乳癖康胶囊中橙皮苷含量HPLC测定方法的建立及评价

尹晶，王艳，王睿，侯宜

(1．吉林大学白求恩制药厂，长春130021；2．吉林大学药学院a.药学实验中心；b.组织工程教研室，长春130021)

乳癖康胶囊由乳癖康片经剂型改进而成，乳癖康片收载于《国家标准药品汇编》，由橘叶、夏枯草等8味中药组成[1]。乳癖康胶囊的主要成分为橙皮苷，具有活血化瘀、疏肝理气的功效，用于肝气郁结、气滞血瘀所致的乳腺增生、乳房胀痛等症。橙皮苷具有抗炎、抗氧化、抗癌、调节免疫力、防辐射、保护心血管系统等药理活性[2]，所以选择橙皮苷作为指标成分对乳癖康胶囊进行质量控制。经方法学考察以及阴性对照试验显示，该方法简单且重现性好，能为乳癖康胶囊质量控制提供有力依据。

1　材料与方法

1.1　样品试药及主要仪器

乳癖康胶囊(0.38g/粒，吉林大学药学院天然药化教研室自制)；橙皮苷对照品(批号：110721-200308，中国药品生物制品检定所)；所用试剂乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。

U-3400型分光光度计(日立公司)；SPD-10Avp紫外可见检测器、Auw120D十万分之一电子天平、LC-10AT高效液相色谱仪(岛津公司)。

1.2　溶液的制备

1.2.1对照品溶液的制备精密量取4.12mg橙皮苷对照品于25mL量瓶中，加一定量甲醇至刻度，得对照品溶液。精密量取对照品溶液0.1mL、0.3mL、0.5mL、0.7mL、0.9mL、1.1mL置于2mL量瓶中，加甲醇溶液至刻度，摇匀，得到系列对照品溶液。

1.2.2供试品溶液的制备取本品20粒内容物，计算出平均粒重，研细。量取本品内容物细粉0.31g于25mL量瓶中，加50%甲醇溶液20mL，超声处理(功率120W，频率40kHz)30min，加50%甲醇溶液稀释，摇匀后静置，吸取上清液，得供试品溶液。

1.2.3阴性对照溶液的制备按“1.2.2”项下方法制成不含橙皮苷成分的阴性对照溶液。

1.3　测定方法

色谱柱：Shim-pack VP-ODS C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-水(V乙腈∶V水=20∶80)；柱温：40℃；检测波长：284nm。按照上述色谱条件，阴性对照溶液无干扰峰，并且橙皮苷与乳癖康胶囊中的其他成分可以得到良好分离。

2　结果

2.1　标准曲线的制备

精密量取6份对照品溶液10μL，按照选定色谱条件进样并测定。以进样量(μg/mL)为横坐标、峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程：Y=-5882+1 159 440X，r=0.9997，0.0824μg/mL～0.9064μg/mL范围内呈现良好线性关系。

2.2　精密度实验

精密量取供试品溶液10μL，按照选定色谱条件连续进样6次，测定峰面积，结果RSD=0.37%(n=6)，表明精密度良好。

2.3　重复性实验

取乳癖康胶囊同一批号样品6份，按照“1.2.2”项制备方法制成供试品溶液，按照上述色谱条件进样测定，测得RSD=2.16%(n=6)，表明方法重复性较好。

2.4　稳定性实验

精密量取10μL供试液，并于配制后0h、1h、2h、4h、6h按照样品测定方法测定。结果RSD=0.37%(n=5)，表明供试品溶液在6h内保持稳定。

2.5　回收率实验

在已经确定含量的成品粉末中各定量加入1mL的橙皮苷对照品溶液(0.78mg/mL)，依法进样测定(样品进样量为10μL)，计算回收率，测得RSD=2.86%(n=6)，平均回收率为100.5%。

2.6　样品含量测定

取不同批号的样品10批，按照“1.2.2”项方法制成供试品溶液。精密量取对照品溶液和供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，按照选定色谱条件测定，并计算10批乳癖康胶囊中橙皮苷的含量，结果见表1。

表110批样品中橙皮苷含量测定(μg/粒，n=2)

Table1ResultsofdeterminationofHesperidinin10samples

批　号Batchnumber编号　Number12X040323075807720765040324064206750659040325056505880576040326055205320542040327042504340429040328089108720882040329093609600948040330104810111030040401099809600979040402116512221194

3　讨论

试验在溶剂选择上分别采用甲醇、30%甲醇和50%甲醇等溶液制备供试品溶液，并进样测定。结果显示，50%甲醇溶液制备供试品溶液分离效果好、峰面积积分值最高，故供试品溶液采用50%甲醇制备。

据不同文献报道[3～5]，高效液相色谱法测定橙皮苷的检测波长为270nm、283nm、284nm等。取适量橙皮苷对照品溶液于石英比色皿，甲醇溶液为参比溶液，全波长扫描谱中最大吸收在284nm处，确定本品经高效液相分离测定橙皮苷含量的检测波长为284nm。

乳癖康胶囊是复方制剂，含有众多干扰成分，故流动相的选择十分重要。经查阅文献[6～8]，高效液相色谱法测定橙皮苷含量所使用的流动相分别为甲醇-水、乙腈-0.1%冰醋酸溶液等多种流动相进行测定。经考察及试验发现，乙腈-水(V乙腈∶V水=20∶80)能够达到峰型好、基线分离明显的要求，所以采用上述流动相进行测定。

实验表明，本试验选用HPLC测定乳癖康胶囊中的橙皮苷含量，保留时间适中，阴性对照液无干扰峰，峰形较对称，适用于乳癖康胶囊该制剂的质量控制和分析。

[1]王俊香，王冬英，李军勇.HLPC测定消癖康胶囊中橙皮苷和丹酚酸B的含量[J].中成药，2007,29(9):1313-1315.

[2]Zhang DS,Gao HY,Wu LJ,et al.The Pharmacological activities of hesperidin[J].Modern Chinese Medicine,2006,(8):25-27.

[3]宋剑锋,冯敬骞,胡建华,等.HPLC法通式测定常山胡柚花中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的量[J].中草药,2014,45(6):854-856.

[4]徐海燕,金艺,张红霞,等.HPLC同时测定胃力片中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量[J].中成药,2010:32(8):1355-1357.

[5]张鹤,马宁.HLPC法测定乳癖消结丸中丹参酮IIA、橙皮苷含量[J].亚太传统医药,2015:11(12):24-26.

[6]黄蒙蒙,王俊香,李峰.HPLC法测定乳癖康胶囊中熊果酸的含量[J].山东中医杂志,2013:32(12):921-922.

[7]刘玉军,代龙,孙明江,等.HPLC测定白芪龙胶囊中齐墩果酸和熊果酸[J].中成药,2011,33(6):994:996.

[8]麻秀萍,蒋朝晖,丁宁,等.HPLC测定马鞭草中熊果酸的含量[J].中成药,2005,27(1):88-90.