参七合剂对高脂血症大鼠载脂蛋白AⅠ、B及血液流变学指标的影响*

蒋 锐，姜海斌，刘柏炎，杨丽洁，金 娟

(1.常德职业技术学院内科教研室，湖南常德 415000; 2.湖南中医药大学第一中医临床学院，湖南长沙 410208)

参七合剂对高脂血症大鼠载脂蛋白AⅠ、B
及血液流变学指标的影响*

蒋 锐1，姜海斌1，刘柏炎2，杨丽洁1，金 娟1

(1.常德职业技术学院内科教研室，湖南常德 415000; 2.湖南中医药大学第一中医临床学院，湖南长沙 410208)

目的:观察参七合剂对高脂血症大鼠载脂蛋白AⅠ、B(apoAⅠ、apoB)及血液流变学指标的影响，探讨其降脂机制。方法:将120只SD大鼠雌雄分开，按随机数字表法分为对照组(20只)和造模组(100只)，使用高脂饲料喂养造模。于第11天将造模组大鼠先按血脂水平分层，再随机分为模型组、辛伐他汀组(给予辛伐他汀0.002 g·kg－1)参七合剂低、中、高剂量组(给予参七合剂1，2，4 g·kg－1)，每组20只。继续喂养20 d后，按照试剂盒要求检测apoAⅠ、apoB、总胆固醇(total cholesterol，TC)、三酰甘油(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoproteins，LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoproteins，HDL-C)。使用DWN-90型血液流变分析仪检测血液流变学指标。HE染色观察肝脏组织病理形态学改变情况。结果:与辛伐他汀比较，参七合剂低、中剂量降低apoB、LDL-C及TC，升高apoAⅠ及HDL-C，减轻肝细胞脂肪变性，差异有统计学意义。结论:参七合剂通过促使apoAⅠ合成增加、apoB合成减少消除增加，降低血脂水平。

参七合剂;高脂血症;载脂蛋白AⅠ、B;血液流变学;肝细胞脂肪变性

高脂血症通常是指血浆中胆固醇和(或)甘油三酯升高所致的疾病，与冠心病、动脉粥样硬化、脂肪肝等疾病关系密切，严重威胁着人类健康。目前，他汀类药物是治疗高脂血症的首选西药，但长期用药所产生的不良反应如肝肾功能损害、横纹肌溶解等依然是治疗中的难题［1］。中药降脂研究已成为当前的热点，具有现实的临床意义。前期实验研究显示，参七合剂对高脂血症大鼠有较好的降脂作用［2］。本研究旨在通过实验观察参七合剂对高脂血症大鼠载脂蛋白AⅠ、B(apoAⅠ、apoB)及血液流变学指标的影响，进一步探讨参七合剂的降脂机制。

1 材料

1.1 动物

SD大鼠SPF级120只，雌雄各半，体质量(236 ±14)g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司(动物许可证号SCXK(湘)2009-0004)。湖南中医药大学SPF实验室，温度20～22℃，相对湿度50%～60%。

1.2 高脂饲料［2］

按蛋黄粉10%(安徽亳州市众意蛋业有限责任公司，批号20130426)、猪油5%、胆固醇5%(天津博迪化工股份有限公司，批号 20120814)、胆盐0.5%(上海蓝季科技发展有限公司，批号20120906)、甲硫氧嘧啶0.2%(天津博迪化工有限公司，批号201211093)、基础饲料79.3%组成。

1.3 药物

参七合剂由西洋参、三七、熟何首乌组成，3种药物的饮片均购自长沙九芝堂药材公司。饮片粉碎过200目筛，钴60消毒。辛伐他汀10 mg/片，哈药集团三精明水药业有限公司生产(批准文号国药准字H20010454)。

1.4 试剂

总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、apoA、apoB试剂盒均购置于北京北化康泰临床试剂有限公司(生产批号依次为20130308、20130412、20130603、20130210、20130424、20130207)。

1.5 仪器

日立750型自动生化分析仪(日本日立)，DWN-90型血液流变分析仪(北京多米诺科技有限公司)，OlympusAH-2显微镜(日本奥林巴斯)。

2 方法

2.1 造模及分组

120只SD大鼠普通饲料适应性喂养1周后先将雌雄分开，然后分别将雌雄SD大鼠按随机数字表法分为对照组20只，造模组100只，2组中雌雄各半。对照组给予普通饲料，造模组给予高脂饲料，自然摄食，连续喂养10 d。第11天120只SD大鼠腹腔注射乌拉坦1.5 g·kg－1麻醉，尾静脉采血检测TC、TG、LDL-C、HDL-C。将造模组大鼠雌雄分开，按照血脂4项水平分别分层，然后随机分成模型组、辛伐他汀组、参七合剂低、中、高剂量组各20只，雌雄各半。对照组继续给予普通饲料，模型组、药物干预各组均给予高脂饲料，继续喂养20 d。

2.2 给药

给药剂量换算方法［4］:，人、鼠的体形系数分别为R人=0.1、 R鼠=0.09。根据临床药理试验研究，以临床等效剂量的1、2、4倍量作为SD大鼠的低、中、高剂量，则参七合剂低、中、高剂量组每只SD大鼠的给药量分别为0.2 g、0.4 g、0.8 g。辛伐他汀(10 mg/片)溶于蒸馏水，配置成0.2 mg·mL－1的溶液。参七合剂溶于蒸馏水，配置成0.1 g·mL－1、0.2 g·mL－1、0.4 g ·mL－1的溶液。药物干预各组分别给予辛伐他汀或参七合剂溶液2 mL/只灌胃，对照组和模型组均给予蒸馏水2 mL/只灌胃，给药在晚8时进行。

2.3 指标检测

第31天，SD大鼠腹腔注射乌拉坦1.5 g·kg－1麻醉，心脏采血。自动生化分析仪检测 TC、TG、LDL-C、HDL-C、apoAⅠ、apoB。以部分抗凝血做全血黏度测定(测定温度37℃，设低切为10 s－1、高切为200 s－12个切变率)。用微量毛细管吸取全血，用毛细管式离心机12000 r/min离心5 min测定红细胞压积，部分全血3000 r/min离心15 min制备血浆，测定血浆黏度［3］。10%福尔马林固定肝脏。标本用乙醇逐级脱水，石蜡包埋，连续切片，切片厚5 μm，HE染色，光镜下观察肝组织脂肪变性情况并采集图片。

2.4 统计学方法

采用SPSS 18.0统计软件进行统计分析，数据以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 高脂血症大鼠模型建立

表1显示，各组内雌雄之间TC、TG、LDL-C、HDL-C比较差异无统计学意义(P＞0.05)。与对照组比较，造模组 TC、TG、LDL-C显著升高(P＜0.01)，HDL-C无统计学意义(P＞0.05)，符合高脂血症诊断标准［4］，表明造模成功。

表1 喂食10 d后高脂饲料对SD大鼠血脂4项的影响(±s)

表1 喂食10 d后高脂饲料对SD大鼠血脂4项的影响(±s)

注:与对照组比较:*P＜0.01。

组 别 鼠数 TC/mmol·L－1 TG/mmol·L－1 LDL-C/mmol·L－1 HDL-C/mmol·L－1对照组1.51±0.27 20 2.04±0.28 0.40±0.14 1.85±0.41 1.47±0.32模型组 100 10.17±3.36* 1.03±0.11* 8.58±2.43*

3.2 参七合剂对高脂血症大鼠血脂4项含量的影响

表2显示，各组内雌雄之间 TC、TG、LDL-C、HDL-C比较差异无统计学意义(P＞0.05)。与模型组比较，参七合剂各组、辛伐他汀组TC、TG、LDL-C降低(P＜0.01，P＜0.05)，HDL-C升高(P＜0.01)，表明参七合剂、辛伐他汀均能明显降低高脂血症大鼠TC、TG、LDL-C的含量，且能升高其HDL-C的含量。参七合剂低、中剂量组与辛伐他汀组比较，TC、LDL-C降低，HDL-C升高显著(P＜0.01)，TG差异无统计学意义(P＞0.05)，参七合剂高剂量组与辛伐他汀组TC、TG、LDL-C、HDL-C比较差异无统计学意义(P＞0.05)，表明参七合剂低、中剂量对高脂血症大鼠TC、LDL-C、HDL-C的影响优于辛伐他汀。

3.3 参七合剂对高脂血症大鼠apoAⅠ、apoB含量的影响

表3显示，各组内雌雄之间apoB、apoAⅠ含量比较差异无统计学意义(P＞0.05)。参七合剂各组、辛伐他汀组与模型组比较，apoB含量降低(P＜0.01)，apoAⅠ含量升高(P＜0.01)，表明参七合剂、辛伐他汀均能明显降低高脂血症大鼠apoB的含量，并能升高其apoAⅠ含量。与辛伐他汀组比较，参七合剂低、中剂量组apoB降低，apoAⅠ升高显著(P＜0.01)，高剂量组差异无统计学意义(P＞0.05)，表明参七合剂低、中剂量对高脂血症大鼠 apoAⅠ、apoB的影响优于辛伐他汀。

表2 参七合剂对高脂血症大鼠血脂4项的影响(±s)

表2 参七合剂对高脂血症大鼠血脂4项的影响(±s)

注:与对照组比较:＊P＜0.01;与模型组比较:▲P＜0.05，▲▲P＜0.01;与辛伐他汀组比较:#P＜0.01

组别 鼠数 TC/mmol·L－1 TG/mmol·L－1 LDL-C/mmol·L－1 HDL-C/mmol·L－1对 照 组20 2.23±0.37 0.44±0.12 1.77±0.25 1.52±0.26模 型 组 20 23.71±6.82 1.62±0.48 19.40±4.91 1.66±0.29辛 伐 他 汀 组 20 16.52±4.40＊▲▲ 1.38±0.15＊▲ 14.79±3.18＊▲▲ 2.88±0.26＊▲▲参七合剂(低)组 20 11.74±3.39＊▲▲# 1.41±0.21＊▲ 10.03±3.51＊▲▲# 4.77±1.05＊▲▲#参七合剂(中)组 20 12.65±5.33＊▲▲# 1.40±0.17＊▲ 11.04±2.81＊▲▲# 3.91±0.43＊▲▲#参七合剂(高)组 20 17.11±4.24＊▲▲ 1.39±0.38＊▲ 15.73±4.06＊▲▲ 2.61±0.32＊▲▲

表3 参七合剂对高脂血症大鼠apoAⅠ、apoB的影响(±s)

表3 参七合剂对高脂血症大鼠apoAⅠ、apoB的影响(±s)

注:与对照组比较:＊P＜0.01;与模型组比较:▲P＜0.01;与辛伐他汀组比较:★P＜0.01

组别 20 apoAⅠ/mg·L－1 apoB/mg·L－1对 照 组20 111.3±14.6 244.7±38.2模 型 组 20 57.1±18.2 862.5±48.4辛 伐 他 汀 组 20 76.5±15.7＊▲ 447.2±54.6＊▲参七合剂(低)组 20 94.3±13.9＊▲★ 319.4±31.8＊▲★参七合剂(中)组 20 91.3±11.3＊▲★ 331.4±40.3＊▲★参七合剂(高)组 20 74.8±14.9＊▲ 451.0±49.4＊▲

3.4 参七合剂对高脂血症大鼠血液流变学指标的影响

表4显示，与对照组比较，模型组大鼠全血黏度及血浆黏度升高(P＜0.01)，红细胞压积无明显变化(P＞0.05)。与模型组比较，辛伐他汀组、参七合剂低、中、高剂量组全血黏度及血浆黏度均降低(P＜0.01)，红细胞压积无明显变化(P＞0.05)。与辛伐他汀组比较，参七合剂低、中剂量组的各血液流变学指标比较差异无统计学意义(P＞0.05)，高剂量组全血黏度及血浆黏度均低于辛伐他汀组(P＜0.01)。

表4 参七合剂对高脂血症大鼠血液流变学指标的影响(±s)

表4 参七合剂对高脂血症大鼠血液流变学指标的影响(±s)

注:与对照组比较:＊P＜0.01;与模型组比较:▲P＜0.01;与辛伐他汀组比较:★P＜0.01

组别 鼠数 全血黏度/mPa·s /%对 照 组 20 4.43±0.51 10.58±2.10 1.15±0.30 43.24±5.13 200 s－1 10 s－1 血浆黏度/mPa·s 红细胞压积42.67±4.41模 型 组 20 8.59±1.63＊ 15.39±3.54＊ 2.87±0.37＊ 42.49±4.81辛 伐 他 汀 组 20 6.42±0.84▲ 13.75±2.66▲ 1.81±0.24▲ 42.86±5.44参七合剂(低)组 20 6.51±0.49▲ 12.60±2.58▲ 1.69±0.11▲ 43.17±4.74参七合剂(中)组 20 6.37±0.50▲ 12.88±2.41▲ 1.74±0.16▲ 42.22±3.80参七合剂(高)组 20 5.42±0.72▲★ 11.66±3.68▲★ 1.31±0.21▲★

3.5 参七合剂对高脂血症大鼠肝组织病理形态学的影响

表5图1显示，对照组大鼠肝细胞索排列整齐，肝细胞无浊肿、脂肪变性、坏死及明显炎细胞浸润，肝组织无任何病变。模型组大鼠肝细胞明显肿胀，胞浆内出现大小不等、数量不一的脂滴空泡，将细胞核挤向一边，脂变细胞体积增大，肝窦受压变窄，细胞索排列紊乱。辛伐他汀组、参七合剂低、中、高剂量组所有大鼠的肝细胞都存在不同程度的脂肪样变性。按照非酒精性脂肪肝诊断标准(草案)［5］:“0级:肝细胞无脂变、无炎细胞浸润;Ⅰ级:肝细胞脂变数＜1/3;Ⅱ级:肝细胞脂变数1/3～1/2;Ⅲ级:肝细胞脂变数1/2～2/3;Ⅳ级:肝细胞脂变数＞2/3，模型组SD大鼠肝脏脂肪样变性以Ⅲ、Ⅳ级为主，辛伐他汀组以Ⅱ、Ⅲ级为主，参七合剂低、中剂量组以Ⅰ、Ⅱ级为主，高剂量组以Ⅱ、Ⅲ级为主。

4 讨论

血脂异常对健康的损害主要在心血管系统，TG、LDL-C升高是主要致病危险因素。apoAⅠ和apoB分别是高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的载脂蛋白，反映血液中HDL和LDL的水平，并与之呈正相关［6］。apoAⅠ在胆固醇的逆转运过程中发挥重要作用，HDL可将胆固醇送到肝脏分解，抑制细胞摄入LDL，HDL水平增高有利于外周组织清除胆固醇［7］。apoAⅠ和HDL-C下降是导致高脂血症的危险因子［8］。apoB能介导LDL-C与相应受体结合，促进肝脏和外周组织摄取胆固醇，其升高是导致冠心病最重要的危险因素。血浆黏度的高低主要与所含的各种蛋白质、糖类、脂类等高分子物质含量有关，其中蛋白质对血浆黏度影响最大［9］，高脂血症可引起全血黏度与血浆黏度值的升高［10］。

参七合剂源于湖南省名老中医刘新祥教授的经验方，具有益气养血、活血化瘀的功效。西洋参所含西洋参茎叶皂苷、人参皂苷能纠正高脂血症脂蛋白-胆固醇代谢紊乱，对胰脂肪酶活性均有很强的抑制作用［11］;何首乌能增加低密度脂蛋白受体(LDLR)的表达，提高机体运转和清除胆固醇的能力，降低血脂水平［11］;三七在消化道内同脂类结合形成不易吸收的物质，防止脂质在血管内沉积，能降低血小板表面活性，抑制血小板黏附和聚集，降低全血黏度和血浆黏度［11］806-861;何首乌、三七提取物能够降低胆固醇和甘油三酯［12］。前期研究［2］表明，自制高脂饲料能建立稳定的高脂血症大鼠模型，参七合剂对高脂血症大鼠有较好的降脂作用。

表5 参七合剂对高脂血症大鼠肝细胞脂肪样变性的影响

图1 参七合剂对高脂血症大鼠肝组织病理形态学的影响(HE染色 ×200)

本研究结果表明，参七合剂和辛伐他汀均能降低apoB、TC、TG、LDL-C，升高apoAⅠ、HDL-C，减轻大鼠肝细胞脂肪变性，同时能改变全血高切黏度和低切黏度、血浆黏度，降低血液黏度。与辛伐他汀比较，参七合剂低、中剂量降低apoB、LDL-C和TC，升高apoAⅠ和HDL-C，减轻肝细胞脂肪变性有显著差异，而高剂量仅在降低全血黏度及血浆黏度上有显著差异;对apoAⅠ、apoB、TC、LDL-C、HDL-C及肝细胞脂肪变性的影响，参七合剂低、中剂量与高剂量有显著差异。上述结果表明，参七合剂对血脂水平、apoAⅠ及apoB含量、血液流变学指标和肝细胞脂肪变性的影响，与其剂量存在着一定的量效关系。至于参七合剂高剂量组的降脂效果反而不如低、中剂量组以及参七合剂对血脂水平、apoAⅠ、apoB等的影响是否同样存在量效关系，有待下一步探讨。与前期研究［2］比较，动物给药时间改变后，药物的降脂效应出现了明显的差异，说明降脂药的使用效果与服药时间有密切关系。HDL-C的增加能消除体内过多的LDL含量，其表面的apoAⅠ能激活卵磷脂-胆固醇酰转移酶(LCAT)，促使催化胆固醇转变为胆固醇脂，继而转化为胆汁酸，或直接从胆汁中排出体外［13］。apoB是LDL的主要apo，而LDL的主要功能是将肝脏的胆固醇转运到全身，apoB的增高使LDL在血液中的滞留时间延长。apoB、LDL-C的含量下降，可有效降低全血黏度。因此，apoAⅠ、HDL的升高和apoB、LDL的降低能有效降低血液TC、TG的含量及全血黏度，阻止肝细胞脂肪变性。

综上所述，参七合剂能降低apoB、LDL-C，升高apoAⅠ、HDL-C，从而降低高脂血症模型大鼠的血脂水平及血液黏度，减轻肝细胞脂肪变性，其主要机制可能是使含apoAⅠ的脂蛋白合成增加，使含apoB的脂蛋白合成减少、清除增加。

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Effect of Shen Qi Mixture on Apolipoprotein A I，B and Hemorheology in Hyperlipidemia Rats

JIANG Rui1，JIANG Hai-bin1△，LIU Bo-yan2，YANG Li-Jie1，JIN Juan1
(1.Deparment of Medical Staff Room，Changde Vocational Technical College，Hunan Changde，415000，China; 2.The First Chinese Medicine Clinical College，Hunan University of Chinese Medicine，Changsha，410208，China)

Objective:To observe the effect of Shenqi Mixture on apolipoprotein(apo)AⅠ，B and hemorheology indexes in hyperlipidemia rats，investigate lipid-lowering mechanism of Shenqi Mixture.Methods:120 SD rats were randomly divided into control group(20)and model group(100).Establed stale hyperlipidemia SD rats models by feeding on high-fat diet.Model rats were stretified on lipid level and randomly divided into model group，Shenqi Mixture high，medium and low group，Simvastatin group.Every group had 20 rats.Tested apo AⅠ，apo B，total cholesterol(TC)，triglyceride (TG)，low-density lipoproteins(LDL-C)，high-density lipoproteins(HDL-C)，hemorheology indexes and observed pathological change of liver tissue on the 31thday.Results:The results of apo AⅠ，apo B，HDL-C，LDL-C，TC and the hepatocyte steatosis of Shenqi Mixture medium and low group have significant differences compared with Simvastatin group.Conclusion:Promoting increased synthesis of apo AⅠand decreased synthesis increased elimination of apo B may be one of the mechanisms of decreasing blood lipid level by Shenqi Mixture.

Shenqi mixture;Hyperlipidemia;Apo AⅠ，apo B;Hemorheology;Hepatocyte steatosis

R285.5

B

1006-3250(2016)06-0781-04

2015-11-02

湖南省教育厅科技计划项目(12C0969);常德市科技局科技计划项目(2010BS02)

蒋 锐，女，副教授，医学硕士，从事高脂血症及妇科杂病的防治研究。