冀北山区野生红柴胡组织培养与快速繁殖研究

李冬杰

（河北科技大学生物科学与工程学院，河北 石家庄 050018）

冀北山区野生红柴胡组织培养与快速繁殖研究

李冬杰

（河北科技大学生物科学与工程学院，河北 石家庄 050018）

以冀北山区野生药用植物红柴胡的腋芽为外植体，以MS+6-BA 1.5mg/L+IBA 0.5mg/L为诱导培养基，以MS+6-BA 1mg/L+IBA 0.5mg/L为增殖培养基，以1/2MS+IBA 0.5mg/L为生根培养基，采用渐进法炼苗，注重适时移栽，成活率达到90%以上，且苗齐苗壮。

红柴胡；腋芽；组织培养

红柴胡（B.scorzonerifolium Willd.）是为伞形科柴胡属多年生草本植物，为我国的传统中药，以根入药，主治感冒、发热、寒热等症状[1]。药理实验表明，柴胡皂苷具有镇静、镇痛、镇咳、抗炎、保肝、抗肿瘤等多种功效[2]。红柴胡主要分布在坝上高原，海拔1200m以上，光照充足，品质上佳，是冀北山区野生珍稀药用植物[3]。由于过度采挖，野生资源逐渐枯竭，在冀北山区仅零星分布，数量稀少。本文所建立的红柴胡组织培养和快速繁殖技术，对其资源保护及合理开发利用具有一定的指导意义。

1 材料

试验材料为野生红柴胡带腑芽茎段，采自河北省坝上地区。

2 方法

以MS为基本培养基。（1）诱导培养基：MS+6-BA 1.5mg/L+IBA 0.5mg/L。（2）增殖培养基：MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L。（3）生根培养基：1/2MS+ IBA 0.5mg/L。以上培养基中均加入3%的蔗糖和0.8%琼脂，pH5.8，培养温度为（24依2）℃，光照时间12h/d，光照强40μmol/m2·s左右。

2.1 芽的诱导

将腋芽茎用流水冲洗，在超净台里用75%酒精浸泡30s，无菌水漂洗2次，每次1～2min；再用升汞水溶液消毒8～10min，无菌水漂洗3次，每次1～ 2min。切成0.5cm的带芽茎段，接种到培养基（1）中进行芽诱导。5d后芽体开始萌动，经过20d芽可长出新叶。

2.2 增殖培养

将诱导培养获得的无菌芽转接至丛生芽增殖培养基（2）中培养，进行继代增殖。经过短暂的停滞期，3d后即能观察到新芽开始继续生长，茎段基部伴有少量愈伤组织生成，10d后开始从腋芽处分化出丛生芽，30d后丛生芽长到3～4cm，增殖系数可达3～5。

2.3 生根培养

将生长健壮的单苗接种到生根培养基中诱导生根，7d后可见叶片明显增大，开始有根形成，15d不定根长达2～3cm。20d每苗生根数5～6条，生根率91%。

2.4 炼苗与移栽

待根长到2～3cm时，将其从培养室中移到温度较低、自然光照的室内4～5d后，开瓶练苗2～3d再移栽。栽植前将培养土灭菌，苗栽后浇透水。初期加盖塑料薄膜保湿保温，湿度保持在80%，温度控制在（18依2）℃，每日自然光照10h。7d后揭去薄膜，移栽14d后统计，成活率90%以上。成苗后移栽至苗圃。

3 讨论

目前，有关柴胡的组织培养研究尽管已有报道，但仍有不少问题需深入研究[4]。本文对以下几个方面进行了改进，首先在外植体的选择上，尽管柴胡的外植体选择较广泛，包括叶片、叶柄、茎段、腋芽都可以进行快繁[5]，但选用分化能力最强的外植体对组培的成功很关键。本实验直接采用带芽茎段，其芽的诱导启动快、芽增殖效果也好。另外，在外植体的选择问题上，还注重了采用同一基因型的植株作为外植体。

在柴胡快繁的激素配比方面，多数采用的是细胞分裂素6-BA、KT，与生长素NAA、2，4-D和IAA的配比[6-7]。本实验采用了6-BA与IBA的组合，结果显示其对芽的诱导、芽增殖效果均佳。

在柴胡适时移栽研究方面，有报道成活率在95%以上，移栽2～3周后，可长出叶片[7]。本实验采用了渐进法，即闭瓶炼苗逐渐到开瓶炼苗，此时恰好根长到2～3cm时，苗高2～3cm时，移栽时机最适，成活率能达到90%以上，且苗齐苗壮，整体提高了组培的效率。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：中医药科技出版社，2010：263-264.

［2］吕晓慧，孙宗喜，苏瑞强，等.柴胡及其活性成分药理研究进展［J］.中国中医药信息杂志，2012，19（12）：105-107.

［3］王玉庆，牛颜冰，秦雪梅.野生柴胡资源调查［J］.山西农业大学学报（自然科学版），2007，27（1）：103-107.

［4］胡海英，吴晓玲.银柴胡离体培养与毛状根诱导技术初步研究［J］.生物技术进展，2015，5（6）：436-437.

［5］徐洁森，赵立子，魏建和.北柴胡花药愈伤组织高效再生体系的建立［J］.中国中药杂志，2013，38（21）：3661-3665.

［6］郝建平，徐丽霞，杨东方.北柴胡愈伤组织诱导、分化及不定芽增殖条件研究［J］.中草药，2008，39（8）：1234-1238.

［7］姚智，高文远，李克峰.柴胡愈伤组织生长和不定根诱导的研究［J］.中草药，2007，38（2）：275-278.

Study on Tissue Culture and Rapid Propagation of B.scorzonerifolium Willd.in Mountainous Area of Northern Hebei Province

LI Dong-jie
（Department of Biological Science and Engineering,Hebei University of Science and Technology,Shijiazhuang，Hebei 050018）

To establish the tissue culture and rapid propagation system of the wild medicinal plant B.scorzonerifolium Willd.in the mountain area of northern Hebei,the axillary buds were used as the explants,and the suitable medium for induction, propagation and rooting was selected.The results showed that the seedlings survival rate was more than 90%,and the seedlings were vigorous through asymptotic method training and transplanting in suitable time when the inducing,proliferation and rooting culture medium was MS+6-BA 1mg/L+IBA 0.5mg/L，MS+6-BA 1mg/L+IBA 0.5mg/L and 1/2MS+IBA0.5 mg/L respectively.

B.scorzonerifolium Willd；Tuber with buds；Tissue culture

S567.79

A

1002-3356（2016）04-0034-02

2016-06-22

资助：河北省科技支撑计划（14237503D）

李冬杰（1966-），硕士，教授，主要从事生物技术方面的教学与科研工作。E-mail：ldj618@I63.com。