快速准确术中新鲜标本冰冻切片方法探讨

2016-03-09余春艳梅娟

淮海医药 2016年3期

余春艳，梅娟

快速准确术中新鲜标本冰冻切片方法探讨

余春艳，梅娟

[摘要]目的：探讨如何快速准确的做好术中冰冻切片。方法：采用Leica-CM1950型恒冷切片机和Leica-819一次性刀片对2005-2015年手术切下来的30 000多例新鲜标本进行常规冰冻切片取材、冷冻、切片、染色后封片。所用试剂的组成为：AAF混合固定液(乙醇、乙酸、中性甲醛)、苏木素染液、伊红染液、梯度乙醇和二甲苯。结果：在临床手术医生和病理科的相互配合下，冰冻切片做的质量又好又快。结论：要想快速准确的做好术中冰冻切片，临床手术医生和病理科的相互配合是必不可少的，另外病理技术人员在日常的工作中要不断的总结经验，把冰冻切片质量做到最好，才能为病理诊断的准确性提供保障。

[关键词]冰冻切片；制片；病理诊断

术中快速冰冻是病理科非常重要的一项工作，它是病理科技术与水平的体现，也是一个医院综合医疗能力的体现，在临床诊疗中起了极其重要的作用。术中快速冰冻是通过对手术切下来的新鲜标本进行快速冷冻切片来确定病变性质的一个过程。如何能快速准确的做好术中冰冻切片，我们在长期的临床工作中总结了一些经验，现报告如下。

1临床手术医生应注意事项

1.1要在术前与患者及其家属做充分的沟通告之他们什么是术中快速冰冻，以及做的目的是什么。由于冰冻诊断受时间和条件的限制，并不是所有冰冻的诊断率都能达到100%，会出现当时无法诊断需要等待第二天的石蜡结果，甚至有些石蜡结果也不能做出诊断，还需要结合免疫组化标记结果的，这些情况都应向患者家属告之。冰冻发报告时间为30 min左右，绝大部分报告都可以在这个时间内发出，但如果遇到诊断具有一定难度需要重新多次取材的标本，时间肯定会延长，一旦出现这种情况，请患者家属不要焦虑，相互理解并且耐心等待。

1.2不要把同一个患者的标本分为两份送到不同的病理科这种情况看似不会发生，实际上在工作中就曾遇到过，不仅加重患者经济负担，也给诊断带来难度。此外送检标本不应过小，过小组织切片困难。组织块一定要新鲜，忌浸入乙醇、4%中性甲醛固定液，避免过多的水分，防止组织脱水、冰晶形成和组织变形[1]。对于应高度注意的病变部位，临床医生最好用扎线的方法标记出来以节省取材时间。

1.3术中冰冻切片申请单一定要规范书写一定要用黑或蓝黑笔认真工整填写，姓名、性别、年龄、科室、床位、住院号、病变部位、临床诊断尤其要准确填写。送检部位要标记明确，如果是单侧，左与右一定要书写清楚。如果是双侧的话，一定要用系线的方法来加以区分。但是线头不能扎太多，以免影响取材。例如系线一侧如果为左侧，那么申请单上一定要写上“系线者为左侧”。并且“左”与“右”一定要书写清楚。此外临床病史一定要填写清楚，对于患有“乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病、结核”等传染病的患者，一定要在冰冻申请单上填写清楚，并用特别醒目的字体标示出来，以便于病理工作者做好防护。对于送检部位比较多的标本，比如肿瘤组织的切缘，每一个切缘都应单独区分装袋，并且袋上标签都应详细填写病人信息，不可填写类似于“上、下、左、右”等字样，以免和其他标本混淆。袋口一定要扎紧向上放，以防组织脱落。

2病理科应注意事项

2.1取材仔细核对标本袋上信息与冰冻申请单信息是否吻合，如果遇到信息不吻合的标本要立刻与手术室医生联系。取材时应用锋利的刀，避免用钝刀前后拉动或用力挤压组织，引起组织结构的变形和损伤。对于未做扎线标记的肿块一定要多剖几个面，例如甲状腺微小癌肿块，如不仔细极易漏取。对于医生扎线的部位要重点取扎线处，但一定要剔除线头，因为线头会使组织块切不完整，影响制片、诊断。组织块要平整规则，避开坏死出血区，尽量剔除脂肪、毛发、硬骨、钙化物[2]，最后组织块大小以1.5 cm×1.5 cm×(0.3～0.4)cm为宜，过厚或过大都会延长组织冷冻时间，而过薄或过小会不利于切片。

2.2冷冻将冰冻机内温度调到适合于该组织切片的度数范围内，一般在-18℃～-25℃内变动[3]。不同组织标本适宜切片温度如下：甲状腺-20℃～-18℃，含脂肪的乳腺-30℃～-22℃，脂肪组织-30℃以下，卵巢、胆囊、胃壁-22℃～-20℃[4]。首先在冷冻托上滴适量普通胶水或OCT(组织包埋剂)，再把组织放于其中央置于冰冻机内。调整好厚度即开始切片，含淋巴组织结构的组织一般切3 μm,甲状腺、乳腺、肝脏等切4 μm，胃、肠、子宫、卵巢等可切4～5 μm,脂肪组织切5 μm以上[5]。最后由于冷冻机内温度过低，长时间的切片有可能会冻伤手，所以在做好工作的同时，也应做好自我安全防护。

2.3切片当组织块经冷冻后颜色发白时，或者用镊子触碰发硬时即可以切片。切片时要缓慢匀速、用力均匀。含皮肤和钙化区应向上放置，软组织向下放。对于囊壁含乳头或息肉的组织，一定要把乳头或息肉大部分暴露时才可以切片，比如甲状腺乳头状癌、胆囊内壁息肉、卵巢乳头状囊腺瘤/癌，如果只切出囊壁而未切出乳头或切不全就容易误诊。另外对于切片需要特别注意的地方，医生最好能特别交待一下技术员，比如微小癌的肿块，经过冷冻后颜色会发白，癌与周围正常组织就很难区分，在看不清楚的情况下就有可能会将癌组织切掉。此外刀片一定要锋利，锋利的刀片切出的组织块完整、厚薄均匀，钝的刀片切出的组织易卷曲、破碎、布满刀痕，显微镜下根本无法观察。

2.4固定切下的组织迅速放入AAF混合固定液(乙醇、乙酸、中性甲醛)中充分固定。

2.5染色首先入新配制的Harri’s(哈瑞士)苏木精染色液染色2～4 min[6]，但在染之前一定要把表面的结晶给捞掉，否则大量的结晶会附着在组织上影响诊断。然后用体积分数1%盐酸乙醇分化，水洗后放入40℃～60℃热水中蓝化。然后置入5～10 g/L伊红染液10 s，水洗，体积分数80%～100%梯度乙醇脱水至二甲苯[4]。

2.6封片封片时中性树胶不要滴的太多，过多会溢出玻片之外，影响美观，过少组织就不能完全覆盖，没有折光率，无法诊断。最后贴上标签即可诊断。

[参考文献]

[1]侯巧艳，何雯，张美艳，等.不同组织的快速冰冻切片技术探讨[J].广西医学，2008,30(10):1560.

[2]赵曼曼，张新新.快速冷冻切片技术的经验总结[J].临床合理用药，2010,3(7):32.

[3]王伯沄，李玉松，黄高昇，等.病理学技术[M].北京:人民卫生出版社，2000:88.

[4]许平，陈奎生，李晟磊，等.快速冰冻切片制备方法的改进[J].郑州大学学报：医学版，2010，45(2):241-243.

[5]繆勇建.如何做好术中冰冻切片[J]．广西医科大学学报，2007，9(24)：343．

[6]许良中．实用肿瘤病理方法[M]．上海：上海医科大学出版社，1997：73．

(收稿日期：2015-12-23)

[中图分类号]R 361.2

[文献标识码]A

[文章编号]1008-7044(2016)03-0321-02