海兰褐蛋鸡感染鸡伤寒沙门菌的诊断*

司振书，殷国政，路建彪，李玉保

（聊城大学农学院，山东 聊城 252000）

海兰褐蛋鸡感染鸡伤寒沙门菌的诊断*

司振书，殷国政，路建彪，李玉保

（聊城大学农学院，山东 聊城 252000）

某蛋鸡养殖场90日龄海兰褐蛋鸡疑似沙门菌感染，为确定病原，对该鸡群随机采血，通过平板凝集试验进行鸡白痢-鸡伤寒沙门菌的血清学诊断，同时，无菌采取病鸡肝脏进行了细菌分离培养、生化鉴定及药敏试验。结果，血清阳性率达54.5%，分离菌在麦康凯琼脂上形成无色、透明、有光泽的圆形菌落，能发酵甘露醇、甘露糖、蕈糖、果糖、麦芽糖，不能发酵乳糖、棉子糖、蔗糖，鸟氨酸脱羧试验阴性，符合鸡伤寒沙门菌的生化特性。分离菌对头孢吡肟、头孢噻肟、氟苯尼考及丁胺卡那敏感，而对环丙沙星、氧氟沙星及强力霉素等耐药。表明该鸡群受到了鸡伤寒沙门菌的感染，采取了综合防治措施，病情得到有效控制。

海兰褐；蛋鸡；鸡伤寒沙门菌；分离鉴定

鸡伤寒沙门菌(Salmonella gallinarum)又称鸡沙门菌，为肠杆菌科沙门菌属D血清群的成员，鸡和火鸡都可感染，引起产蛋前各种日龄鸡的败血性伤寒症，也可引发成年母鸡的卵巢炎[1]。禽伤寒发生于各种日龄的鸡，但多发于生长期，特别是3月龄到产蛋期的母鸡，雏鸡如果不是经卵感染，很少发病[2]。病原菌在病鸡粪便和分泌物中大量存在，主要经消化道或眼结膜感染。2016年2月，阳谷县某养鸡场养殖海兰褐蛋鸡9500羽，90日龄出现消瘦，精神萎顿、鸡冠苍白等症状，病鸡排黄绿色或灰白色稀粪。发病严重的陆续衰竭死亡，死亡率达7.8%。剖检主要病变为：肝脏肿大，质脆，呈青铜色，有大量弥漫性出血点，有的肝脏破裂，剖开从腹腔流出大量血色腹水，脾脏淤血性肿大。对该鸡群进行了血清学和病原学诊断，经鉴定分离到1株鸡伤寒沙门菌，并对该菌进行了药敏试验，采取了对发病鸡隔离、淘汰、敏感药物治疗、消毒、加强饲养管理等综合措施，发病情况逐渐好转，至150日龄鸡群产蛋率达50%。

1 材料与方法

1.1 材料与设备 普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板培养基由聊城大学预防兽医实验室制备。鸡白痢-鸡伤寒多价染色平板凝集试验抗原 (批号2014003)，鸡白痢-鸡伤寒多价染色平板凝集试验阳性血清(批号2014001)，购于北京中海生物科技有限公司；各种细菌微量生化管及药敏纸片，购于杭州天和微生物试剂有限公司。

1.2 病料的采取 随机选取22只鸡，分别翅静脉采血1～1.5ml，2000prm离心10min，析出血清，用于血清学诊断。无菌采取发病鸡肝脏进行细菌的分离。

1.3 凝集试验 将鸡白痢-鸡伤寒多价染色平板凝集试验抗原摇匀，用移液器吸取抗原30μl于洁净的载玻片，吸取待检血清30μl滴于抗原液上，不断倾斜摇动玻片，使抗原与血清充分混合，3min内观察结果，同时做阴性和阳性血清对照。如出现较大颗粒凝集块，液体透明为阳性，若不出现凝集块，则为阴性。

1.4 细菌的分离培养 无菌取病鸡肝脏划线接种于麦康凯琼脂，37℃恒温培养24h，观察结果，挑取单个菌落用麦康凯琼脂进行纯培养。将纯化的单个菌落分别接种于普通琼脂平板及伊红美蓝琼脂平板，37℃培养24h，观察生长情况。

1.5 细菌的形态观察 将分离到的细菌纯培养物进行革兰氏染色，镜检。

1.6 细菌的鉴定 将分离纯化的细菌分别接种于乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、赖氨酸、鸟氨酸、枸橼酸盐、棉子糖等适宜的生化鉴定管，置37℃恒温箱培养，按使用说明书观察判定结果。

1.7 药敏试验 挑取分离纯化的细菌菌落，用灭菌生理盐水稀释混匀，校正浓度为0.5麦氏标准，用无菌棉棒蘸取少量菌液，均匀涂抹于营养琼脂表面，然后用无菌镊子取不同药敏纸片紧贴其上，各纸片应均匀分散开，置37℃恒温箱培养18～24h，观察并测量抑菌圈直径，判断标准按2010版CLSI M100-S20执行。选取敏感药物进行治疗。

2 结果

2.1 凝集试验检测结果 经检测，22份血清有12份为阳性，10份为阴性，阳性率达54.5%。

2.2 细菌的分离培养结果 分离菌在麦康凯琼脂平板上，形成光滑、湿润、隆起、圆形的无色透明菌落；在普通琼脂上形成光滑、湿润、灰白色、透明的菌落，多数菌落呈圆形，边缘整齐；在伊红美蓝琼脂上呈表面光滑、圆形、微凸、边缘整齐、淡蓝色的小菌落。

2.3 细菌形态染色特点 分离菌呈杆形，革兰氏染色阴性，两端钝圆，多单个存在。

2.4 分离菌的生化试验结果 分离菌的生化鉴定结果为：蕈糖+，蔗糖-，赖氨酸脱羧酶+，乳糖-，尿素酶-，靛基质试验-，七叶苷-，丙二酸盐-，鸟氨酸脱羧酶-，山梨醇+，OF+，水杨素-，枸橼酸盐-，肌醇-，精氨酸-，棉子糖-，β半乳糖+，甘露醇+，侧金盏花醇-，赤藓醇-，甘露糖+、麦芽糖+，果糖+，卫矛醇-。

2.5 药敏试验结果 分离到的鸡伤寒沙门菌的敏感药及抑菌圈直径分别为：头孢吡肟31mm，头孢噻肟28mm，氟苯尼考26mm，丁胺卡那25mm，而对环丙沙星、妥布霉素、强力霉素、阿奇霉素、恩诺沙星等耐药。

3 讨论

李凤玲等[3]对南京规模化蛋鸡场进行了鸡白痢、鸡伤寒的血清学调查，海兰蛋鸡的阳性率为12.6%，而该鸡群鸡白痢、鸡伤寒血清阳性率高达54.5%，是前者的4.33倍，说明该鸡群带菌、感染较为严重。

鸡伤寒沙门菌与鸡白痢沙门菌在生化特性上有些差异，可通过鸟氨酸脱羧试验进行鉴别，前者不能脱羧，而后者相反[4]。另外，鸡伤寒沙门菌能发酵麦芽糖，而鸡白痢沙门菌则不能[1]。本研究分离到的菌株鸟氨酸脱羧酶试验阴性，能发酵麦芽糖，这点与武志强[5]报道的广东分离株一致，但也有不同，主要是本分离菌不能发酵卫矛醇，而后者卫矛醇阳性。刘素英等[6]从陕西分离鉴定的13株鸡伤寒沙门菌均不能发酵卫矛醇，与本分离菌相同。说明鸡伤寒沙门菌不同地域、不同来源、不同年代的菌株对卫矛醇的反应可能不一致。综合分离菌的形态染色、培养特性及生化特点判断，该菌为鸡伤寒沙门菌。

分离到的鸡伤寒沙门菌，对氟苯尼考、头孢吡肟、头孢噻肟、丁胺卡那等敏感，对环丙沙星、妥布霉素、强力霉素、阿奇霉素、恩诺沙星等耐药，兽医临床应重视该菌的感染及流行情况，合理使用抗菌药物。吴白等对15株禽源沙门菌进行了药敏试验，分离株来源鸡场长期使用喹诺酮类和氨基糖苷类药物，结果表明分离株对喹诺酮类和氨基糖苷类等药物耐药率较高，而对没用过的头孢曲松钠、丁胺卡那霉素等耐药率则很低或均敏感，说明耐药菌株的出现与药物的使用有一定的相关性[7]。

立即对发病鸡进行隔离治疗，对发病严重的鸡只淘汰、深埋。对鸡舍地面、用具进行全面彻底消毒，及时清理粪便并发酵处理。根据药敏试验结果，头孢噻肟、头孢吡肟在体外敏感性强，但考虑到沙门菌对一些头孢类药物在体外与体内反应可能不一致，所以选用氟苯尼考粉剂拌料进行治疗，5d后，发病情况逐渐好转，有效控制了鸡只的死亡。

[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所组编.兽医微生物学 [M].第2版.北京：中国农业出版社，2013： 159-166.

[2]李书光,王玉茂,管宇,等.一株高致病性鸡伤寒沙门菌的分离及鉴定[J].中国家禽,2013,35(16):47-49.

[3]李凤玲，吕宗德.南京市规模化蛋鸡场鸡白痢血清流行病学调查 [J].畜牧与兽医,2015,47(11):107-108.

[4]辛朝安，主编.禽病学[M].第2版.北京：中国农业出版社,2003:148-153.

[5]武志强.粤北地区鸡沙门氏菌分离株的生化反应特性[J].中国预防兽医学报,2009,31(5):406-408.

[6]刘素英，王晶钰，董睿，等.鸡伤寒沙门菌的分离鉴定及药敏试验[J].动物医学进展,2011,32(9):37-41.

[7]吴白,杨林,吴婷婷,等.15株禽源沙门菌的分离鉴定与耐药性试验[J].中国兽医杂志,2014,50(6):27-29.

S858.31

B

1673-1085（2016）09-0007-03

2016-08-09

山东省高等学校青年骨干教师国内访问学者项目；山东省农业良种工程重点课题(25114426)；聊城大学博士启动基金(318051310)。

司振书（1971-）女，副教授，博士，研究方向为预防兽医。E-mail:dckszs@163.com。