小鼠(P<0.05)；干预8周后，除空白对照组及模型组小鼠各炎性因子指标较干预前无明显变化外，其余组小鼠IL-6、TNF-α等炎性因子指标均较干预前显著降低(P<0.05)；其中低剂量组各炎性因子指标降幅均小于中、高剂量组和阳性对照组小鼠(P<0.05)，中、高剂量组和阳性对照组小鼠组间对比无统计学意义(P>0.05)。

4讨论NAFLD是一种临床常见的消化内科疾患，以合并“三高”、体型肥胖、存在不良饮食习惯、缺乏日常锻炼、有家族遗传史等人群为主要患病群体，患者患病后多无自觉症状，少数可出现消化不良、肝脾肿大、肢体乏力等非特异性症状或体征[4-5]。早期诊断存在一定隐匿性，对患者健康安全威胁较大，积极有效的治疗干预是促进病情转归、改善其生活质量的关键,当前临床对NAFLD的治疗研究多集中于西药方面[6]。少有报道就中药材对NAFLD的临床疗效及应用价值展开系统分析，对此，部分学者将非酒精性脂肪肝临床治疗的研究重点由西药逐渐向中西医结合方向转移，试图利用中医药辨证论治、整体调理的优势改善患者预后水平，促进其病情转归。

蛤蚧是一种国家二级重点保护爬行动物，现代药理研究表明，制备后的蛤蚧具有调节激素、抗衰老、改善内质网应激忍耐性、抗炎症、抗氧化等多种功效，在临床多种疾病的治疗中发挥积极影响[7]。当前医学界就中医药对NAFLD的疗效研究多停留在活血化痰方、护肝降脂方等药方，鲜少针对蛤蚧的临床应用价值展开深入分析[8-9]。对此，本次研究选取50只健康雄性小鼠为受试对象，发现予以蛤蚧肽溶液的蛤蚧组小鼠脂代谢水平、炎性因子水平及肝功能指标等改善情况均显著优于建模后灌服生理盐水的模型组小鼠，同欧丽娜等[10]报告结论基本一致，证实蛤蚧作为一种较常见的中药材，具有抗炎、调节机体脂质代谢水平的功效，能以此改善机体肝功能，促进病情转归，提高预后水平[11]。此前已有研究表明，蛤蚧性平、味咸、归肺经、肾经，具有止咳、平喘、补肺、益肾、助阳、益精的功效，可用于肾虚阳痿、虚劳咳嗽、小便频数等症状的治疗中，均可获得良好的疗效[12-13]。随着相关研究的深入，越来越多学者发现，蛤蚧除了上述功效外，还具有提高机体免疫力、延缓衰老、抗炎、提高机体应激作用、改善细胞对内质网应激忍耐性、调节脂质代谢水平等其他作用，临床应用范围较广[14]。

相关研究表明，TNF-α作为一种炎性反应的细胞因子，可诱导机体内其他促炎因子增长，从而导致机体炎症反应失衡，加剧病情发展。该炎性因子直接参与NAFLD的形成及发展过程，可通过损伤肝窦内皮细胞、加快白细胞附着于肝窦内皮速度等方式加重对患者肝功能的损害程度，推动病情发展，影响其预后恢复。不仅如此，还有报道称，TNF-α能不同程度地干扰胰岛素功能，降低机体对胰岛素的敏感性，从而造成糖代谢及脂代谢紊乱症状，加重肝脏及其外围组织的胰岛素抵抗程度[15-16]。蛤蚧具有良好的抗炎作用，其进入机体后能有效抑制TNF-α、IL-6等炎症因子水平，从而缓解炎症反应对肝功能的不良影响，达到促肝功能恢复、改善患者预后水平的功效。除上述结论外，本研究还就不同剂量的蛤蚧制剂对改善NAFLD小鼠的价值展开分析，发现中、高剂量组临床疗效显著优于低剂量组，但中、高剂量组小鼠在各检测指标对比上差异较小，同谢晶日等报告结论基本一致[17]。因本次研究并未将不良反应纳入探究范围，难以准确评估蛤蚧的用药安全性，故从治疗安全性角度考虑，建议患者采用中剂量给药方案，在确保临床疗效的同时提升用药安全性，降低不良反应发生风险，全面提升其预后质量。

本次纳入研究的小鼠数量有限，难以就中药蛤蚧对NAFLD小鼠各炎性因子、脂代谢指标及肝功能指标的影响予以更准确、深入的探究，对此笔者可扩大样本容量并尽可能排除相关干扰因素后予以进一步分析，以获得更精确的结论，为NAFLD的临床治疗提供新思路。

参考文献

[1]杨蕊旭,范建高.非酒精性脂肪性肝病的流行现状[J].临床内科杂志,2015,33(5):293-296.

[2]赵紫烟.非酒精性脂肪肝的危险因素及脂肪肝诊断的研究进展[J].医学综述,2011,17(10):1522-1524.

[3]岳维芸,李莹.非酒精性脂肪肝的诊断与中医药治疗进展[C].中华中医药学会第十五届内科肝胆病学术会议暨国际中医药管理局专科专病协作组(肝病组、传染病组)会议论文集,2012:540-544.

[4]吴翠霞.非酒精性脂肪肝相关危险因素的调查分析[J].重庆医学,2011,40(4):364-365.

[5]李敏，周健.非酒精性脂肪肝发病机制研究进展[J].陕西医学杂志,2012,41(10):1399-1400.

[6]黄婷婷,周玉荣,张向君,等.非酒精性脂肪肝治疗进展[J].医学综述,2015,31(8):1406-1409.

[7]廖成成,臧宁,班建东，等.黑斑蛤蚧对哮喘模型小鼠的免疫调节的影响[J].中成药,2014,36(10):2037-2040.

[8]徐建良,盛国光,李刚，等.活血化痰方对非酒精性脂肪肝大鼠炎性因子的影响[J].中国中西医结合消化杂志,2013,21(9):479-481.

[9]刘浩.护肝降脂方治疗非酒精性脂肪肝50例[J].中国实验方剂学杂志,2014,20(20):214-217.

[10]欧丽娜,张建军,王林元，等.具有雌激素样作用的补肾阳药对脂代谢的影响[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(8):371-374.

[11]申琳,邹爱英,孟庆安,等.蛤蚧的辨析[J].天津中医药,2010,27(6):518-519.

[12]代三红.中医辨证治疗非酒精性脂肪肝516例[J].陕西中医,2011,32 (11):1478-1479.

[13]孔凤利.中药蛤蚧的鉴别[J].浙江中医药大学学报,2010,34(3):433-433.

[14]杨帆,席伟,谢裕安，等.蛤蚧肽对小鼠免疫功能的调节作用[J].广西医科大学学报,2011,28(3):342-344.

[15]王军英,王红梅,王军,等.非酒精性脂肪肝患者血清TNF-α、IL-6水平及意义[J].中国现代医学杂志,2013,23(33):42-46.

[16]金世禄,屈冬冬.非酒精性脂肪肝患者血清TNF-α、IL-6水平变化及其与胰岛素抵抗的相关性[J].实用临床医药杂志,2015,19(5):48-50.

[17]谢晶日,朱韦儒,朱岩,等.非酒精性脂肪肝的中医治疗进展[J].中医药信息,2011,28(5):110-111.

(收稿2015-10-22；修回2015-11-30)

Effect of Gekko gecko peptide solution on lipid metabolism liver function and inflammatory factors in rats with nonalcoholic fatty liver disease Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine in Cangzhou Hebei Province(Cangzhou 061001)

Pan LeiCui RonggangZhao Baohuiet al

ABSTRACTObjective：To investigate the effect of Gekko gecko on lipid metabolism, liver function and inflammatory factors in rats with nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD).Methods：NAFLD rats model was duplicated by high fat diet method. Mice administered orally compound methionine choline solution were included in the control group. The subgroups of Gekko gecko group were administered orally high, medium and low Gekko gecko peptide solution, respectively. Taking 8 weeks as the observation period, the differences in the changes of lipid metabolism, liver function and inflammatory factor indexes between groups before and after the treatment were recorded.Results：8 weeks of intervention later, there were no statistically significant differences in MDA levels in the group, compared with those before the intervention. Except that the test parameters of mice in the blank control group and the model group didn’t changed significantly, compared with those before the intervention TG, TC and other lipid metabolism indicators ALT AST and other liver function indicators and IL-6, TNF-α and other inflammatory factors in other groups were significantly lower than those before intervention while SOD levels were significantly improved. The changes of the indexes in the low dose group were smaller than those in the midium and high dose group and the positive control group.The differences between the midium, high dose group and the positive control group were not statistically significant. Conclusion：The traditional Chinese medicine Gekko gecko has good effects of anti-inflammation and regulating lipid metabolism.Its application in clinical treatment of rats with NAFLD can effectively improve the liver function and reduce the inflammatory responses.The liver protection effect is prominent.

KEY WORDSNonalcoholic fatty liver disease@Gekko gecko lipid metabolismLiver function inflammatory cytokines

【中图分类号】R575.5

【文献标识码】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.03.052

*河北省中医药管理局计划项目(2015290)

△河北省河间市人民医院(沧州 061001)