栀子甘草豉汤、大黄黄连泻心汤及其合方对反流性食管炎模型大鼠胃肠激素的影响

刘小河，马艳红，何丽清，傅延龄

(1.湖北省中西医结合医院，武汉 430015;2.北京中医药大学基础医学院，北京 100029)

栀子甘草豉汤、大黄黄连泻心汤及其合方对反流性食管炎模型大鼠胃肠激素的影响

刘小河1，马艳红2，何丽清2，傅延龄2

(1.湖北省中西医结合医院，武汉 430015;2.北京中医药大学基础医学院，北京 100029)

目的:探讨栀子甘草豉汤、大黄黄连泻心汤及其合方对混合性反流性食管炎大鼠食管黏膜及胃肠激素的影响及作用机制。方法:采用食管十二指肠吻合术建立反流性食管炎模型，1周后假手术组、模型组给予生理盐水灌胃，西药组大鼠灌胃莫沙必利，各中药组分别灌胃栀子甘草豉汤、大黄黄连泻心汤及合方;术后5周处死大鼠计算食管系数并做组织病理学观察;检测血清中胃肠激素GAS、MIL、VIP含量。结果:三方均可显著降低血清中GAS、MIL含量，提高血清中VIP含量，降低食管系数，改善食管大体及病理组织评分，其中合方效果最显著。结论:栀子甘草豉汤、大黄黄连泻心汤及合方能够提高反流性食管炎大鼠GAS、MIL水平和降低VIP水平，增强食管下括约压力，制止胃肠内容物反流到食管，从而保护食管黏膜起到治疗反流性食管炎的作用。

栀子甘草豉汤;大黄黄连泻心汤;反流性食管炎;胃肠激素

反流性食管炎(reflux esophagitis，RE)是胃食管反流病的一种，是指胃十二指肠内容物反流入食管，不仅引起烧心和反流等症状，还会引起咽喉、气道等食管邻近的组织损害。目前西药治疗本病常用的药物主要有促胃肠动力药、H2受体拮抗剂、PPI和抗酸药等，虽然有一定的疗效，但副作用较大，经济负担重且易复发。笔者采用清宣郁热、畅利气机治法，选用栀子甘草豉汤、大黄黄连泻心汤及其合方。前期课题组观察其对反流性食管炎模型大鼠氧化应激的影响［1-2］，此实验观察两方及其合方对反流性食管炎模型大鼠胃肠激素的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康清洁级雄性3月龄SDIGS大鼠72只，体质量(240±20)g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供(许可证号SCXK(京)2007-0001)。

1.2 实验药品

栀子甘草豉汤是由栀子、甘草、淡豆豉组成，用量为成人每日用量栀子20 g、生甘草10 g、淡豆豉20 g。临床用量按成人60 kg体质量计算单位体质量日服生药量，大鼠用药剂量为人用药剂量的7倍(下同)。药物加适量的水煎煮2次合并滤液，浓缩成含生药0.583 g/ml的混悬液。大黄黄连泻心汤是由大黄、黄连、黄芩组成，用量为成人每日用量制大黄8 g、黄连8 g、黄芩15 g。药物加适量的水煎煮2次，合并滤液浓缩成0.362 g/ml的混悬液。栀子甘草豉汤合大黄黄连泻心汤(简称合方)由栀子、生甘草、淡豆豉、大黄、黄连、黄芩组成，用量为栀子、淡豆豉各10 g，生甘草5 g，制大黄、黄连各4 g、黄芩8 g。药物加适量的水煎煮2次，合并滤液浓缩成0.478 g/ml的混悬液。西药为枸橼酸莫沙必利分散片，制成0.175 mg/ml的混悬液(批号071207，成都大西南制药股份有限公司生产)。

1.3 动物分组

雄性大鼠72只，在同样环境下给予基础饲料常规饲养1周后，体质量均衡随机分成6组，每组12只，即假手术组、模型组、西药对照组、栀子甘草豉汤组、大黄黄连泻心汤组及其合方组(以下分别简称假手术组、模型组、西药组、栀豉组、泻心组、合方组)。

1.4 动物模型［3］

结合对双载式多层穿梭车立体仓库联合进出库流程的分析，设单次入库两个货物分别为i和j，货架的列方向为x，层方向为y，目标货位分别为(xi，yi)和(xj，yj)；出库两个货物分别为m和n，所在货位分别为(xm，ym)和(xn，yn)；I/O位置用o点表示。按照进出库货物是否在同一层，单次联合进出库分为以下4种情况进行分类讨论：

各组大鼠均于术前24 h禁食，术前禁水2～4 h，应用1%戊巴比妥钠腹腔注射(30～45 mg/kg体质量)进行麻醉。固定在手术台上，严格按照无菌操作进行模型制作。沿腹正中线开腹，将食管下段分离出迷走神经及血管，切断食管;缝合贲门并荷包包埋入胃中，保留全胃，在十二指肠距幽门1 cm处侧壁纵行切开0.4 cm，将其与食管下段进行端侧吻合，用6-0无创伤缝线进行全层间断密集缝合。关腹前，用无菌纱布吸尽腹腔中的液体，注入2～3 ml含有庆大霉素的生理盐水(1万/ml)。术后24 h禁食不禁水，术后1周内大鼠每日腹腔注射青霉素(1.6万/100 g体质量)。假手术组行假手术，开腹后约10 min即关腹。

1.5 给药方法

术后1周开始给药。假手术组、模型组每日给予生理盐水1 ml/100 g体质量灌胃，西药组每日灌服莫沙必利1 ml/100 g体质量(0.175 mg/ml);栀豉组、泻心组、合方组每日按1 ml/100 g体质量灌胃相应的汤药。每周禁食称重1次，连续给药4周，观察大鼠的活动表现、摄食量、进水量及精神状态。

1.6 标本采集与检测

末次给药后禁食不禁水24 h，用10%水合氯醛按4 ml/kg体质量腹腔注射麻醉。腹主动脉取全血放入肝素钠管中，3500 r/min离心20 min，取上清冷藏待测。将大鼠食管从咽部至吻合口整段取出纵行剖开，精密电子天平称重后肉眼观察并评分。将食管纵切一分为二，一份放入4%中性多聚甲醛溶液中固定48 h，常规组织脱水、透明、浸蜡、包埋。石蜡切片用于HE染色和免疫组化染色。另一份称重后用生理盐水制备10%食管匀浆，4℃3500 r/min，离心15 min取上清待测。

1.7 指标测定

1.7.2 食管系数 食管系数=食管湿重/体质量。

1.7.3 食管黏膜肉眼及病理形态学观察 将食管从咽部至吻合口整段取出，生理盐水轻轻冲洗食管，滤干称重后纵行剖开观察肉眼大体表现。石蜡切片、HE染色后进行光镜观察。

1.7.4 血清检测 血清中胃肠激素 GAS、MIL、VIP的检测由北京华英生物工程研究所代测。运用放免分析法(RIA)检测大鼠血清中胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)、血管活性肠肽(VIP)的含量影响。

1.8 统计学方法

采用SAS8.2统计软件进行统计分析，数据以均数±标准差(±s)表示，正态分布及方差齐性检验后用F检验进行多组均数的两两比较，方差不齐者用秩和检验，P＜0.05，P＜0.01为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况

实验中死亡大鼠共5只，均在术后1周内出现。其中模型组2只，西药组、泻心组、合方组大鼠各死亡1只。术后主要死亡原因为梗阻、腹腔撕裂等，死亡动物不进行统计。表1显示，模型组、西药组、栀豉组、泻心组、合方组大鼠的体质量增长幅度明显低于假手术组，栀豉组与合方组的平均体质量增加明显高于模型组。

表1 各组大鼠体质量增加、食管系数和黏膜损伤评分(±s)

表1 各组大鼠体质量增加、食管系数和黏膜损伤评分(±s)

注:与假手术组比较:△P＜0.05，△△P＜0.01;与模型组比较:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;与西药组比较:▽P＜0.05，▽▽＜0.01

组 别 例数 体质量增加(g)食管系数 黏膜损伤评分假手术组12 141.40±36.14 6.77±0.64 0.00±0.00模 型 组 10 73.56±30.73△△ 13.58±2.32△△▽▽ 3.50±0.97△△西 药 组 11 81.00±41.52△△ 11.69±1.85△△﹡﹡ 2.73±1.01△△栀 豉 组 12 102.80±19.91△△﹡10.31±1.03△△﹡﹡▽ 2.42±0.99△△﹡泻 心 组 11 81.00±25.63△△ 10.34±1.15△△﹡﹡▽ 2.27±0.90△△﹡﹡合 方 组 11 106.33±30.52△﹡ 10.01±0.67△△﹡﹡▽ 2.00±0.82△△﹡﹡▽

2.2 食管系数及黏膜损伤评分

与假手术组比较，各组大鼠食管系数均明显增高。与模型组比较，各治疗组大鼠的食管系数均有明显降低，各中药组效果明显优于西药组。与假手术组比较，各组大鼠的黏膜损伤显著。与模型组比较，栀豉组、泻心组、合方组大鼠的黏膜损伤有不同程度的改善，合方组减轻黏膜损伤的效果明显优于西药组。

2.3 食管大体形态观察及病理组织学变化

图1显示，假手术组大鼠食管黏膜完整、光滑且呈白色。经过造模手术后的大鼠食管黏膜粗糙，散在分布糜烂及溃疡，出现不同程度的“树皮样”黏膜增生外观，吻合口处最重逐渐向上累及，范围可达食管的黏膜各段，食管壁明显增厚，下段不规则扩张，但以模型组最为明显，其他各治疗组食管损伤程度明显减轻。

图1

光镜下形态学改变看，图2观察到假手术组食管黏膜除上皮细胞层内间或存在少量炎细胞外，无其他明显异常表现，其余各实验组均可见不同程度的几种组织学改变:一是炎性细胞浸润，主要为中性粒细胞、淋巴细胞及少量嗜酸性粒细胞;二是鳞状上皮过度增生，食管上皮层不同程度增厚，以基底层及棘层细胞增生为主，成纤维细胞增生;三是固有层乳头延长，向表面延伸达上皮层厚度的2/3，角化过度，浅层毛细血管扩张、充血;四是糜烂、溃疡，食管上皮部分或全层缺损，底部覆以渗出物及肉芽组织。各组组织学改变由下向上逐渐减轻，各治疗组病理学改变均有不同程度的减轻。

图2

2.4 血清中胃肠激素GAS、MIL、VIP的测定

表4显示，模型组大鼠与假手术组大鼠比较，GAS、MIL明显降低(P＜0.01)，VIP明显升高(P＜0.01)。与模型组比较，各治疗组GAS、MIL均有上升趋势。与西药组比较，各中药组GAS均有增加，且合方组显著(P＜0.05);泻心组和合方组MIL均增加，且合方组极显著(P＜0.01)。与模型组比较，西药组、栀豉组、泻心组、合方组VIP均下降。与西药组比较，栀豉组、泻心组和合方组VIP值更小，且合方组明显(P＜0.05)。

表4 胃肠激素GAS、MIL、VIP的影响比较(±s)

表4 胃肠激素GAS、MIL、VIP的影响比较(±s)

注:与假手术组比较:△P＜0.05，△△P＜0.01;与模型组比较:﹡P＜0.05，﹡﹡P＜0.01;与西药组比较:▽P＜0.05，▽▽P＜0.01

GAS MIL VIP假手术组组 别 例数12 36.47±5.82 316.40±49.11 24.03±11.47模 型 组 10 26.10±6.27△△ 219.01±64.78△△▽▽ 45.52±17.40△△西 药 组 11 29.79±10.09 296.88±63.11＊＊ 38.66±17.27△栀 豉 组 12 36.72±10.62＊＊ 285.07±48.78* 32.00±15.15*泻 心 组 11 32.91±4.23 303.63±32.74＊＊ 31.91±14.21*合 方 组 11 39.06±9.70＊＊▽ 393.71±97.46△△＊＊▽▽22.90±10.17＊＊▽

3 讨论

栀子甘草豉汤见于《伤寒论》第76条:“发汗吐下后，虚烦不得眠，若剧者，必反复颠倒，心中懊，栀子豉汤主之。若少气者，栀子甘草豉汤主之。”条文中提到虚烦不得眠、心中懊，以及栀子豉汤类方主治病证可能见到的“胸中窒”“心中结痛”等症状，与RE的烧心、反酸、胸痛等临床表现颇为相似，故后世有用于治疗RE者。栀子质禀轻浮，味苦性寒，能上入心胸而清热除烦，常用于心热、肝热及胃热诸症，能迫热下行而利小便，清除胃中积热;生甘草性平、味甘，能益气补中、缓急止痛、调和药性;淡豆豉性凉、味甘辛，能解表除烦又能和降胃气;甘草、淡豆豉与栀子苦寒药同用，可护胃益气和中，防其苦寒伤胃，三药同用可清宣郁热、益气和中。

大黄黄连泻心汤见于《伤寒论》第154条:“心下痞，按之濡，其脉关上浮者，大黄黄连泻心汤主之。”第164条:“伤寒大下后，复发汗，心下痞，恶寒者，表未解也。不可攻痞，当先解表，表解乃可攻痞。解表宜桂枝汤，攻痞宜大黄黄连泻心汤。”条文中大黄黄连泻心汤用于治疗热痞，临床表现为胃脘部有堵闷痞塞感觉、吞咽不利、口干等。本实验所用大黄黄连泻心汤由大黄、黄连、黄芩组成，三药皆为苦寒之品，大黄泻热、和胃、开结，有推陈致新之力;黄芩、黄连清心胃之火，三药合用邪热得除，气机流畅。

在本研究中，术后各组大鼠的体质量增加均明显低于假手术组，可能与术中损伤较大或术后病变形成较重而影响营养有关。栀豉组与合方组的平均体质量增加明显高于模型组。栀子甘草豉汤及合方均能清宣郁热、益气和胃，促进正气恢复，故大鼠体质量增加效果明显。实验结果显示，栀子甘草豉汤、大黄黄连泻心汤及其合方均能减轻黏膜损伤程度，组织病理也较模型组有明显改善，三方效果均优于莫沙必利。反流性食管炎突出的病理特点即鳞状上皮增生和炎细胞浸润，各治疗组的食管系数较模型组均有显著降低，提示莫沙必利、栀子甘草豉汤、大黄黄连泻心汤以及合方均可不同程度地抑制食管黏膜增生以及减轻局部炎症细胞的浸润，其中合方效果最好，优于莫沙必利。关于三方抑制上皮增生以及抗炎机制将在今后的研究中进一步深入探讨。

胃动素(MIL)、胃泌素(GAS)以及血管活性肠肽(VIP)是调控胃肠运动的重要因素，可直接与相应受体结合发挥效应，也可通过迷走神经介导，在中枢和外周水平上对胃肠运动进行精细调节［4］。GAS是最强的促胃酸分泌的激素，可使壁细胞最大限度地分泌胃酸［5］。下食管括约肌作为RE发病中的一个关键因素，其受胃肠激素的影响也较大，MIL、GAS均可增加下食管括约肌压力(LESP)，而VIP可降低下食管括约肌压力［6］。本实验研究表明，与假手术组比较，模型组大鼠GAS和MIL明显下降，而VIP明显上升。用药治疗后，与模型组比较各治疗组GAS和MIL明显上升，而VIP明显下降。证实了反流性食管炎不仅与胃肠激素GAS、MIL和VIP有关，而且栀子甘草豉汤、大黄黄连泻心汤及合方对其的治疗可能是通过影响GAS、MIL和VIP实现的。进一步推测，栀子甘草豉汤、大黄黄连泻心汤及合方能提高反流性食管炎大鼠GAS、MIL水平和降低VIP水平，增强食管下括约压力，制止胃肠内容物反流到食管，从而保护食管黏膜，起到治疗反流性食管炎的作用。

［1］马艳红，刘小河，何丽清，等.栀子甘草豉汤、大黄黄连泻心汤及其合方对反流性食管炎模型大鼠氧化应激影响［J］.山西中医，2009，15(1):49-52.

［2］刘小河，马艳红，傅延龄.黄芩汤对反流性食管炎模型大鼠氧化应激和胃肠激素的影响［J］.时珍国医国药，2011，22(7): 1778-1780.

［3］王雯，李兆申，许国铭，等.不同方式建立3种反流性食管炎模型［J］.解放军医学杂志，2000，25(3):171-173.

［4］Grundy D，AI-Chaer ED，Aziz Q，et al.Fundamentals of neurogastroenterology:basicscience［J］.Gastroenterology，2006，130:1391-1411.

［5］Feng G，Xu X，Wang Q，et al.The protective effects of calcitonin gene-related peptide on gastric mucosa injury after cerebral ischemia reperfusion in rats［J］.Regul Pept，2010，160(1-3): 121-128

［6］魏良洲.胃食管反流病［M］.北京:人民军医出版社，2004:9.

Effects of Zhizi Gancao Chi Decoction，Dahuang Huanglian Xiexin Decoction and Their Combined Decoction on the Gastrointestinal Hormone in the Rat Model of Anti Reflux Esophagitis

LIU Xiao-he1，MA Yan-hong2，HE Li-qing2，FU Yan-ling2
(1.Hubei Provincial Hospital of Integrated Chinese＆Western Medicine，Wuhan 430015，China; 2.Basic Medicine College in Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China)

Objective:To observe the effects of Zhizi Gancao Chi Decoction(ZGCD)，Dahuang Huanglian Xiexin Decoction(DHXD)and the Integrated Decoction(ID)on Reflux esophagitis and the mechanism of action of Gastrointestinal hormones in rat’s esophagus mucosa.Method:Using esophagoduodenostomy to estabish the model of reflux esophagitis，after 1 week，normal saline was given to sham operated group and model group by intragastric administration，Mosapride was given to western medicine control group，corresponding Chinese crude drug was given to each Chinese drugs group which was ZGCD，PHXD and ID.After 5 weeks of operation execute all the rats，calculate esophago coefficient，do histopathology observation and test gastrointestinal hormones GAS，MIL，VIP content of serum.Result:The three decoctions could significantly reduce serum GAS，MIL content，increased serum levels of VIP，and improved esophagus body and score of pathological tissue，ID is best.Conclusion:ZGCD，PHXD and ID can increase GAS and MIL level，and lower VIP level with reflux esophagitis in rats，and then enhance the lower esophageal sphincter pressure and stop the gastrointestinal contents into the esophagus，thus protecting the esophageal mucosa，play the important role to treat the reflux esophagitis.

Zhizi Gancao Chi Decoction;Dahuang Huanglian Xiexin Decoction;Reflux esophagitis;Gastrointestinal hormones

R285.5

B

1006-3250(2016)06-0768-03

2015-12-01

刘小河(1978-)，男，副主任医师，医学博士，从事中医药防治心血管疾病的临床与研究。