祛瘀接骨饮促进骨折早期愈合中对一氧化氮合成酶的影响*

晏　梅　赵淑婷　李建强　崔永杰　李志东　卢军利

河北省唐山市人民医院(唐山 063001)



祛瘀接骨饮促进骨折早期愈合中对一氧化氮合成酶的影响*

晏梅赵淑婷李建强崔永杰李志东卢军利

河北省唐山市人民医院(唐山 063001)

摘要目的： 观察祛瘀接骨饮在骨折早期愈合过程中对一氧化氮合成酶(NOS)的影响。方法：选择肱骨干闭合性骨折病例72例，随机分为两组，对照组36例，采用西医保守治疗方法，治疗组36例在西医治疗基础上加服祛瘀接骨饮，每日1剂，连续服用21d。两组在治疗期间分别于4d、7d、14d、21d时静脉采血，分析血清中NOS的活性，比较两组在骨折早期愈合过程中对NOS的影响。结果：治疗组治疗期间血清中NOS表达活性明显高于对照组，且未见明显不良反应。对照组有患肢因发生剧烈肿胀，频繁调整夹板松紧度，增加骨折移位、软组织嵌入、桡神经损伤、骨不愈合等风险。结论：祛瘀接骨饮通过对NOS活性表达的调控，可以减轻肢体肿胀程度，增强骨折断端成骨能力，促进骨折愈合。

主题词 骨折愈合/中西医结合疗法一氧化氮合成酶@祛瘀接骨饮

骨折愈合是机体结缔组织的一种再生修复过程。一氧化氮合成酶(NOS)是一氧化氮(NO)合成过程中的关键酶，是由L-精氨酸(L-Arginine)氧化途径产生，分两大类，有三种异构体的同工酶：一类称原生性NOS(cNOS)包括神经原性(nNOS)和内皮细胞性NOS(eNOS)，另一类称诱生性NOS(iNOS)。在骨折愈合过程中， NOS在机体内可充当信使、介质和细胞功能调节因子，对多种器官、系统的功能具有重要的调节作用，NO作为一种细胞调节因子，受NOS调节，可介导应力、炎性细胞因子等调节作用， NOS参与合成并释放的NO既参与骨折愈合过程中血液供应的调节，同时也参与成骨细胞(OB )与破骨细胞(OC)功能的调节，对骨折愈合起着重要的作用。此研究通过观察祛瘀接骨饮对骨折患者血液中NOS表达的影响，从而探讨其促进骨折愈合的可能机制。

临床资料 选取本院自2011年1月～2013年2月门诊治疗的肱骨干闭合性骨折患者共72例。对照组：36例，男20例，女16例；年龄13～67岁，平均38.5岁；骨折部位：肱骨干中上段骨折11例，肱骨干中段骨折13例，肱骨干中下段骨折12例。治疗组：36例，男17例，女19例；年龄16～66岁，平均40.5岁；骨折部位：肱骨干中上段骨折10例，肱骨干中段骨折13例，肱骨干中下段骨折13例。两组患者对比，在性别、年龄、骨折原因及骨折部位分布上，无明显差异，有可比性。

纳入标准中医诊断标准参照尚天裕1995年出版发行的《中国接骨学》诊断标准，所有患者均符合闭合型非粉碎性骨折，段端无明显移位、分离和血管神经损伤症状和体征。

排除标准 患者有高血压、糖尿病、脑血管病，血常规、肝肾功能明显异常，血脂代谢紊乱及血液系统基础疾病患者不在观察范围，以去除影响血清中NOS活性的其它因素。

治疗方法 治疗组：在西医治疗基础上，采用祛瘀接骨饮，具体方药为穿山甲、血竭、乳香、没药、木香、酒大黄、生地、当归尾、骨碎补、煅自燃铜、续断、马钱子、天花粉各10g， 由唐山市人民医院中药制剂科，制备煎煮并提供，每日1剂。对照组：单纯西医骨科治疗。两组疗程均为21d。所有患者均常规抗炎、休养、指导功能锻炼等对症治疗，并在治疗过程中的4d、7d、14d、21d分别对患者晨起采静脉血，测定血清NOS的活性。

检测方法仪器和试剂:酶标仪由(美国BIOTEK公司提供)； NOS及其异构体酶ELISA试剂盒由(上海恒远生物科技有限公司提供)应用定性夹心免疫检测技术，采用酶联免疫法进行检测按试剂盒的说明测得NOS和iNOS酶活性，而cNOS酶活性既为NOS酶活性减去iNOS酶活性所得，选定符合标准的骨折患者，在未进行任何治疗前的，所取得血清样本的值，为酶活性的生理值，使用不含热原和内毒素的试管，分别在4d、7d、14d、21d时静脉采血，采血前12h禁食，收集血液后，离心10min将血清和红细胞迅速小心地分离，并取血清于2～8℃冰箱保存待测。

治疗结果血清NOS活性的变化对照组和治疗组在4d、7d、14d时有非常显著的差异，见表1。两组NOS活性均从骨折后4d时开始升高，在14d时达到高峰，随后降低，在21d时基本恢复到治疗前的数值。

血清iNOS活性的变化治疗组和对照组比较，7d、21d时有非常显著差异(P<0.01)。骨折后，两组iNOS活性都开始上升，在14d达到高峰时，对照组大于治疗组，21d时治疗组下降快于对照组。

血清cNOS活性的变化治疗组与对照组在4d、7d、14d时相比有非常显著的差异；骨折后两组cNOS活性均开始上升，在14d时达到峰值，随后逐渐下降，在21d时下降到骨折后4d的值。

药物不良反应两组骨折患者治疗前后血常规、肝肾功能均无明显变化。治疗组未见明显不良反应；对照组患肢剧烈肿胀4例，因组织剧烈肿胀，频繁调整夹板松紧度，导致骨折断端软组织嵌入，而行手术切开复位内固定治疗1例，肱骨干中下段骨折，合并桡神经轻度损伤1例，经指导功能锻炼和营养神经等药物对症治疗，于伤后4周手背桡侧皮肤感觉障碍区基本消失，再无其它不良反应发生。

讨论影响骨折愈合的因素众多，目前为止没有一种理论可以完全阐释骨折愈合中的所有问题，骨折发生的早期由于骨折断端邻近组织中的血管破裂出血，导致经脉受伤，气血受阻，积淤不散，肿胀疼痛，一般以活血化瘀为治疗原则。我科室在中医辨证论治原则指导下，根据骨组织愈合的特点组方，研制成祛瘀接骨饮以行气活血，通瘀导滞，扶正通络从而达到局部消肿、止痛、促进骨折愈合的目的[1]。组方中自然铜辛苦、平，骨碎补、续断苦、温，同归肝肾经，破积瘀、疗折伤、补肾强骨为君药；均能有效促进成骨细胞的分化、增殖，防止成骨细胞凋亡增加骨密度，保护骨小梁结构，提高骨强度。乳香、木香辛苦、温，没药苦、平，同归心肝脾经，活血止痛，抗炎健脾、消肿生肌为臣药；大黄苦寒，归肝脾经，收涩止血、抗炎逐瘀为佐药；因其能缩短凝血时间，降低毛细血管通透性，改善血管脆性，能使血小板、纤维蛋白原增加，血管的收缩活性增加，骨痂形成过程中促进成骨细胞分化促进骨折愈合通过影响成骨细胞(OB )与破骨细胞(OC)之间的关系来影响骨折愈合过程[2-4]。当归尾破血止痛、赤芍凉血、透骨草、马钱子散瘀消肿为使药，诸药共奏祛瘀接骨、消肿、止痛之功[5]。

本临床观察显示：NOS的活性从4d开始两组均开始增加，在14d时达高峰，而在4d、7d、14d时治疗组明显高于对照组；iNOS的活性，治疗组相对对照组都是迅速达到峰值后又迅速降至生理值；cNOS的两组在14d时达峰值，且治疗组高于对照组，以后下降。相关研究表明，在骨折愈合早期低浓度的NO可以促进OB的增值及骨基质分泌功能，还可以促进OC前体向OC转换和提高OC细胞的活性，促进骨折愈合[6]。但由于细胞因子诱导产生的iNOS产生浓度的NO，高浓度的NO可降低OB的活性，抑制DNA的合成、增殖、抑制碱性磷酸酶活性、骨钙素产生，对骨折产生负调节作用[7]。本实验证实祛瘀接骨饮对iNOS的活性影响是上升和下降速度均很快，高浓度的iNOS在体内存在的时间比对照组短，因此也可能是其机制之一。

综上所述，祛瘀接骨饮能加快骨折局部肿胀消退、镇痛，促进骨折早期愈合，其促进骨折愈合的机理和NOS的表达有密切关系，由于本组实验观察病例数量较小，尚需大样本实验进一步探讨和研究。

参考文献

[1]邵进宝.速骨汤治疗骨折迟缓愈合疗效观察[J].陕西中医, 2015,36(3):320-321.

[2]伍海昭,朱敏,詹红生,等.骨碎补总黄铜对去卵巢大鼠骨组织Ⅰ型胶原表达及骨代谢的影响[J].中医正骨杂志,2014,20(4):11-14.

[3]王云华,刘继华,陈凡波,等.川续断中三萜皂苷类成份的研究概况[J].特产研究, 2015,16(2):74-78.

[4]彭丽华,高俊熙,萧永沁,等.外敷中药复方对促进骨折愈合的体外研究[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(1):151-155.

[5]丛铁民.中药汤剂治疗风湿性关节炎112例疗效观察[J].按摩与康复医学, 2012,33(6) :343-344.

[6]Lagumdzija A,Ou G,Petersson M,et al.Inhibited anbolic effect of insulin-like growet factor I on stromal bone marrow cells in endothelia nitric oxide synthase knockout mice[J].Acta Phy siol Scand,2004,182(1) :29-35.

[7]杨辉，唐成林，长青,等.在大鼠骨骼肌急性损伤修复过程中按摩对神经型一氧化氮合成酶、肝细胞生长因子mRNA表达的影响[J].中国康复医学杂志,2015,37(3) :224-230.

(收稿2015-11-02；修回2015-12-10)

【中图分类号】R274.1

【文献标识码】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.03.015

*河北省中医药管理局中医药类科研计划课题(2015243)