胃癌患者外周血骨髓干细胞水平变化的初步研究

聂鲁愚，朱海涛，谢敏

(1.南京医科大学鼓楼临床医学院 普外科，江苏 南京　210008； 2.马鞍山十七冶医院 普外科，安徽 马鞍山　243000； 3.江苏省肿瘤医院 普外科，江苏 南京　210009)



胃癌患者外周血骨髓干细胞水平变化的初步研究

聂鲁愚1，2，朱海涛3，谢敏1

(1.南京医科大学鼓楼临床医学院 普外科，江苏 南京210008； 2.马鞍山十七冶医院 普外科，安徽 马鞍山243000； 3.江苏省肿瘤医院 普外科，江苏 南京210009)

[摘要]目的:比较胃癌患者与对照者之间外周血骨髓干细胞水平的差异及其在胃癌患者手术前后的变化，为胃癌诊治提供新的诊断指标。方法:收集12例胃癌患者术前以及术后第7天的外周血，以同期12例腹腔镜胆囊切除患者的外周血作为对照组。采用流式细胞术测定骨髓干细胞占单核细胞的百分比，观察胃癌患者循环骨髓干细胞水平以及根治术前后循环骨髓干细胞水平的变化。结果:外周血骨髓干细胞水平胃癌组明显高于非胃癌的对照组(P<0.05)，根治性胃癌切除手术后明显下降，差异有统计学意义(P<0.05)。 结论:骨髓来源干细胞在癌症生长、侵袭、转移等过程中起着重要作用，而外周血骨髓干细胞水平有望成为胃癌诊断、评估治疗疗效的重要参考指标。

[关键词]胃癌； 外周血； 骨髓干细胞

1971年Folkman[1]首次提出了肿瘤生长依赖血管新生的假说，1997年Asahara等[2]首次从外周血分离出一类源自骨髓的干细胞，它能够分化为成熟的血管内皮细胞从而构建新生血管。从此骨髓来源干细胞在人类癌症生长、侵袭、转移的潜在作用及临床意义得到大量关注。本研究对胃癌患者手术前后循环骨髓干细胞水平进行检测，做对照研究，探讨循环骨髓干细胞水平测定在胃癌诊断、疗效评估中的作用，以期推动胃癌的诊治水平。

1资料和方法

1.1一般资料

病例系鼓楼医院普外科2015年3月至2015年6月行胃癌根治性切除手术的患者，共12例，术前均未行放化疗，术后经病理学证实为胃癌。选择同期的择期腹腔镜胆囊切除患者12例作为对照组。所有患者均排除他汀类药物使用史，均无冠心病、脑血管病史。所有患者均自愿并签署知情同意书。

1.2试剂

鼠抗人CD45- PECyTM7、CD34- FITC、VEGFR2- Alexa Fluor 647、红细胞裂解液购自BD Biosciences公司，单克隆抗体CD133- PE购自Miltenyi Biotec公司，BD FACS Aria Ⅱ型流式细胞仪。

1.3研究方法

流式细胞仪检测循环骨髓干细胞占外周血单个核细胞百分比：两组患者均清晨抽安静状态下空腹外周静脉血2 ml，置于EDTA抗凝管中，4 ℃保存，2 h内送检。细胞表面标志选用CD45-、CD34+、CD133+、 VEGFR2+。取干净试管分别加抗体：CD45 3 μl,CD34、CD133各5 μl，VEGFR2 10 μl，同型对照组只加CD45 3 μl。加入50 μl抗凝血，震荡混匀避光孵育20 min。加入1 ml红细胞裂解液，震荡混匀避光10 min后离心(1 500 r·min-1，共5 min)。弃上层液体，加1 ml磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)，再次震荡混匀后离心(1 500 r·min-1，共5 min)，再次倒掉上层液体，加入200 μl PBS后上机检测。胃癌组患者术后第7天再次检测循环骨髓干细胞水平。

1.4统计学处理

2结果

胃癌组与对照组循环骨髓干细胞占外周血单个核细胞百分比分别为(0.046485±0.033518)%和(0.023104±0.015192)%，两组比较差异有统计学意义(t=2.201，P=0.039)。

胃癌组患者手术前后循环骨髓干细胞占外周血单个核细胞百分比分别为(0.046485±0.033518)%和(0.023864±0.011903)%，两组比较差异有统计学意义(t=2.880，P=0.015)。

3讨论

胃癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，在我国胃癌的发病率已位居恶性肿瘤发病率的第2位，死亡率居第3位[3]。我国早期肿瘤发现率<5%，绝大多数患者初诊时已是进展期，5年生存率仅为30%～50%[4]。CA242、CA19- 9等经典的肿瘤标志物在胃癌诊断、治疗效果、复发转移中的判断作用一直备受争议。

血管新生是肿瘤的重要特性之一，研究[5]表明，骨髓干细胞在肿瘤血管发生中起主要的决定性作用。外周血中骨髓来源干细胞浓度已成为一个有前途的和有效的检测标志，它可以更准确、更直接地反映肿瘤血管生成活性。Ho等[6]比较了80例肝细胞癌和14名健康受试者的循环骨髓干细胞水平，发现其在肝癌患者中显著升高。近来大量研究显示，外周循环中骨髓干细胞水平在肺癌[7]、卵巢癌[8]、肾癌[9]、结肠癌[10]中明显升高。但也有研究[11]认为，恶性肿瘤患者与正常人循环骨髓干细胞水平无统计学差异。由于许多混杂因素如心血管疾病、糖尿病、生活方式(包括吸烟、锻炼身体等)、口服他汀类药物等可能会影响研究结果，因此，验证外周循环中骨髓来源干细胞水平的诊断价值，对癌症患者和健康对照组的选择标准须严格。在本研究中，我们选择的患者均排除他汀类药物使用史，均无冠心病、脑血管病史。

Yang等[9]发现，肾癌患者术后3个月的循环骨髓干细胞水平明显低于术前水平，但也有研究发现癌症患者术后循环骨髓干细胞浓度与术前水平比较无明显变化[10]。这种矛盾的结果可能是由多种因素造成的，如手术后骨髓中干细胞动员并向手术损伤部位聚集、手术损伤引起的应激反应等。因此，本研究均在术后第7天抽血复查循环骨髓干细胞水平，以避免手术创伤对研究结果的影响。

本研究结果显示，胃癌患者循环骨髓干细胞水平较对照组明显升高，根治性切除术后胃癌患者循环骨髓干细胞水平明显下降。说明循环骨髓干细胞水平可以作为诊断胃癌及判断胃癌手术治疗效果的一个重要指标。然而由于循环骨髓干细胞水平受多种因素影响,而流式细胞技术又相对复杂，限制了流式细胞技术检测循环骨髓干细胞水平在临床中的应用；另外循环骨髓干细胞水平与肿瘤浸润程度、放化疗效果及远期生存率等指标是否相关，尚需进一步研究证实。

[参考文献]

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Study of circulating bone marrow stem cells content change in patients with gastric cancer

NIE Lu- yu1，2，ZHU Hai- tao3，Xie Min1

(1.DepartmentofGeneralSurgery，DrumTowerHospital，NanjingMedicalUniversity，Nanjing210008，China2.DepartmentofGeneralSurgery，MaanshanShiqiyeHospital，Maanshan243000，China； 3.DepartmentofGeneralSurgery，JiangsuCancerHospital，Nanjing210009，China)

[Abstract]Objective： To compare the levels of circulating bone marrow stem cells between patients with gastric cancer and controls，observe its change in gastric cancer patients before and after radical resection in order to provide a new diagnostic index for the diagnosis and treatment of gastric cancer. Methods: Peripheral blood of 12 patients with gastric cancer before operation and 7 d after operation were collected. The peripheral blood of 12 patients with laparoscopic cholecystectomy were used as control group. The percentage of bone marrow stem cells of monocyte was detected by flow cytometry，the level of circulating bone marrow stem cells and its change in patients with gastric cancer before and after radical resection were observed. Results: The level of the circulating bone marrow stem cells in the gastric cancer group was significantly higher than that of control group(P<0.05)，and it was significantly decreased after radical resection(P<0.05). Conclusion: Bone marrow stem cells play a great role in cancer growth，invasion and metastasis，and the level of the circulating bone marrow stem cells has the important reference index for the diagnosis and treatment of gastric cancer．

[Key words]gastric carcinoma; peripheral blood; bone marrow stem cells

doi：10.3969/j.issn.1671- 6264.2016.02.018

[中图分类号]R604

[文献标识码]A

[文章编号]1671- 6264(2016)02- 0226- 03

[通信作者]谢敏E- mail：M- xie0828@medmail.com.cn

[作者简介]聂鲁愚(1979-)，男，安徽马鞍山人，主治医师，在读硕士研究生。E- mail：28640967@qq.com

[基金项目]江苏省自然基金(BK20131438);江苏省人事厅第十一批次六大人才高峰项目基金(WSW- 036，WSW- 038);南京医科大学附属肿瘤医院院基金资助项目

[收稿日期]2015- 10- 07[修回日期] 2015- 11- 27

[引文格式] 聂鲁愚，朱海涛，谢敏.胃癌患者外周血骨髓干细胞水平变化的初步研究[J].东南大学学报:医学版，2016,35(2):226- 228.

·论著·