秦艽提取物对便秘大鼠血清及结肠组织NO、SOD、MDA、GSH水平的影响

牛明了,甄欢欢,周晓丽

(1河南省中医院，郑州450002；2 河南中医学院第三附属医院)



秦艽提取物对便秘大鼠血清及结肠组织NO、SOD、MDA、GSH水平的影响

牛明了1,甄欢欢1,周晓丽2

(1河南省中医院，郑州450002；2 河南中医学院第三附属医院)

摘要：目的探讨秦艽提取物对便秘大鼠血清及结肠组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)水平的影响。方法选择SPF级SD大鼠60只，随机均分为正常组、模型组、阳性组、秦艽高剂量组、秦艽低剂量组。制造大鼠便秘模型。造模成功后正常组、模型组生理盐水灌胃，阳性组麻仁软胶囊灌胃，秦艽低剂量组秦艽提取物0.9 g/kg灌胃，秦艽高剂量组秦艽提取物1.8 g/kg灌胃。给药治疗4周后，眼底静脉丛采血，分离血清备用。3 d后采用活性炭推进法测定肠道传输率的变化。脱颈椎处死大鼠，制作结肠组织匀浆，分别按试剂盒方法测定大鼠血清和结肠组织匀浆液中NO、MDA、SOD、GSH水平。结果模型组大鼠血清及结肠中NO、MDA水平与正常组相比上升，SOD、GSH水平下降(P均<0.05)；与模型组大鼠相比，秦艽高剂量组、低剂量组结肠组织中NO水平降低，且秦艽低剂量组结肠组织中GSH水平升高(P均<0.05)。结论秦艽提取物可能通过调控便秘大鼠模型的NO、MDA、SOD、GSH表达水平起到治疗便秘的作用。

关键词：便秘；秦艽提取物；丙二醛；谷胱甘肽；一氧化氮；超氧化物歧化酶；大鼠

大叶秦艽为龙胆科植物，其主要化学成分为生物碱类、环烯醚萜苷类、甾醇类等，具有抗炎、镇痛、镇静、解热、保肝等作用，可以祛风湿、止痹痛、退虚热、清湿热，主要用于风湿痹痛、筋脉拘挛、骨节酸痛等病症[1]。目前，便秘的发病机制尚未完全清楚，临床亦无特效治疗药物。2014年8～12月，我们建立大鼠便秘模型，探讨秦艽提取物对便秘大鼠模型血清及结肠组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)水平的影响。

1材料与方法

1.1实验动物7周龄SD大鼠60只，SPF级，雌雄各半，购自北京实验动物中心。饲养条件：雌雄分开饲养，每笼6只，室温(20±2)℃，相对湿度(60±10)%。所有大鼠自由进食进水。

1.2实验药物NO、SOD、MDA、GSH试剂盒均购自由上海荣盛生物制品研究所；盐酸吗啡购自东北制药有限公司；麻仁软胶囊、粉末活性炭购自天津药业有限公司。根据参考文献[2]制备大叶秦艽提取物，制备成每1 mL含秦艽0.5 g，根据实验动物换算方法，确定大鼠每日灌胃量低剂量为0.9 g/kg，高剂量为1.8 g/kg。

1.3动物分组及处理60只大鼠随机分为正常组、模型组、阳性(麻仁软胶囊)组、秦艽高剂量组、秦艽低剂量组，每组12只，雌雄各半。适应性喂养7 d后，除正常组每天皮下注射3.0 mg/kg蒸馏水外，其余组每天皮下注射盐酸吗啡3.0 mg/kg，连续注射40 d，1次/d，制作大鼠便秘模型。造模成功后，正常组、模型组蒸馏水10 mL/kg灌胃，麻仁软胶囊组麻仁软胶囊0.6 g/kg灌胃，秦艽低剂量组秦艽提取物0.9 g/kg灌胃，秦艽高剂量组秦艽提取物1.8 g/kg灌胃，给药体积10 mL/kg，1次/d。

1.4血清NO、MDA、SOD、GSH水平检测大鼠灌胃4周，禁食不禁水12 h，乙醚麻醉，毛细玻璃管从眼底静脉丛采血，分离血清，4 ℃保存。根据试剂盒说明书上的方法，对大鼠血清中NO、MDA、SOD、GSH水平进行测定。

1.5肠道传输功能测定大鼠灌胃4周，禁食不禁水采血后，适应性饲养3 d(期间大鼠不给药，正常喂养)。禁食不禁水1 d，使大鼠肠内容物充分排空，给以活性炭末悬浮液10 mL/kg灌胃，制备的悬浮液浓度为100 g/L，30 min后脱颈椎处死动物。立即解剖取出肠道，测量肠道全长及活性炭悬浮液在肠道内的推进长度。

1.6结肠组织NO、MDA、SOD、GSH水平检测 处死大鼠后，解剖分离出大肠，生理盐水冲洗干净，称取结肠组织0.3 g，以生理盐水研磨成10%的匀浆液。离心后提取上清液，-20 ℃保存。根据试剂盒说明书中的方法对大鼠结肠组织匀浆液中NO、MDA、SOD、GSH水平进行测定。

2 结果

2.1各组大鼠血清NO、MDA、SOD、GSH水平 大鼠灌胃4周后，每组各有2只死亡。与正常组相比，模型组大鼠血清中NO、MDA水平上升，SOD、GSH水平下降(P均<0.05)，表明大鼠便秘模型造模成功。与模型组相比，秦艽高剂量组NO水平降低，SOD、GSH水平升高(P均<0.05)。秦艽高剂量组、低剂量组比较，血清NO、MDA、SOD、GSH水平无统计学差异(P均>0.05)。见表1。

表1　各组大鼠血清NO、MDA、SOD、

注：与正常组相比，aP<0.05；与模型组相比，bP<0.05。

2.2各组大鼠肠道传输功能变化与正常组相比，模型组肠道传输功能减慢(P<0.05)；秦艽高剂量组与模型组相比，肠道传输功能加快(P<0.05)。见表2。

表2　各组大鼠肠道传输功能的变化±s)

注：与正常组相比，aP<0.05；与模型组相比，bP<0.05。

2.3各组大鼠结肠组织NO、MDA、SOD、GSH水平与正常组相比，模型组血清中NO、MDA水平上升，SOD、GSH水平下降(P均<0.05)。与模型组相比，秦艽高剂量组、低剂量组均能降低NO水平，升高GSH谷胱甘肽水平(P均<0.05)。秦艽高剂量组、低剂量组比较，大鼠结肠组织NO、MDA、SOD、GSH水平无统计学差异(P均>0.05)。见表3。

表3　各组大鼠结肠组织中NO、MDA、SOD、

注：与正常组相比，aP<0.05；与模型组相比，bP<0.05。

3讨论

秦艽具有抗炎、镇痛、镇静、解热等作用，在临床上广泛应用于治疗肛肠疾病[3,4]、风湿疾病、心脑血管疾病、神经系统疾病等。胡海华等[3]研究用防风秦艽汤加乳香、没药、大黄、桃仁、皂刺、穿山甲，以水煎服治疗肛裂，并用其药渣加水煮开坐浴，配以太宁膏涂抹，连续用药3 d后，对肛裂Ⅱ度患者有明显的减轻疼痛作用；杨风利等[4]研究防风秦艽汤对痔疮患者的影响，发现服用本方后，90%的患者便血症状消失，95%的患者症状有所改善。

便秘是临床上以排便次数减少、排便困难、粪便过硬等为主要表现的一种常见慢性消化道症状。由于硬粪的长期滞留和刺激，结肠黏膜常有不同程度的炎性改变，从而引发一系列的氧自由基反应和脂质过氧化反应[5]；便秘引起的炎症反应会产生大量的氧自由基，从而导致细胞膜不饱和脂肪酸脂质过氧化程度的加重[6,7]。

SOD、GSH能有效地清除细胞代谢过程中产生的氧自由基,终止自由基连锁反应[9]。SOD活性随着机体的老化而降低，故测定该酶活性可作为检测机体抗氧化能力和衰老的一个定量指标。机体内另一类具有清除氧自由基抗衰老作用的酶系是GSH，它对防止机体内氧自由基引起脂质过氧化反应特别重要。SOD、GSH等酶系在机体内发挥协同作用，具有减轻和阻断脂质过氧化反应、保护机体免受各类氧自由基的侵害、延缓衰老等作用，是评价细胞受损与否的重要指标[10]。所以，测定SOD、GSH等酶系是衡量药物抗氧化作用的重要方法之一。

本实验便秘模型组大鼠血清与结肠组织中NO、MDA水平高于正常组，SOD、GSH水平低于正常组，表明过氧化反应是便秘产生的重要机制之一。而秦艽高、低剂量组均能不同程度降低血清与结肠组织中NO、MDA水平，增加SOD、GSH水平，说明秦艽提取物能降低便秘模型大鼠的过氧化反应，减轻氧自由基的损害，缓解便秘症状。至于秦艽提取物不同剂量对大鼠血清和结肠组织NO、MDA、SOD、GSH水平影响是否存在差异还需要进一步研究。

参考文献：

[1] 国家药典委员会．中华人民共和国药典2015版[M]．北京：化学工业出版社，2015:253-254.

[2] 白莎，倪健，孔慧，等．秦艽的提取工艺研究[J]．中成药，2005，27(9)：1074-1075

[3] 胡海华，曹军.防风秦艽汤在肛肠科的应用[J].四川中医，2007， 25(7):87-88．

[4] 杨风利，余静．防风秦艽汤治疗内痔出血200例体会[J]．宁夏医学杂志，2005， 27(10)：716．

[5] 郑芝田．胃肠病学[M]．北京:人民卫生出版社，1986：475-477．

[6] 方允中，李文杰．自由基与酶-基础理论及其在生物学和医学中的应用[M] 北京：科学出版社，1989：213．

[7] 陈瑗，周玫．自由基医学[M]．北京：人民军医出版社，1991：106-296．

[8] Sharara-Chami RI, Zhou Y, Ebert S，et al. Epinephrine deficiency results in intact glucose counter-regulation, severe hepatic steatosis and possible defective autophagy in fasting mice[J]. Int J Biochem Cell Biol, 2012，44 (6)：905-913.

[9] 董亮，何永志，王远亮，等,超氧化物歧化酶SOD的应用研究进展[J]．中国农业科技导报，2013,15(5)：53-58

[10] Freeman BA，Crapo JD．Biology of disease:free radicals and tissue injury[J]．Lab Invest，1982，47(5)：412-426．

(收稿日期：2015-09-12)

中图分类号：R256.35

文献标志码：A

文章编号：1002-266X(2016)05-0027-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.05.010

基金项目：国家中医药管理局全国名老中医传承工作室项目(201347)。